淫羊藿苷在制备治疗皮炎药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了淫羊藿苷的医药新用途，具体涉及淫羊藿苷在制备抗皮炎药物中的应用。本发明专利技术采用TNF-α/IFN-γ刺激皮肤角质细胞(HaCaT细胞)作为皮炎体外模型，并给予淫羊藿苷干预，结果显示：1.淫羊藿苷可有效抑制TNF-α/IFN-γ诱导的HaCaT细胞炎症因子(IL-6、IL-1β和IL-8)水平的升高；2.淫羊藿苷拮抗皮肤炎症的作用与抑制磷酸化p38、磷酸化ERK的表达有关；3.淫羊藿苷拮抗皮肤炎症的作用与增加皮肤角质细胞皮质醇分泌有关；所述的淫羊藿苷可制备治疗皮炎的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属生物医学领域，涉及中药有效成分淫羊藿苷的新的药用用途，具体涉及淫羊藿苷在制备治疗皮炎药物中的用途。
技术介绍
现有技术公开了皮炎是一种常见皮肤病，包括夏季皮炎、脂溢性皮炎、日光性皮炎、药物性皮炎、接触性皮炎、激素依赖性皮炎、神经性皮炎等，其临床表现为，可出现皮肤红肿、瘙痒、脱皮、变厚等现象。从天然药物中筛选活性成分是一直是抗皮炎药物研发的热点领域。淫羊藿苷存在于淫羊藿药材中，其化学结构式如下：有研究发现，淫羊藿苷可以抑制皮肤黑素生成，用于皮肤增白。然而目前关于淫羊藿苷在抗皮炎方面的用途未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供中药有效成分淫羊藿苷的新的药用用途，具体涉及淫羊藿苷在制备治疗皮炎药物中的用途。本专利技术是基于以下技术方案实现的。采用TNF-α/IFN-γ刺激皮肤角质细胞(HaCaT细胞)作为皮炎体外模型，并给予淫羊藿苷干预，结果显示：1.淫羊藿苷可有效抑制TNF-α/IFN-γ诱导的HaCaT细胞炎症因子(IL-6、IL-1β和IL-8)水平的升高。2.淫羊藿苷抗皮炎的作用与抑制磷酸化p38、磷酸化ERK的表达有关。3.淫羊藿苷拮抗皮肤炎症的作用还与增加皮肤角质细胞分泌皮质醇有关。所述的淫羊藿苷可制备治疗皮炎的药物。附图说明图1为0.5、1h、2h、4h淫羊藿苷细胞活力试验测定结果，其中，淫羊藿苷浓度从5μM至150μM，均未发现对HaCaT细胞具有细胞毒性。图2-1显示了淫羊藿苷各浓度对HaCaT细胞分泌IL-6的抑制作用，其中，TNF-α/IFN-γ20ng/mL刺激HaCaT细胞24h后，细胞上清IL-6浓度较正常组明显升高，各浓度淫羊藿苷干预后，细胞上清中IL-6均降低，其中淫羊藿苷高剂量组与氢化可的松阳性对照组IL-6显著降低，#p<0.05vs正常组；*p<0.05vsTNF-α+IFN-γ组，ME，正常组；T，TNF-α；I,IFN-γ；ICA,淫羊藿苷；HC,氢化可的松。图2-2、2-3显示了淫羊藿苷中、高剂量可明显抑制TNF-α/IFN-γ(20ng/mL)诱导的HaCaT细胞分泌IL-1β(p<0.05)、IL-8(p<0.05)，抗炎疗效显著；其中，图2-2.是淫羊藿苷各浓度对HaCaT细胞分泌IL-1β的抑制作用，其中，#p<0.05vs正常组；*p<0.05vsTNF-α/IFN-γ组。ME，正常组；T，TNF-α；I,IFN-γ；ICA,淫羊藿苷；HC,氢化可的松；图2-3是淫羊藿苷各浓度对HaCaT细胞分泌IL-8的抑制作用，其中，#p<0.05vs正常组；*p<0.05vsTNF-α/IFN-γ组，ME，正常组；T，TNF-α；I,IFN-γ；ICA,淫羊藿苷；HC,氢化可的松。图3是淫羊藿苷对MAPKs信号通路的影响，其中，ICA,Icariin；T，肿瘤坏死因子-α；I，干扰素γ；ME，正常组，#p<0.05vs正常组；*p<0.05vsTNF-α/IFN-γ组。具体实施方式实施例1：淫羊藿苷抗皮炎的体外试验一、材料与方法1.细胞株：人角质细胞株(HacaT)用含有10％胎牛血清的DMEM培养基在37℃、体积分数为5％CO2、完全饱和湿度条件下常规培养，48h更换培养基，细胞生长达饱合状态时，用0.25％胰蛋白酶+0.02％EDTA消化传代，2～3d传代1次，实验选用对数生长期细胞。2.淫羊藿苷细胞毒性的检测：调整HacaT细胞株细胞悬液浓度为1×105/mL，加入96孔培养板内，每孔100μL，置37℃5％CO2孵箱培养24h。吸除旧培养基，分别加入含淫羊藿苷的DMEM培养基(药物浓度为5μM，10μM，30μM，50μM，70μM，100μM，150μM)，并设空白对照组和调零组，每组均设3复孔，继续培养24h。加入10μLWST-8溶液,继续培养0.5h、1h、2h、4h。在450nm处检测各孔的吸光值。细胞增殖抑制率＝〔1-(加药组OD平均值-调零孔OD平均值)/(空白对照组OD平均值-调零孔OD平均值)〕×100％。实验重复3遍以上。3.ELISA法检测HacaT细胞IL-6、IL-8、IL-1β水平调整HacaT细胞株细胞悬液浓度为1×105/mL，加入48孔培养板内，每孔400μL，置37℃5％CO2孵箱培养24h。吸除旧培养基，换成无血清培养基，并按以下分组方式给予刺激和干预：空白对照组、单纯TNF-α+IFN-γ组(各20ng/ml)、TNF-α+IFN-γ+淫羊藿苷低、中、高剂量组(1、10、100μM)、、TNF-α+IFN-γ+氢化可的松组(0.01μM)、单纯淫羊藿苷(100μM)组。继续培养24h，取细胞培养上清液。采用ELISA法，按照试剂盒说明，检测上清液IL-6、IL-8和IL-1β的含量。4.ELISA法检测HacaT细胞皮质醇水平细胞处理及分组同上，采用ELISA法，按照试剂盒说明，检测上清液皮质醇的含量。5.HacaT细胞MAPK通路的检测调整HacaT细胞悬液浓度为1×106/mL，将细胞接种于6孔板，每孔1ml。待细胞生长达融合状态后，吸弃原培养基，更换无血清培养基。并按以下分组方式给予刺激和干预：空白对照组、单纯TNF-α+IFN-γ组(各20ng/ml)、TNF-α+IFN-γ+淫羊藿苷100μM组。TNF-α+IFN-γ刺激30min和60min后收集细胞，抽提蛋白，定量后行SDS-PAGE电泳分离，待电泳完毕后转印至硝酸纤维素膜，在室温下封闭，加入p-p38,p38,p-JNK,p-ERK,ERK和β-actin一抗,4℃过夜，加入HRP标记二抗,室温反应1h,增强化学发光法显色,X线底片曝光显影。二、结果显示：淫羊藿苷细胞毒性试验：CCK-8法测定淫羊藿苷对HaCaT细胞的细胞毒性，各时间段测试结果显示从5μM至150μM浓度淫羊藿苷均为发现细胞毒性，各浓度淫羊藿苷均有轻度促进细胞增殖的作用(如图1所示)；淫羊藿苷对TNF-α/IFN-γ诱导的细胞因子分泌的抑制作用，如图2-1所示，TNF-α/IFN-γ20ng/mL刺激HaCaT细胞24h后，细胞上清IL-6浓度较正常组明显升高，各浓度淫羊藿苷干预后，细胞上清中IL-6均降低，其中淫羊藿苷高剂量组与氢化可的松阳性对照组IL-6显著降低，p<0.05。如图2-2、2-3所示淫羊藿苷中、高剂量可明显抑制TNF-α/IFN-γ(20ng/mL)诱导的HaCaT细胞分泌IL-1β(p<0.05)、IL-8(p<0.05)，抗炎疗效显著；淫羊藿苷抑制HaCaT细胞P38MAPK、ERK的磷酸化反应：为明确淫羊藿苷直接抗炎作用是否与MAPKs信号通路有关，本实施例采用westernblot方法检测MAPKs三条主要的信号通路在药物干预前后的变化，在参照文献基础上,选择了2个时间点(30min、60min),结果如(图3)所示，TNF-α/IFN-γ(均为20ng/mL)30分钟即可明显诱导p38、ERK磷酸化反应，淫羊藿苷100μM在30min、60min均可明显抑制p38、ERK的磷酸化本文档来自技高网...

【技术保护点】
淫羊藿苷在制备治疗皮炎药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.淫羊藿苷在制备治疗皮炎药物中的用途。2.一种治疗皮炎的药物组合物，其特征在于，由作为活性成分的淫羊藿苷，以及药物学上可接受的载体组成。3.按权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：董竞成，孔令雯，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：上海;31