一种用于肿瘤辅助治疗的细胞制剂制造技术

本发明专利技术公开一种用于肿瘤辅助治疗的细胞制剂，主要含有DC细胞、CIK细胞、NK细胞、CTL细胞、质量浓度为1.2‑1.5％的人血白蛋白、胸腺五肽与生理盐水；其中，上述细胞总数量为1.5×108‑3×108个/ml；本发明专利技术提供细胞制剂中复合DC细胞、CIK细胞、NK细胞与CTL细胞，多种细胞相互作用，该细胞制剂用于肿瘤辅助治疗，可使治疗后患者的生活质量明显提高，患者的生存期也大大延伸；细胞制剂中含有人血白蛋白、胸腺五肽与生理盐水，可以保护细胞，通过维持渗透压，确保细胞的活性。

Cell preparation for auxiliary treatment of tumor

The invention discloses a cell preparation for tumor treatment, mainly containing DC cells, CIK cells, NK cells, CTL cells, the concentration of Human Albumin, five thymus peptide with saline 1.2 1.5%; among them, the total number of cells was 1.5 x 108 3 x 108 /ml; the invention provides cells in the preparation of composite DC cells, CIK cells, NK cells and CTL cells, a variety of cell interactions, the cell preparations for tumor treatment, patients can significantly improve the quality of life after treatment, survival is greatly extended; cell preparations containing Human Albumin, thymic peptide five and normal saline can protect cells by maintaining the osmotic pressure, ensure cell activity.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞制剂
，涉及一种用于肿瘤辅助治疗的细胞制剂。
技术介绍
现代肿瘤综合治疗包括：直接针对肿瘤组织的治疗和与之相配合的辅助治疗。前者有：手术治疗、化学治疗、放射治疗、介入治疗、基因治疗及微波、射频、冷冻治疗等。那么，肿瘤辅助治疗就是针对上述直接切除肿瘤组织或破坏肿瘤细胞而言的治疗。从广义上讲肿瘤辅助治疗的内容很多，如肿瘤手术前后的辅助化疗、化疗时止吐治疗、化疗时保护肝肾功能、保护骨髓组织的治疗、放射治疗时增敏治疗、肿瘤病人各种并发症的治疗、肿瘤病人各种护理治疗、免疫治疗、中药治疗、中医扶正固本治疗、心理治疗、晚期癌症的镇痛治疗、气功治疗等等，这些都可以看成是肿瘤辅助治疗的范畴。肿瘤是一种全身性的慢性疾病，病人治疗要有长远而全面的考虑，病情的不同阶段有不同的治疗方法，循征医学认为治疗肿瘤既要消灭肿瘤组织，又要最大限度保护好整个机体组织。虽然肿瘤辅助治疗有时处于次要地位，但是肿瘤辅助治疗决不是可有可无的治疗，一定时期的肿瘤辅助治疗还是非常重要的治疗，肿瘤治疗和肿瘤辅助治疗只是相对而言的，两者是辨证统一的关系，相辅相成的关系。现有技术中应用的肿瘤生物治疗多为一类免疫细胞制剂，如CIK细胞，NK细胞，这些细胞制剂其对于肿瘤的治疗有一定效果。但目前针对于肿瘤辅助治疗的细胞制剂还不能满足市场需要。
技术实现思路
为了弥补目前细胞制剂在肿瘤辅助治疗方面的不足，本专利技术提供一种用于肿瘤辅助治疗的细胞制剂。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种用于肿瘤辅助治疗的细胞制剂，含有DC细胞、CIK细胞、NK细胞、CTL细胞、质量浓度为1.2-1.5％的人血白蛋白、胸腺五肽与生理盐水；其中，上述细胞总数量为1.5×108-3×108个/ml；该细胞制剂由下述步骤制得：1)制备DC细胞：用含有rhGM-CSF和rhIL-4的RPMI-1640培养液培养分离的外周血单个核细胞，收集非贴壁细胞，并加入γ-干扰素培养，然后移入经CD3McAb包被过的培养瓶中，加入rhIL-2继续培养两周，收集细胞；2)制备NK细胞：取步骤1)中收集到的非贴壁细胞，接种于培养瓶内使用GT-T561培养基重悬细胞，向培养瓶的培养液中添加rhIL-2和自体血浆上清，置于37℃，5％CO2培养箱中培养两周，收集细胞；3)制备CIK细胞：取步骤1)收集的悬浮液，分别加入AIM-V无血清培养基20ml，将悬浮的初始T细胞移入，置于37℃，5％CO2细胞培养箱中培养，次日，补充50％的培养基，将每瓶CIK细胞的一半量移出，作为CTL培养，剩余半量继续培养两周，收集细胞；4)制备CTL细胞：向步骤3)移出的一半量CIK细胞，加入DC疫苗，使CIK和DC比例控制为4：1，继续培养3天获取CT细胞；5)将DC细胞、CIK细胞、NK细胞、CTL细胞分别进行洗涤、离心得到细胞悬液；将过滤后的细胞悬液混合，并加入质量浓度为1.2-1.5％的人血白蛋白、胸腺五肽与生理盐水，得到细胞制剂。所述的培养液中rhGM-CSF和rhIL-4的终浓度均为500-1000U/ml。所述的培养液中rhIL-2的终浓度为500-1000IU/ml。所述的自体血浆上清的体积为培养液体积的10％。所述的所述的离心的条件为2000rpm，离心15min。本专利技术的有益效果：本专利技术提供的用于肿瘤辅助治疗的细胞制剂中复合DC细胞、CIK细胞、NK细胞与CTL细胞，多种细胞相互作用，可使治疗后患者的生活质量明显提高，患者的生存期也大大延伸；细胞制剂中含有人血白蛋白、胸腺五肽与生理盐水，可以保护细胞，通过维持渗透压，确保细胞的活性。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例11)制备DC细胞：用含有浓度均为1000U/mlrhGM-CSF和rhIL-4的RPMI-1640培养液培养分离的外周血单个核细胞，收集非贴壁细胞，并加入γ-干扰素培养，然后移入经CD3McAb包被过的培养瓶中，加入浓度为500IU/mlrhIL-2继续培养两周，收集细胞；2)制备NK细胞：取步骤1)中收集到的非贴壁细胞，接种于培养瓶内使用GT-T561培养基重悬细胞，向培养瓶的培养液中添加浓度为1000IU/mlrhIL-2和体积为培养液体积的10％自体血浆上清，置于37℃，5％CO2培养箱中培养两周，收集细胞；3)制备CIK细胞：取步骤1)收集的悬浮液，分别加入AIM-V无血清培养基20ml，将悬浮的初始T细胞移入，置于37℃，5％CO2细胞培养箱中培养，次日，补充50％的培养基，将每瓶CIK细胞的一半量移出，作为CTL培养，剩余半量继续培养两周，收集细胞；4)制备CTL细胞：向步骤3)移出的一半量CIK细胞，加入DC疫苗，使CIK和DC比例控制为4：1，继续培养3天获取CT细胞；5)将DC细胞、CIK细胞、NK细胞、CTL细胞分别进行洗涤、2000rpm，离心15min得到细胞悬液；将过滤后的混合，配置细胞总数量为1.5×108个/ml的细胞悬液，并向上述细胞悬液中加入0.5％人血白蛋白2.0g，胸腺五肽5mg，250ml生理盐水，制备成肿瘤特异性杀伤细胞制剂，得到细胞制剂。DC治疗对肿瘤治疗的原理1、DC细胞可以高表达MHC-Ⅰ类和MHC-Ⅱ类分子，MHC分子与其捕获加工的肿瘤抗原结合，形成肽-MHC分子复合物，并递呈给T细胞，从而启动MHC-I类限制性CTL反应和MHC-Ⅱ类限制性的CD4+Thl反应。同时，DC还通过其高表达的共刺激分子(CD80/B7-1、CD86/B7-2、CD40等)提供T细胞活化所必须的第二信号，启动了免疫应答。2、DC与T细胞结合可大量分泌IL-12、IL-18激活T细胞增殖，诱导CTL生成，主导Th1型免疫应答，利于肿瘤清除；激活穿孔素P颗粒酶B和FasL/Fas介导的途径增强NK细胞毒作用；3、DC分泌趋化因子专一趋化初始型T细胞促进T细胞聚集，增强了T细胞的激发。保持效应T细胞在肿瘤部位长期存在，可能通过释放某些抗血管生成物质(如IL-12、IFN-γ)及前血管生成因子而影响肿瘤血管的形成。上述CCK进一步以正反馈旁分泌的方式活化DC，上调IL-12及CD80、CD86的表达；同时DC也直接向CD8+T细胞呈递抗原肽，在活化的CD4+T细胞辅助下使CD8+T细胞活化，CD4+和CD8+T细胞还可以进一步通过分泌细胞因子或直接杀伤，增强机体抗肿瘤免疫应答。CIK治疗对肿瘤治疗的原理1、CIK细胞能以不同的机制识别肿瘤细胞通过直接的细胞质颗粒穿透封闭的肿瘤细胞膜进行胞吐.实现对肿瘤细胞的裂解；2、通过诱导肿瘤细胞凋亡杀伤肿瘤细胞；3、CIK细胞分泌IL-2、IL-6、IFN-γ等多种抗肿瘤的细胞因子；4、CIK细胞回输后可以激活机体免疫系统，提高机体的免疫功能。实施例11)制备DC细胞：用含有浓度均为500U/mlrhGM-CSF和rhIL-4的RPMI-1640培养液培养分离的外周血单个核细胞，收集非贴壁细胞，并加入γ-干扰素培养，然本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于肿瘤辅助治疗的细胞制剂，其特征在于，该细胞制剂含有DC细胞、CIK细胞、NK细胞、CTL细胞、质量浓度为1.2‑1.5％的人血白蛋白、胸腺五肽与生理盐水；其中，上述细胞总数量为1.5×108‑3×108个/ml；该细胞制剂由下述步骤制得：1)制备DC细胞：用含有rhGM‑CSF和rhIL‑4的RPMI‑1640培养液培养分离的外周血单个核细胞，收集非贴壁细胞，并加入γ‑干扰素培养，然后移入经CD3McAb包被过的培养瓶中，加入rhIL‑2继续培养两周，收集细胞；2)制备NK细胞：取步骤1)中收集到的非贴壁细胞，接种于培养瓶内使用GT‑T561培养基重悬细胞，向培养瓶的培养液中添加rhIL‑2和自体血浆上清，置于37℃，5％CO2培养箱中培养两周，收集细胞；3)制备CIK细胞：取步骤1)收集的悬浮液，分别加入AIM‑V无血清培养基20ml，将悬浮的初始T细胞移入，置于37℃，5％CO2细胞培养箱中培养，次日，补充50％的培养基，将每瓶CIK细胞的一半量移出，作为CTL培养，剩余半量继续培养两周，收集细胞；4)制备CTL细胞：向步骤3)移出的一半量CIK细胞，加入DC疫苗，使CIK和DC比例控制为4：1，继续培养3天获取CT细胞；5)将DC细胞、CIK细胞、NK细胞、CTL细胞分别进行洗涤、离心得到细胞悬液；将过滤后的细胞悬液混合，并加入质量浓度为1.2‑1.5％的人血白蛋白、胸腺五肽与生理盐水，得到细胞制剂。...

【技术特征摘要】
1.一种用于肿瘤辅助治疗的细胞制剂，其特征在于，该细胞制剂含有DC细胞、CIK细胞、NK细胞、CTL细胞、质量浓度为1.2-1.5％的人血白蛋白、胸腺五肽与生理盐水；其中，上述细胞总数量为1.5×108-3×108个/ml；该细胞制剂由下述步骤制得：1)制备DC细胞：用含有rhGM-CSF和rhIL-4的RPMI-1640培养液培养分离的外周血单个核细胞，收集非贴壁细胞，并加入γ-干扰素培养，然后移入经CD3McAb包被过的培养瓶中，加入rhIL-2继续培养两周，收集细胞；2)制备NK细胞：取步骤1)中收集到的非贴壁细胞，接种于培养瓶内使用GT-T561培养基重悬细胞，向培养瓶的培养液中添加rhIL-2和自体血浆上清，置于37℃，5％CO2培养箱中培养两周，收集细胞；3)制备CIK细胞：取步骤1)收集的悬浮液，分别加入AIM-V无血清培养基20ml，将悬浮的初始T细胞移入，置于37℃，5％CO2细胞培养箱中培养，次日，补充50％的培养基，将每瓶CIK细胞的一半量移出，作为C...

【专利技术属性】
技术研发人员：张正亮，
申请(专利权)人：安徽惠恩生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34