靶向抗原呈递细胞的疫苗制造技术

本发明专利技术包括用于表达、分泌及使用新组合物的组合物和方法，所述的新组合物用作例如疫苗和抗原传送载体，将抗原传送到抗原呈递细胞中。在一个实施方案中，所述的载体是抗‑CD40抗体或其片段，以及一种或多种连接到所述的抗‑CD40抗体或者其片段的抗原性肽，包括人源化抗体。

Vaccines targeting antigen presenting cells

The present invention relates to compositions and methods for the expression, secretion and use of novel compositions, such as vaccines and antigen delivery vectors, for the delivery of antigens to antigen presenting cells. In one embodiment, the carrier is anti CD40 antibodies or fragments thereof, and one or more connected to the anti CD40 antibody or fragment thereof antigenic peptides, including humanized antibody.

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2010年3月4日、申请号为201080020531.7、专利技术名称为“靶向抗原呈递细胞的疫苗”的中国专利申请的分案申请。本专利技术的
总地来说，本专利技术涉及免疫领域，以及更具体地，涉及新的基于抗-CD40的疫苗。
技术介绍
在不限制本专利技术的范围的前提下，本专利技术的背景与抗原呈递结合描述。在授予Ledbetter等人的第7,118,751号美国专利中示教了用于抗原呈递的疫苗和方法的一个实例，其涉及编码以氨基结尾的抗原连接于结合CD40的以羧基结尾的功能域的DNA疫苗。简要地来说，示教了将一种或多种的抗原靶向到细胞的表面受体，从而提高抗原特异性的体液及细胞免疫应答的疫苗。将连接到结合于细胞表面受体的功能域的抗原内在化，抗原被转移到细胞内结构(intracellularcompartment)中，在所述的细胞内结构中，所述的抗原被分解成为肽，并加载到MHC分子上。对所述的肽抗原特异性的T细胞被活化，从而导致增强的免疫应答。所述的疫苗可以包括连接到结合至少一种受体的功能域的抗原，或者包括编码连接到结合于至少一种受体的功能域的抗原的DNA质粒。本专利技术优选的实施方案将HIV-1env抗原靶向到CD40受体，导致将抗原向CD40阳性细胞的传送，以及在将HIV-1env的抗原呈递到T细胞的细胞上，选择性地活化CD40受体。另一个实例见于Li等人递交的第20080254026号美国专利申请，其涉及拮抗剂抗-CD40单克隆抗体及其应用的方法。简要地来说，公开了用于治疗表达CD40的细胞上激发CD40信号转导所介导的疾病的疗法的组合物和方法。所述的方法包括将治疗有效量的拮抗剂抗-CD40抗体或其抗原结合片段给予对其有需要的患者。所述的拮抗剂抗-CD40抗体或其抗原结合片段没有显著的激动剂活性，但是当该抗体在人类表达CD40的细胞上结合于CD40抗原时，显示拮抗剂活性。所述的抗-CD40抗体或其抗原结合片段的拮抗剂活性有利于抑制人类表达CD40的细胞的增殖和/或分化，所述的人类表达CD40的细胞如B细胞。由Delucia递交的第20080241139号美国专利申请中示教了另一个的实例，其涉及佐剂组合物，所述佐剂组合物包括微生物的TLR激动剂、CD40或者4-1BB激动剂以及可选地包括抗原，及其在细胞免疫中诱导协同增强(synergisticenhancement)中的用途。简要地来说，该申请据称示教了佐剂组合物，其包括至少一种微生物TLR激动剂如整个的病毒、细菌或者酵母或者其一部分如膜、球状质体、胞质或者形骸细胞，CD40或者4-1BB激动剂，以及可选地公开了抗原，其中所有三个部分可以为分开的，或者包括同样的重组微生物或者病毒。同样提供了这些免疫佐剂在治疗各种慢性疾病如癌症和HIV感染中的用途。由Bernett等人递交的美国专利申请No.20080199471涉及经优化的CD40抗体及使用其的方法。简要地来说，该申请据称示教了靶向CD40的抗体，其中所述的抗体包括与亲代抗体相关的至少一种修饰，其中所述的修饰改变对FcγR的亲和性或者改变相对于亲代抗体的效应子功能。还公开了使用该专利技术的抗体的方法。最后，由Tripp等人递交的美国专利申请No.20080181915涉及用于呼吸道合胞体病毒的CD40配体佐剂。简要地来说，该申请据称示教了用于在宿主中增强针对RSV的免疫应答的方法和佐剂，其中所述的方法和佐剂包括CD40结合蛋白的来源。优选地，所述的CD40结合蛋白是CD40L，并且所述的来源是包括可操作地连接到CD40L编码区域的启动子的载体。由该专利技术的佐剂和方法提高的免疫应答包括增加的Th1细胞因子表达和增加的抗体产生。本专利技术的公开在一个实施方案中，本专利技术为包括下式的融合蛋白：抗体(Ab)-肽接头(PL)-抗原(Ag)x、Ab-(PL-Ag)x；Ab-(Ag-PL)x；Ab-(PL-Ag-PL)x；Ab-(Ag-PL-Ag)x；Ab-(PL-Ag)x-PL；或者Ab-(Ag-PL)x-Ag；其中Ab是抗体或者其片段，其中PL是至少一个包括至少一个糖基化位点的肽接头；其中Ag是至少一个抗原；以及x是从1到20的整数，所述的融合蛋白在溶液中比没有糖基化位点的相同的融合蛋白具有更高的稳定性。在一个方面，Ag选自病毒抗原、肿瘤抗原、感染性疾病抗原、自身免疫抗原、毒素或者其组合。在另一个方面，所述的Ag是肽串联体(concatemer)。在另一个方面，所述的PL是肽串联体。在另一个方面，所述-(PL-Ag)x，-(Ag-PL)x，-(PL-Ag-PL)x，或-(Ag-PL-Ag)x位于Ab重链或其片段的羧基末端。在另一个方面，所述的Ag在宿主中引发体液免疫应答和/或细胞免疫应答。在一个方面，所述的Ab至少包括抗-CD40_12E12.3F3(ATCC登记号PTA-9854)、抗-CD40_12B4.2C10(保藏提交号HS446，ATCC登记号_______)和抗-CD40_11B6.1C3(保藏提交号HS440，ATCC登记号_______)的可变区。在一个方面，所述的Ag选自自身免疫疾病中涉及的，与自身免疫疾病或者障碍相关的抗原，所述的抗原选自谷氨酸脱羧酶65(GAD65)、天然的DNA、髓鞘碱性蛋白、髓鞘蛋白脂质蛋白、乙酰胆碱受体组件、甲状腺球蛋白及促甲状腺激素(TSH)受体。在另一个方面，所述的Ag选自感染性的疾病抗原，所述的疾病抗原选自细菌的、病毒的、寄生的及真菌的抗原。在另一个方面，x包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或者19。在另一个方面，所述的融合蛋白包括两个或多个Ag，所述Ag来自不同的抗原，由至少一个PL隔开。在另一个方面，所述的融合蛋白包括两个或多个Ag，所述Ag由至少一个包括丙氨酸和丝氨酸的PL隔开。在另一个方面，所述的Ab是抗体片段，其选自Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fc或者ScFv。在一个方面，所述的Ab特异性地结合于第I类MHC、第II类MHC、CD1、CD2、CD3、CD4、CD8、CD11b、CD14、CD15、CD16、CD19、CD20、CD29、CD31、CD40、CD43、CD44、CD45、CD54、CD56、CD57、CD58、CD83、CD86、CMRF-44、CMRF-56、DCIR、DC-ASPGR、CLEC-6、CD40、BDCA-2、MARCO、DEC-205、甘露糖受体、胰岛蛋白、DECTIN-1、B7-1、B7-2、IFN-γ受体和IL-2受体、ICAM-1、Fcγ受体、T细胞受体或者凝集素。在另一个方面，所述的Ab是IgA、IgD、IgE、IgG或者IgM或者其同种型(isotype)。在另一个方面，所述的Ab是人抗体或者人源化抗体。在另一个方面，所述的PL包括丙氨酸和丝氨酸。在另一个方面，所述的PL选自：SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP(SEQIDNO.:11)、PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG(SEQIDNO.:12)、TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP(SEQIDNO.:l3)或者TNGSITVAATAPTVTPTVNAT本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种融合蛋白，其包括式：Ab‑(PL‑Ag)x；Ab‑(Ag‑PL)x；Ab‑(PL‑Ag‑PL)x；Ab‑(Ag‑PL‑Ag)x；Ab‑(PL‑Ag)x‑PL；或Ab‑(Ag‑PL)x‑Ag；其中Ab是抗体或Fv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fc或ScFv抗体片段；其中PL是至少一个肽接头，所述肽接头选自：SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP(SEQ ID NO.:11)；PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG(SEQ ID NO.:12)；TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP(SEQ ID NO.:13)；或TNGSITVAATAPTVTPTVNATPSAA(SEQ ID NO.:14)；其中Ag是选自结核分枝杆菌细菌抗原、HIV抗原和HCV抗原的至少一种抗原；其中x是从1到20的整数。

【技术特征摘要】
2009.03.10 US 61/159059;2009.03.10 US 61/159062;201.一种融合蛋白，其包括式：Ab-(PL-Ag)x；Ab-(Ag-PL)x；Ab-(PL-Ag-PL)x；Ab-(Ag-PL-Ag)x；Ab-(PL-Ag)x-PL；或Ab-(Ag-PL)x-Ag；其中Ab是抗体或Fv、Fab、Fab'、F(ab')2、Fc或ScFv抗体片段；其中PL是至少一个肽接头，所述肽接头选自：SSVSPTTSVHPTPTSVPPTPTKSSP(SEQIDNO.:11)；PTSTPADSSTITPTATPTATPTIKG(SEQIDNO.:12)；TVTPTATATPSAIVTTITPTATTKP(SEQIDNO.:13)；或TNGSITVAATAPTVTPTVNATPSAA(SEQIDNO.:14)；其中Ag是选自结核分枝杆菌细菌抗原、HIV抗原和HCV抗原的至少一种抗原；其中x是从1到20的整数。2.如权利要求1所述的融合蛋白，其中所述Ab包括与以下具有90％、95％、99％或100％的序列同一性的至少一个可变区：a)SEQIDNO:148的重链可变区和SEQIDNO.:149的轻链可变区；b)SEQIDNO.:150的重链可变区和SEQIDNO.:151或152的轻链可变区；或c)SEQIDNO.:153的重链可变区和SEQIDNO.:154的轻链可变区；或IgA、IgD、IgE、IgG或IgM同种型；人抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·祖拉夫斯基，J·F·班彻罗，AL·弗拉玛，Y·莱维，M·蒙特斯，
申请(专利权)人：贝勒研究院，
类型：发明
国别省市：美国;US