用于检测BMPR1B基因突变的引物组、该引物组的用途及包含该引物组的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了用于检测BMPR1B基因突变的引物组，包括BMPR1B基因第1至第10外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子对应的PCR扩增引物组和PCR测序引物。本发明专利技术还公开了所述引物组的用途、以及包含所述引物组的试剂盒。所述的引物组可以专一性鉴别BMPR1B基因是否突变，确保了测定结果的准确性和唯一性。

Primer set for detecting BMPR1B gene mutation, use of the same, and kit containing the primer set

The invention discloses a primer set for detecting the mutation of BMPR1B gene, which comprises a PCR amplification primer set and a PCR sequencing primer corresponding to the first to the exon region of the BMPR1B gene, the 'UTR', '5' UTR and the promoter. The invention also discloses the application of the primer group and the kit containing the primer group. The primer set can specifically identify the mutation of the BMPR1B gene and ensure the accuracy and uniqueness of the determination result.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及引物，具体涉及用于检测BMPR1B基因突变的引物组，本专利技术还涉及该引物组的用途，以及包含该引物组的试剂盒。
技术介绍
BMPR1B（bonemorphogeneticproteinreceptor,typeIB）属于转化生长因子β（TGF-β）受体超家族中的一员，为跨膜的丝氨酸/苏氨酸激酶受体。TGF-β超家族的信号传导系统具有多种生物学的功能，包括细胞功能能调节和组织细胞分化等。肺动脉高压是各种原因引起的静息状态下右心导管测得的肺动脉平均压（meanpulmonaryarterialpressure，mPAP）≥25mmHg的一组临床病理生理综合征。肺动脉高压可以作为一种疾病而独立存在，更常见的是很多疾病进展到一定阶段的病理生理表现。由于肺血管重塑引起肺循环血流动力学改变，最终可导致右心衰竭，甚至死亡。这是一种极度恶性的疾病，七成多患者是年轻人，几乎每个人都知道癌症愈后差，但没有人知道肺动脉高压是一种极度恶性疾病，它的病因复杂、发病率高、误诊率高、危害性强，其愈后是灾难性的，可以说，这种病就是心血管疾病中的癌症。这种疾病平均发病年龄是36岁，75%患者集中于20-40岁年龄段，还有15%患者年龄在20岁以下，几岁的孩子也会发病。世界上该病的发病率在1×10-5～1×10-6之间，其中约32%为遗传性的。BMPR1B作为细胞表面的受体之一如果发生异常突变，可以导致其参与的下游的信号通路阻断，导致肺血管壁的相关细胞增殖失控，进而引起肺动脉高压。因此，采用基因扩增、测序，检测BMPR1B基因是否突变以及寻找突变位点，有助于识别家系中高风险的成员，以及评估未出生孩子的患病风险，这对提高人口素质，优生优育有重要的意义。并且对医生指导用药，基因评估具有重要的意义。目前，传统上采用荧光定量PCR的方式检测突变，这个方法局限性很大，它只能检测已经知道的突变位点，并且一次荧光定量PCR只能检测一个点的突变，且准确率不高。BMPR1B基因突变对不同的人突变的位置和方式是不一样的，用荧光定量PCR方法不能达到检测的目的。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种用于检测BMPR1B基因突变的引物组。BMPR1B基因第1到第10外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子中的任意一个区域在结构上发生碱基对组成或排列顺序的改变，都视为BMPR1B基因发生了突变。因而，根据BMPR1B基因第1至第10外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子分别设计出能专一性鉴别BMPR1B基因是否突变的特异性引物组，可通过PCR扩增和测序测定BMPR1B基因上述区域是否发生改变，以鉴定BMPR1B基因是否发生突变，因此，本专利技术的用于检测BMPR1B基因突变的引物组可以是BMPR1B基因第1至第10外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子分别对应的引物组中的一组或两组以上的组合。本专利技术第一个目的提供的用于检测BMPR1B基因突变的引物组，包括BMPR1B基因第1到第10外显子区，3’UTR、5’UTR和启动子分别对应的PCR扩增引物组，即选自BMPR1B基因第1到第10外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子分别对应的PCR扩增引物组，具体地，所述引物组选自BMPR1B基因的第1外显子区(Exon1)的PCR扩增引物组、第2外显子区(Exon2)的PCR扩增引物组、第3外显子区(Exon3)的PCR扩增引物组、第4外显子区(Exon4)的PCR扩增引物组、第5外显子区(Exon5)的PCR扩增引物组、第6外显子区(Exon6)的PCR扩增引物组、第7外显子区(Exon7)的PCR扩增引物组、第8外显子区(Exon8)的PCR扩增引物组、第9外显子区(Exon9)的PCR扩增引物组、第10外显子区(Exon10)的PCR扩增引物组、3’UTR的PCR扩增引物组、5’UTR的PCR扩增引物组和启动子的PCR扩增引物组中的一组或两组以上的组合，所述的上述各PCR扩增引物组为表1所示。本专利技术所述的引物组还包括BMPR1B基因第1到第10显子区、3’UTR、5’UTR和启动子分别对应的PCR测序引物组中的一组或两组以上的组合。本专利技术所述的PCR测序引物组如表2所示。本专利技术的目的之二是提供使用上述PCR扩增引物组和PCR测序引物在制备通过PCR扩增自生物样品获得核酸样品检测BMPR1B基因是否突变的试剂中的用途。本专利技术的目的之三是提供一种用于检测BMPR1B基因突变的试剂盒，以方便采用DNA测序技术检测导致肺动脉高压发病的BMPR1B基因是否突变。具体地，该用于检测BMPR1B基因突变的试剂盒，包括BMPR1B基因的第1至第10显子区、3’UTR、5’UTR和启动子分别对应的PCR扩增引物组中的一组或两组以上的组合，PCR扩增引物组为表1所示。本专利技术所述的试剂盒还包括如表2所示的BMPR1B基因的第1至第10显子区、3’UTR、5’UTR和启动子分别对应的PCR测序引物组中的一组或两组以上的PCR测序引物组。本专利技术还包括常规PCR扩增试剂、PCR产物纯化试剂和DNA测序试剂。所述的PCR扩增试剂包括dNTP、TaqDNA聚合酶等。所述的PCR产物纯化试剂包括SAP酶、ExoI酶等。所述的DNA测序试剂包括BigDyemix、EDTA溶液、HIDI溶液等。本专利技术的有益效果：(1)本专利技术根据BMPR1B基因第1至第10显子区、3’UTR、5’UTR和启动子，共13区域序列设计特异性引物组，可以专一性鉴别BMPR1B基因是否突变，确保了测定结果的准确性和唯一性。与传统的荧光定量PCR检测单点突变的方法相比，其可以检测13个区域范围的所有的BMPR1B基因是否发生突变，适用的范围广泛，并且它使用的是测序比对的方法进行突变检测，出错率会低于荧光定量PCR的检测方法，且造价也低于荧光定量PCR检测法。(2)本专利技术提供的引物组及试剂盒用于检测肺动脉高压的致病基因BMPR1B基因的突变体，可以快速的检测患者的基因是否突变，以便肺动脉高压的疾病病因诊断。同时还可以用于BMPR1BSNP位点与基因功能之间关系的科学研究上。(3)本专利技术每个引物扩增的条件类似，可以13个区域分别进行扩增测序，也可以同时进行扩增测序。这样的测序的方法检测突变比通常荧光定量PCR的方法要更准确，同时检测范围更广泛，测序范围内的任何一个位置突变或插入碱基都能从测序图谱中发现，而荧光定量PCR只能检测目的位点的突变，局限性很大，且准确性不高。(4)本专利技术的引物组可以检测BMPR1B基因是否突变以及寻找突变位点，有助于识别家系中高风险的成员，以及评估未出生孩子的患病风险，这对提高人口素质，优生优育有重要的意义，并且对医生指导用药，基因评估具有重要的意义。附图说明图1是血液基因组DNA的1%的Agarose电泳图；M：DNADL15000maker，1、2：外周血基因组DNA。图2是本专利技术实施例五中的血液样本中的BMPR1B基因的测序峰图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例一依据NCBIGeneBank（NG_009245）公开的BMPR1B基因的第1到第10外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子序列，设计出用于检测BMPR1B基因是否发生突变的引物组，该引物本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测BMPR1B基因突变的引物组，其特征在于，包括BMPR1B基因第1至第10外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子对应的PCR扩增引物组，所述的PCR扩增引物组包括：(1) 所述启动子的PCR扩增引物组：包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的引物 PF1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列所示的引物PR1的引物组、SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列所示的引物PF2的引物组和SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列的引物PR2的引物组、SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列的引物PF3的引物组和SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列的引物PR3的引物组；(2) 所述5’UTR的PCR扩增引物组：包括SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列的引物 PF4和SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列的引物PR4的引物组、SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列的引物 PF5和SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列的引物PR5的引物组、SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列的引物 PF6和SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列的引物PR6的引物组；(3) 所述Exon1的PCR扩增引物组：包括SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列的引物PF7和SEQ ID NO.14所示的核苷酸序列的引物PR7的引物组；(4) 所述Exon2的PCR扩增引物组：SEQ ID NO.15所示的核苷酸序列的引物PF8和SEQ ID NO.16所示的核苷酸序列的引物PR8的引物组；(5) 所述 Exon3的PCR扩增引物组：包括SEQ ID NO.17所示的核苷酸序列的引物PF9和SEQ ID NO.18所示的核苷酸序列的引物PR9的引物组；(6) 所述Exon4的PCR扩增引物组：包括SEQ ID NO.19所示的核苷酸序列的引物PF10和SEQ ID NO.20所示的核苷酸序列的引物PR10的引物组；(7) 所述Exon 5的PCR扩增引物组：包括SEQ ID NO.21所示的核苷酸序列的引物PF11和SEQ ID NO.22所示的核苷酸序列的引物PR11的引物组；(8) 所述Exon6的PCR扩增引物组：包括SEQ ID NO.23所示的核苷酸序列的引物PF12和SEQ ID NO.24所示的核苷酸序列的引物PR12的引物组；(9) 所述Exon7的PCR扩增引物组：包括SEQ ID NO.25所示的核苷酸序列的引物PF13和SEQ ID NO.26所示的核苷酸序列的引物PR13的引物组；(10) 所述Exon8的PCR扩增引物组：包括SEQ ID NO.27所示的核苷酸序列的引物PF14和SEQ ID NO.28所示的核苷酸序列的引物PR14的引物组；(11) 所述Exon9的PCR扩增引物组：包括SEQ ID NO.29所示的核苷酸序列的引物PF15和SEQ ID NO.30所示的核苷酸序列的引物PR15的引物组；(12) 所述Exon10的PCR扩增引物组：包括SEQ ID NO.31所示的核苷酸序列的引物PF16和SEQ ID NO.32所示的核苷酸序列的引物PR16的引物组；(13) 所述3’UTR的PCR扩增引物组：包括SEQ ID NO.33所示的核苷酸序列的引物PF17和SEQ ID NO.34所示的核苷酸序列的引物PR17的引物组、SEQ ID NO.35所示的核苷酸序列的引物PF18和SEQ ID NO.36所示的核苷酸序列的引物PR18的引物组、SEQ ID NO.37所示的核苷酸序列的引物PF19和SEQ ID NO.38所示的核苷酸序列的引物PR19的引物组、SEQ ID NO.39所示的核苷酸序列的引物PF20和SEQ ID NO.40所示的核苷酸序列的引物PR20的引物组、SEQ ID NO.41所示的核苷酸序列的引物PF21和SEQ ID NO.42所示的核苷酸序列的引物PR21的引物组、SEQ ID NO.43所示的核苷酸序列的引物PF22和SEQ ID NO.44所示的核苷酸序列的引物PR22的引物组、SEQ ID NO.45所示的核苷酸序列的引物PF23和SEQ ID NO.46所示的核苷酸序列的引物PR23的引物组、SEQ ID NO.47所示的核苷酸序列的引物PF24和SEQ ID NO.48所示的核苷酸序列的引物PR24的引物组。...

【技术特征摘要】
2015.07.21 CN 20151042923801.用于检测BMPR1B基因突变的引物组，其特征在于，包括BMPR1B基因第1至第10外显子区、3’UTR、5’UTR和启动子对应的PCR扩增引物组，所述的PCR扩增引物组包括：(1)所述启动子的PCR扩增引物组：包括SEQIDNO.1所示的核苷酸序列的引物PF1和SEQIDNO.2所示的核苷酸序列所示的引物PR1的引物组、SEQIDNO.3所示的核苷酸序列所示的引物PF2的引物组和SEQIDNO.4所示的核苷酸序列的引物PR2的引物组、SEQIDNO.5所示的核苷酸序列的引物PF3的引物组和SEQIDNO.6所示的核苷酸序列的引物PR3的引物组；(2)所述5’UTR的PCR扩增引物组：包括SEQIDNO.7所示的核苷酸序列的引物PF4和SEQIDNO.8所示的核苷酸序列的引物PR4的引物组、SEQIDNO.9所示的核苷酸序列的引物PF5和SEQIDNO.10所示的核苷酸序列的引物PR5的引物组、SEQIDNO.11所示的核苷酸序列的引物PF6和SEQIDNO.12所示的核苷酸序列的引物PR6的引物组；(3)所述Exon1的PCR扩增引物组：包括SEQIDNO.13所示的核苷酸序列的引物PF7和SEQIDNO.14所示的核苷酸序列的引物PR7的引物组；(4)所述Exon2的PCR扩增引物组：SEQIDNO.15所示的核苷酸序列的引物PF8和SEQIDNO.16所示的核苷酸序列的引物PR8的引物组；(5)所述Exon3的PCR扩增引物组：包括SEQIDNO.17所示的核苷酸序列的引物PF9和SEQIDNO.18所示的核苷酸序列的引物PR9的引物组；(6)所述Exon4的PCR扩增引物组：包括SEQIDNO.19所示的核苷酸序列的引物PF10和SEQIDNO.20所示的核苷酸序列的引物PR10的引物组；(7)所述Exon5的PCR扩增引物组：包括SEQIDNO.21所示的核苷酸序列的引物PF11和SEQIDNO.22所示的核苷酸序列的引物PR11的引物组；(8)所述Exon6的PCR扩增引物组：包括SEQIDNO.23所示的核苷酸序列的引物PF12和SEQIDNO.24所示的核苷酸序列的引物PR12的引物组；(9)所述Exon7的PCR扩增引物组：包括SEQIDNO.25所示的核苷酸序列的引物PF13和SEQIDNO.26所示的核苷酸序列的引物PR13的引物组；(10)所述Exon8的PCR扩增引物组：包括SEQIDNO.27所示的核苷酸序列的引物PF14和SEQIDNO.28所示的核苷酸序列的引物PR14的引物组；(11)所述Exon9的PCR扩增引物组：包括SEQIDNO.29所示的核苷酸序列的引物PF15和SEQIDNO.30所示的核苷酸序列的引物PR15的引物组；(12)所述Exon10的PCR扩增引物组：包括SEQIDNO.31所示的核苷酸序列的引物PF16和SEQIDNO.32所示的核苷酸序列的引物PR16的引物组；(13)所述3’UTR的PCR扩增引物组：包括SEQIDNO.33所示的核苷酸序列的引物PF17和SEQIDNO.34所示的核苷酸序列的引物PR17的引物组、SEQIDNO.35所示的核苷酸序列的引物PF18和SEQIDNO.36所示的核苷酸序列的引物PR18的引物组、SEQIDNO.37所示的核苷酸序列的引物PF19和SEQIDNO.38所示的核苷酸序列的引物PR19的引物组、SEQIDNO.39所示的核苷酸序列的引物PF20和SEQIDNO.40所示的核苷酸序列的引物PR20的引物组、SEQIDNO.41所示的核...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢文菊，张晨婷，王健，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：广东;44