异香兰酸衍生物与饱和小环胺缩合所得苯甲酰胺类人磷酸二酯酶4B抑制剂，其结构特征为：所述异香兰酸母核为3-环戊氧基-4-甲氧基苯甲酸和3-环丙甲氧基-4-二氟甲氧基苯甲酸，对应饱和小环胺包括吗啉、四氢吡咯、环戊胺、环己胺；二者组合缩合而成酰胺化合物；其活性特征为人磷酸二酯酶4B的抑制剂，对人单核细胞在脂多糖刺激下释放炎症因子TNF-a有抑制作用。
Yi Lan acid derivatives and saturated amine condensation ring income benzamide PDE4B inhibitors
Yi Lan acid derivatives and saturated amine condensation ring income benzamide human phosphodiesterase 4B inhibitor, its structure is characterized in that the same vanillinate nucleus as the 3- ring pentyloxy -4- methoxy benzoic acid and 3- cyclopropane methoxy -4- two fluorine methoxy benzoic acid, the corresponding saturated amine ring package including four morpholine, pyrrolidine, Cyclopentylamine, cyclohexylamine; combination of the two condensed amide compounds; the activity characteristics of human phosphodiesterase 4B inhibitor, has inhibitory effect on human mononuclear cells to release inflammatory factors in lipopolysaccharide stimulated by TNF-a.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术
为酶抑制剂类药物，涉及异香兰酸衍生物与饱和小环胺缩合所得苯甲酰胺类结构及其抑制人磷酸二酯酶4B活性；代表化合物具有较强的抑制活性和抗炎活性。
技术介绍
3，5-环磷酸腺苷(cAMP)和3，5-环磷酸鸟苷(cGMP)是哺乳动物细胞中关键的第二信使，调节细胞功能；其体内降解的唯一途径是磷酸二酯酶(cyclicnucleotidephosphodiesterase(PDE))催化的水解。炎性细胞和免疫细胞中以磷酸二酯酶同工酶4(PDE4)为主，PDE4可专一性水解cAMP，在嗜中性粒细胞、单核细胞、T细胞、支气管平滑肌细胞中主要表达亚型为PDE4B[ProcNatlSciUSA.2002，99(11)：7628-7633]。PDE4B已成为抗炎药物设计和筛选的靶点，其抑制剂可以用于治疗由炎症引起的慢性疾病，如哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)等[PhosphodiesterasesasDrugTargets(Springer，Berlin)，2011]。目前罗氟司特(roflumilast，商品名daliresp)已成功用于临床治疗慢性阻塞性肺炎、急性呼吸窘迫综合征以及哮喘，但仍有腹泻、恶心、房颤及失眠等副作用[ExpertOpinInvestigDrugs2015，24(12)：1597-1611]。咯利普兰(Rolipram)是最早发现的PDE4抑制剂，由于严重的副反应仅作为研究试剂，但以此为先导结构成功发现了PDE4强效抑制剂罗氟司特及RP73401。咯利普兰含异香兰酸酰胺母核结构即3，4-二烷氧基苯甲酰胺，此类化合物易于合成，母核部分不含手性结构；现有PDE4B抑制剂大多有手性碳原子或复杂杂环结构，制备难度大；改变异香兰酸酰胺的氨基端结构并调节异香兰酸3，4-位取代基是设计新型PDE4抑制剂的重要思路。通过筛选，发现用饱和小环对应胺与异香兰酸衍生物缩合的酰胺，也有很好的PDE4抑制作用和一定的抗炎活性。
技术实现思路
1.异香兰酸衍生物与饱和小环胺缩合所得苯甲酰胺类人PDE4B抑制剂，结构特征如下：2.按权利要求1所述异香兰酸衍生物与饱和小环胺缩合所得苯甲酰胺类人PDE4B抑制剂，对人磷酸二酯酶4B抑制常数低于1.0mmol/L，对人单核细胞在脂多糖刺激下释放炎症因子TNF-a有抑制作用。应用实施例(一)本专利技术所涉及目标化合物的合成路线1.A类化合物合成参照文献(J.Med.Chem.1994，37，1696-1703)，详见附图1，结构及纯度数据分析见附表1。将异香兰素(7.6g，50mmol)加入到N，N-二甲基甲酰胺80毫升中，再加入溴代环戊烷(9.7g，65mmol)和碳酸钾(10.4g，75mmol)，加热至100摄氏度，反应30小时，冷却至室温，倒入饱和氯化铵溶液130毫升中，室温下搅拌10分钟，静置分层，水层用乙酸乙酯(3×100毫升)萃取，有机萃取液合并，水洗，干燥，浓缩，得棕色油状物(9.4g，收率85％)(文献：收率87％)将3-(环戊氧基)-4-甲氧基-苯甲醛(9g，40mmol)溶于40％氢氧化钾甲醇溶液(60毫升)和30％双氧水(60毫升)中，再加入四氢呋喃(20毫升)和氯化锌(1.4g，10mmol)，升温回流，反应40小时，冷却至室温，用氢氧化钠调至碱性(pH＞10)，用氯仿(2×60毫升)洗涤，水层用盐酸调至酸性(pH＜3)，氯仿萃取，有机层合并，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得白色粉末状固体3-(环戊氧基)-4-甲氧基苯甲酸(5g，收率52.9％)将3-(环戊氧基)-4-甲氧基苯甲酸(0.24g，1mmol)和二环己基碳二亚胺(0.21g，1mmol)置于10毫升三氯甲烷中，再加入胺类(1mmol)，加热至40摄氏度，反应24小时，减压除去溶剂，经柱层析，得白色粉末状固体3-(环戊氧基)-4-甲氧基苯甲酰胺(收率60-84％)2.B类化合物合成参照A类化合物，结构及纯度数据见附表1。参照文献(ChineseJournalofPharmaceuticals2011，42(12)：884-886)：将4-二氟甲氧基-3-羟基苯甲醛(9.4g，50mmol)，氯甲基环丙烷(6g，66mmol)和碳酸钾(10.4g，75mmol)加入60毫升丁酮，搅拌厚加少许碘化钾，回流反应2h，旋转蒸干溶剂，二氯甲烷中水洗再蒸干溶剂得油状物4-二氟甲氧基-3-环丙甲氧基苯甲醛(10g，44mmol，收率89％)；将4-二氟甲氧基-3-环丙甲氧基苯甲醛溶于60毫升40％氢氧化钾的甲醇溶液，加入60毫升30％双氧水，65摄氏度反应4h，用浓盐酸小心酸化至pH＜2，析出固体(6g，收率55％)后续成酰胺参照A类化合物合成。(二)磷酸二酯酶的表达与纯化、活性测定参照文献(J.EnzymeInhibit.Med.Chem.，2014；29：836-839)：1.磷酸二酯酶的表达与纯化将人全长磷酸二酯酶基因全开放的cDNAg隆到pReceiver-B13质粒，其限制性酶切位点HindIII和NotI，N端带6His标签，获得表达载体(pReceiver-B13-hPDE4B2)。将质粒(pReceiver-B13-Hpde4B2)转化到大肠杆菌BL21中16摄氏度诱导表达20-24小时。收集菌株，加入裂解缓冲液(20mmol/LTris-HClpH8.0含400mmol/LNaCl，1mmol/L二硫苏糖醇，1mmol/L苯甲基磺酰氟，2mmol/L苯甲脒)，冰浴4摄氏度时99W超声裂解至澄清，12000转/分离心收集上清；镍柱纯化：用20mmol/LTris-HClpH8.0，400mmol/LNaCl，10-20倍柱体积平衡(Ni-NTA)柱，上目的蛋白人全长磷酸二酯酶裂解上清，目的蛋白带6His标签能够特异性结合到柱子里，杂蛋白大部分流出，用20mmol/LpH8.0Tris-HCl，400mmol/LNaCl，30mmol/L咪唑，10-20倍柱体积洗脱掉其他的非特异性吸附的杂蛋白，再用20mmol/LTris-HClpH8.0，400mmol/L咪唑洗脱特异性结合的目的蛋白，收集目的蛋白，用20mmol/LpH8.0Tris-HCl透析去除咪唑；按下述方法测定酶活性为30～60U/g。2.偶联碱性磷酸酶的孔雀绿定磷法测定磷酸二酯酶活性酶反应缓冲液为20mmol/LTris-HClpH7.4并含有10mmol/LMgCl2和0.1mmol/L乙二胺四乙酸。加入cAMP启动反应。用偶联本文档来自技高网...
【技术保护点】
异香兰酸衍生物与饱和小环胺缩合所得苯甲酰胺类人PDE4B抑制剂，结构特征如下：
【技术特征摘要】
1.异香兰酸衍生物与饱和小环胺缩合所得苯甲酰胺类人PDE4B抑制剂，结构特征如下：
2.按权利要求1所述异香兰酸衍生物与饱和小环胺缩合所得苯甲酰胺类...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓兰，何姝，廖飞，胡小蕾，张祥，陈春艳，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：重庆;50
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。