本发明专利技术公开了一种生物法制备N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺的方法，以N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺为底物，使其在助溶剂、2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶的存在下，在15℃~25℃下、pH为5~9的缓冲溶液中，加入乙醛进行缩醛反应，生成所述的N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺，其中，起始反应体系中，底物的浓度控制在5~20g/L间，所述的助溶剂为二甲基亚砜、吐温-60、聚乙二醇、聚乙二醇辛基苯基醚中的一种或多种的组合，且所述助溶剂的投料体积为反应体系总体积的5~15%,所述的2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶与底物的投料质量比为0.5~2:1。本发明专利技术的制备方法中，添加了 2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶，该方法操作简单、制得的产物纯度好、收率高、具有重要的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物制药和生物化工
，尤其涉及一种生物法制备N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺的方法。
技术介绍
N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺(式1)是降血脂他汀类药物重要的手性药物中间体。目前其尚无公开的制备方法报道。文献ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2004,V110(16):5788-5793及相关专利WO2004027075和WO2009019561报道了利用2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶(DERA，式2)制备系列手性二羟基四氢吡喃类化合物的方法，该酶对系列模式底物中较小官能团(如氢、氯、叠氮等)有活力，但是未发现其对较大官能团的活力。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种生物法制备N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺的方法。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种生物法制备N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺的方法，以N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺为底物，使其在助溶剂、2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶的存在下，在15℃～25℃下、pH为5～9的缓冲溶液中，加入乙醛进行缩醛反应，生成所述的N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺，其中，起始反应体系中，底物的浓度控制在5～20g/L间，所述的助溶剂为二甲基亚砜、吐温-60、聚乙二醇、聚乙二醇辛基苯基醚中的一种或多种的组合，且所述助溶剂的投料体积为反应体系总体积的5～15％，所述的2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶与底物的投料质量比为0.5～2:1，所述的N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺的结构式为：所述的N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺的结构式为：优选地，所述的2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶为购自苏州汉酶生物技术有限公司的牌号为EW0694的2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶。优选地，所述的助溶剂为二甲基亚砜时，其投料体积为反应体系总体积的10～12％。优选地，所述的缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液。优选地，起始反应体系中，所述底物的浓度控制在10～20g/L间。优选地，具体实施过程如下：将所述的底物、助溶剂、2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶加入到所述的缓冲溶液中，在15℃～25℃下搅拌，然后恒速加入乙醛进行缩醛反应，HPLC监测反应进程，反应完全后，加入乙酸乙酯进行萃取多次，合并有机相、浓缩、柱层析分离得到所述的N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺。由于上述技术方案的运用，本专利技术与现有技术相比具有下列优点：本专利技术的生物法制备N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺，通过N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺与乙醛在2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶的作用下发生缩醛反应，以制得目标产物，为此，该方法操作简单、所得产物纯度高、收率好。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细的说明，但本专利技术并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整，未注明的实施条件为常规实验中的条件。实施例1(酶筛选)5mL离心管中加入40mg底物N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺，1.8mL磷酸盐缓冲溶液(0.1M，pH7.5)，0.2mLDMSO，0.035mL乙醛，不同DERA酶粉40mg(购自苏州汉酶生物技术有限公司的牌号分别为EW0691，EW0692，EW0693，EW0694)，室温下开始搅拌，间隔不同时间，HPLC检测底物转化率如表1所示：表1从表1中可看出，在其他条件相同的情况下，采用牌号为EW0694的DERA酶粉作为催化剂，底物的转化率最高。当然这里的助溶剂还可以是吐温-60、聚乙二醇、聚乙二醇辛基苯基醚中的一种或是多种的组合。实施例2(温度条件的优化)5mL离心管中加入40mg底物N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺，1.8mL磷酸盐缓冲溶液(0.1M，pH7.5)，0.2mLDMSO，0.035mL乙醛，EW0694酶粉20mg，不同温度下开始搅拌，间隔不同时间HPLC检测底物转化率如表2所示：表2从表2中可看出，在其他条件相同的情况下，反应在25℃的缓冲溶液中进行时，其底物的转化率最高。实施例3(底物浓度的优化)5mL离心管中加入40/20/10mg底物N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺，1.8mL磷酸盐缓冲溶液(0.1M，pH7.5)，0.2mLDMSO，0.035mL乙醛，EW0694酶粉20mg，25℃下开始搅拌，1h后HPLC检测底物转化率如表3所示：表3底物投加量40mg20mg10mg转化率25.4％25.8％24.7％从表3中可看出，在其他条件不变的情况下，底物浓度控制在10g/L时，底物的转化率最高。实施例4(放大反应)50mL离心管中加入400mg底物N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺，14.5mL磷酸盐缓冲溶液(0.1M，pH7.5)，2mLDMSO，EW0694酶粉200mg，25℃下开始搅拌，而后在3小时内恒速加入3.5mL浓度为10％的乙醛，20h后HPLC检测底物转化率为90％。而后加入等体积乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，浓缩，柱层析分离得到产品N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺531mg，收率91％，纯度98％。上述实施例只为说明本专利技术的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本专利技术的内容并加以实施，并不能以此限制本专利技术的保护范围，凡根据本专利技术精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本专利技术的保护范围内。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种生物法制备N‑(2‑((2R,4R)‑4,6‑二羟基四氢‑2H‑吡喃‑2‑基)‑乙基)‑2‑苯乙酰胺的方法，其特征在于，以N‑(3‑丙酮基)‑2‑苯乙酰胺为底物，使其在助溶剂、2‑脱氧核糖‑5‑磷酸醛缩酶的存在下，在15℃～25℃下、pH为5～9的缓冲溶液中，加入乙醛进行缩醛反应，生成所述的N‑(2‑((2R,4R)‑4,6‑二羟基四氢‑2H‑吡喃‑2‑基)‑乙基)‑2‑苯乙酰胺，其中，起始反应体系中，底物的浓度控制在5～20g/L间，所述的助溶剂为二甲基亚砜、吐温‑60、聚乙二醇、聚乙二醇辛基苯基醚中的一种或多种的组合，且所述助溶剂的投料体积为反应体系总体积的5～15％，所述的2‑脱氧核糖‑5‑磷酸醛缩酶与底物的投料质量比为0.5～2:1，所述的N‑(3‑丙酮基)‑2‑苯乙酰胺的结构式为：所述的N‑(2‑((2R,4R)‑4,6‑二羟基四氢‑2H‑吡喃‑2‑基)‑乙基)‑2‑苯乙酰胺的结构式为：
【技术特征摘要】
1.一种生物法制备N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙
基)-2-苯乙酰胺的方法，其特征在于，以N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺为底物，使
其在助溶剂、2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶的存在下，在15℃～25℃下、pH为5～9
的缓冲溶液中，加入乙醛进行缩醛反应，生成所述的N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟
基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺，其中，起始反应体系中，底物的浓
度控制在5～20g/L间，所述的助溶剂为二甲基亚砜、吐温-60、聚乙二醇、聚乙
二醇辛基苯基醚中的一种或多种的组合，且所述助溶剂的投料体积为反应体系
总体积的5～15％，所述的2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶与底物的投料质量比为
0.5～2:1，
所述的N-(3-丙酮基)-2-苯乙酰胺的结构式为：
所述的N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰
胺的结构式为：
2.根据权利要求1所述的生物法制备N-(2-((2R,4R)-4,6-二羟基四氢-2H-
吡喃-2-基)-乙基)-2-苯乙酰胺的方法，其特征在于，所述的2-脱氧核糖-5-磷
酸醛缩酶为购自苏州汉酶生物技术有限公司的牌号为EW0694的2-脱氧核糖-5-
磷酸醛缩酶。
3.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁晓亮，李国庆，
申请(专利权)人：苏州汉酶生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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