用于癌症治疗的免疫刺激性HIV TAT衍生多肽制造技术

用于癌症治疗方法的人类免疫缺陷病毒(HIV)转录反式激活因子(Tat)衍生多肽，其具有相对于天然Tat多肽提高的免疫刺激性质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请基于35USC§119(e)要求2013年10月4日提交的美国临时专利专利申请61/887,166的权益，所述专利申请的全部内容通过引用并入本文中。专利
本专利技术涉及用于癌症的基于免疫的治疗剂领域。背景免疫检查点代表导致对癌症的有效免疫应答被抑制的抑制性分子，其可导致肿瘤逃逸。免疫检查点分子例如细胞毒性T-淋巴细胞抗原4(CTLA-4)和程序性细胞死亡1(PD-1)以及程序性细胞死亡配体1(PD-L1)被认为促进伴随癌症进展的免疫功能紊乱且它们的治疗性阻断已显示出临床益处。特别地，肿瘤PD-L1和PD-1参与浸润细胞毒性T淋巴细胞(CTL)被认为通过诱导T-细胞不应、耗竭和程序性细胞死亡而成为肿瘤逃逸和免疫抵抗背后的重要机制。理解免疫应答期间免疫检查点分子的操作是设计人类癌症的有效免疫疗法的重要策略。人免疫缺陷病毒(HIV)转录反式激活因子(Tat)是可变的RNA结合肽，其提高病毒RNA转录并且可以引起T4细胞和巨噬细胞的凋亡，还可能刺激α干扰素的过量生产。然而，从经HIV感染的长期无进展者(LTNP)中分离的Tat蛋白与在由于HIV感染已经发展成获得性免疫缺陷综合症(AIDS)的患者中发现的Tat不同。在LTNP中发现的Tat蛋白能够反式激活病毒RNA；然而，这种免疫刺激性Tat不诱导T4细胞或巨噬细胞的凋亡且无免疫抑制性。在感染猴物种的慢病毒中发现的免疫刺激性Tat的变体也不导致免疫缺陷的发展且流行性感染指导单核细胞分化为刺激细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答的树突细胞(DC)。因此，免疫刺激性Tat可用于刺激对人类癌症的免疫应答。癌症和慢性感染是对基于免疫的治疗应答的常见人类疾病的最突出的例子。尽管感染是要通过免疫来控制的首要疾病，但是人类中的临床试验已经确定了免疫应答尤其是免疫系统的CTL臂能够使一些人类黑色素瘤和肾癌消退。这些观察结果被下述发现扩展：一类特别的抗原呈递细胞(APC)DC特别有效地引起针对癌症和其它疾病的CTL活性。靶向和激活DC的技术已经导致针对由人类乳头状瘤病毒(HPV)感染引起的人类宫颈前恶性肿瘤和人类肺癌的一些早期成功。与目前针对癌症使用的化学治疗药物相反，激发针对癌症的CTL应答的药剂由于免疫应答的巨大特异性而伴随着极少的副作用。开发治疗癌症的免疫治疗药物的努力被下述技术困难阻碍：靶向和激活DC，从而将所需的进入信号递送并维持至CTL。诱导CTL应答的抗原靶向在下述范围内是一种挑战：天然加工需要抗原进入细胞的细胞质，从而结合免疫系统的主要组织相容性复合物(MHC)I类抗原，这是CTL激活的必要条件，因为激活CTL上T细胞受体的配体是抗原和MHCI类的复合物。在几乎所有情况下，蛋白质抗原甚至在它们与DC辅助激活因子偶联时排他地进入取代性的MHCII类抗原呈递途径，其排除CTL刺激。这可以部分通过基于肽的技术来克服，因为肽结合已经位于DC表面上的MHCI类。然而，该技术是非特异性的，并且大部分肽是差的DC激活因子，这限制了它们作为人类癌症治疗的功效。已知有限的一组生物蛋白质刺激CTL应答。人免疫缺陷病毒1(HIV-1)转录反式激活因子(Tat)的变体和衍生物能够刺激该CTL应答。目前已知直接引发CTL应答的其它生物品以热休克蛋白(HSP)为基础，或者以某些细菌的外壳蛋白为基础。在与HPV感染相关的某些生殖器瘤的治疗中，热休克蛋白显示有限的功效。专利技术概述本文公开了用作癌症治疗剂的人类免疫缺陷病毒(HIV)转录反式激活因子(Tat)蛋白的衍生物。人工的免疫刺激性Tat衍生多肽具有治疗癌症的潜力。在一个实施方式中，提供了转录反式激活因子(Tat)衍生多肽，其具有氨基酸序列，所述氨基酸序列以以下顺序包含：(i)来自人类免疫缺陷病毒(HIV)或者猴免疫缺陷病毒(SIV)Tat蛋白的转录因子(TF)结构域序列，(ii)来自SIV、HIV或防御素(defensin)的富半胱氨酸结构域序列，和(iii)来自HIV或SIVTat蛋白的C末端结构域序列。本文还公开了包含本文所公开的Tat衍生多肽的药物组合物。在Tat衍生多肽的一个实施方式中，HIV是HIV-1或HIV-2。在另一个实施方式中，HIV-1Tat来自长期无进展者。在另一个实施方式中，SIV来自选自表2的宿主。在另一个实施方式中，防御素是α-防御素或β-防御素。在另一个实施方式中，Tat衍生多肽还包含来自HIV-1或HIV-2Tat的富精氨酸结构域。在Tat衍生多肽的另一个实施方式中，TF结构域中至少一个氨基酸被缺失或者被丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸或苏氨酸取代。在另一个实施方式中，至少一个被取代的氨基酸是脯氨酸。在某些实施方式中，TF结构域包含SEQIDNOs:96-123之一的氨基酸序列。在另一些实施方式中，富半胱氨酸结构域包含SEQIDNOs:124-132之一的氨基酸序列。在另一些实施方式中，C末端结构域包含SEQIDNOs:133-150之一的氨基酸序列。在另一个实施方式中，Tat衍生多肽与SEQIDNOs5-95之一的序列同一性高于85％。在另一个实施方式中，Tat衍生多肽不是SEQIDNOs:2、3或4之一。本文还公开了治疗癌症的方法，所述方法包括：向有此需要的受试者施用治疗有效量的本文所公开的Tat衍生多肽或药物组合物；和在所述受试者中引起癌症生长的停止或癌症的消退。本文还公开了治疗有效量的Tat衍生多肽或药物组合物治疗有此需要的受试者中的癌症的用途，从而在所述受试者中引起癌症生长的停止或癌症的消退。本文还公开了降低患有癌症的受试者中的肿瘤负荷的方法，所述方法包括：向有此需要的受试者施用治疗有效量的本文所公开的Tat衍生多肽或药物组合物；和在所述受试者中引起癌症的消退。本文还公开了治疗有效量的Tat衍生多肽或药物组合物降低患有癌症的受试者中的肿瘤负荷的用途，从而在所述受试者中引起癌症的消退。本文还公开了抑制患有癌症的受试者中的抗肿瘤免疫应答的阻抑的方法，所述方法包括：向受试者施用治疗有效量的本文所公开的Tat衍生多肽或药物组合物；其中所述施用在所述受试者中引起癌症生长的降低或抑制或者癌症的消退。本文还公开了治疗有效量的Tat衍生多肽或药物组合物抑制患有癌症的受试者中的抗肿瘤免疫应答的阻抑的用途，其中Tat衍生多肽的施用在所述受试者中引起癌症生长的降低或抑制或者癌症的消退。本文还公开了治疗患有癌症的受试者中的表达PD-L1的肿瘤的方法，所述方法包括：施用治疗有本文档来自技高网...

【技术保护点】
转录反式激活因子(Tat)衍生多肽，其具有氨基酸序列，所述氨基酸序列以以下顺序包含：(i)来自人类免疫缺陷病毒(HIV)或者猴免疫缺陷病毒(SIV)Tat蛋白的转录因子(TF)结构域序列，(ii)来自SIV、HIV或防御素的富半胱氨酸结构域序列，和(iii)来自HIV或SIV Tat蛋白的C末端结构域序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.04 US 61/887,1661.转录反式激活因子(Tat)衍生多肽，其具有氨基酸序列，所述氨基酸序列以以下顺序
包含：
(i)来自人类免疫缺陷病毒(HIV)或者猴免疫缺陷病毒(SIV)Tat蛋白的转录因子(TF)
结构域序列，
(ii)来自SIV、HIV或防御素的富半胱氨酸结构域序列，和
(iii)来自HIV或SIVTat蛋白的C末端结构域序列。
2.权利要求1所述的Tat衍生多肽，其中所述HIV是HIV-1或HIV-2。
3.权利要求1所述的Tat衍生多肽，其中HIV-1Tat来自长期无进展者。
4.权利要求1所述的Tat衍生多肽，其中所述SIV来自选自表2的宿主。
5.权利要求1所述的Tat衍生多肽，其中所述防御素是α-防御素或β-防御素。
6.权利要求1所述的Tat衍生多肽，其还包含来自HIV-1或HIV-2Tat的富精氨酸结构域。
7.权利要求1所述的Tat衍生多肽，其中所述TF结构域中的至少一个氨基酸被缺失或者
被丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸或苏氨酸替换。
8.权利要求7所述的Tat衍生多肽，其中至少一个被替换的氨基酸是脯氨酸。
9.权利要求1所述的Tat衍生多肽，其中所述TF结构域包含SEQIDNOs:96-123之一的
氨基酸序列。
10.权利要求1所述的Tat衍生多肽，其中所述富半胱氨酸结构域包含SEQIDNOs:124-
132之一的氨基酸序列。
11.权利要求1所述的Tat衍生多肽，其中所述C末端结构域包含SEQIDNOs:133-150之
一的氨基酸序列。
12.权利要求1所述的Tat衍生多肽，其中所述Tat衍生多肽与SEQIDNOs5-95之一的
序列同一性高于85％。
13.权利要求1所述的Tat衍生多肽，其中所述Tat衍生多肽不是SEQIDNOs:2、3或4之
一。
14.药物组合物，其包含根据权利要求1所述的Tat衍生多肽。
15.治疗癌症的方法，所述方法包括：
向有此需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-13中任一项所述的Tat衍生多肽或
者权利要求14所述的药物组合物；和
在所述受试者中导致所述癌症的生长的停止或所述癌症的消退。
16.治疗有效量的权利要求1-13中任一项所述的Tat衍生多肽或者权利要求14所述的
药物组合物用于治疗有此需要的受试者中的癌症，从而导致所述受试者中癌症生长的停止
或癌症的消退的用途。
17.权利要求15所述的方法或者权利要求16所述的用途，其中所述Tat衍生多肽以多剂
被施用。
18.权利要求15所述的方法或者权利要求16所述的用途，其中所述施用步骤包括重复
性的施用循环，其中每个循环包括在确定的时间段中施用多剂的所述Tat衍生多肽，之后是
休息时间段，并且其中所述循环被重复多次。
19.权利要求15所述的方法或者权利要求16所述的用途，其中所述施用步骤包括重复
性的施用循环，其中每个循环包括在确定的时间段中施用多剂的所述Tat衍生多肽，之后在
确定的时间段中施用单剂或多剂的治疗剂，并且其中所述循环被重复多次。
20.权利要求18所述的方法或用途，其中所述治疗剂是环磷酰胺。
21.权利要求15所述的方法或者权利要求16所述的用途，其中所述癌症是肾上腺皮质
癌、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、支气管
腺瘤/类癌、类癌瘤、宫颈癌、慢性骨髓增殖性疾病、结肠癌、促纤维增生性小圆细胞瘤、子宫
内膜癌、室管膜瘤、食道癌、尤因氏肉瘤、生殖细胞肿瘤、眼癌、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌肿
瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、妊娠滋养细胞瘤、胶质瘤、胃类癌、头颈癌、心脏癌、肝细胞癌、霍
奇金淋巴瘤、下咽癌、胰岛细胞癌、卡波西肉瘤、肾癌、白血病、唇和口腔癌、脂肪肉瘤、肝癌、
肺癌、淋巴瘤、巨球蛋白血症、髓母细胞瘤、黑色素瘤、默克细胞癌、间皮瘤、嘴癌、多发性骨
髓瘤/浆细胞肿瘤、蕈样肉芽肿、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口癌、口咽癌、卵
巢癌、卵巢上皮癌、胰腺癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、松果腺星形细胞瘤、松
果腺生殖细胞瘤、成松果腺细胞瘤、垂体腺瘤、胸膜肺母细胞瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞
癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、塞扎里综合征、皮肤癌、鳞状细胞癌、胃
癌、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤、甲状腺癌、尿道癌、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、外阴癌、瓦尔登斯
特伦巨球蛋白血症或韦尔姆斯氏瘤。
22.权利要求15所述的方法或者权利要求16所述的用途，其中所述Tat衍生多肽与SEQ
IDNOs5-95之一的序列同一性高于85％。
23.降低患有癌症的受试者中的肿瘤负荷的方法，所述方法包括：
向有此需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-13中任一项所述的Tat衍生多肽或
者权利要求14所述的药物组合物；和
在所述受试者中导致癌症的消退。
24.治疗有效量的权利要求1-13中任一项所述的Tat衍生多肽或者权利要求14所述的
药物组合物用于降低患有癌症的受试者中的肿瘤负荷，从而导致所述受试者中癌症的消退
的用途。
25.权利要求23所述的方法或者权利要求24所述的用途，其中所述Tat衍生多肽以多剂
被施用。
26.权利要求23所述的方法或者权利要求24所述的用途，其中所述施用步骤包括重复
性的施用循环，其中每个循环包括在确定的时间段中施用多剂的所述Tat衍生多肽，之后是
休息时间段，并且其中所述循环被重复多次。
27.权利要求23所述的方法或者权利要求24所述的用途，其中所述施用步骤包括重复
性的施用循环，其中每个循环包括在确定的时间段中施用多剂的所述Tat衍生多肽，之后在
确定的时间段中施用单剂或多剂的治疗剂，并且其中所述循环被重复多次。
28.权利要求27所述的方法或用途，其中所述治疗剂是环磷酰胺。
29.权利要求23所述的方法或者权利要求24所述的用途，其中所述癌症是肾上腺皮质
癌、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、基底细胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脑癌、乳腺癌、支气管
腺瘤/类癌、类癌瘤、宫颈癌、慢性骨髓增殖性疾病、结肠癌、促纤维增生性小圆细胞瘤、子宫
内膜癌、室管膜瘤、食道癌、尤因氏肉瘤、生殖细胞肿瘤、眼癌、胆囊癌、胃癌、胃肠道类癌肿
瘤、胃肠道间质瘤(GIST)、妊娠滋养细胞瘤、胶质瘤、胃类癌、头颈癌、心脏癌、肝细胞癌、霍
奇金淋巴瘤、下咽癌、胰岛细胞癌、卡波西肉瘤、肾癌、白血病、唇和口腔癌、脂肪肉瘤、肝癌、
肺癌、淋巴瘤、巨球蛋白血症、髓母细胞瘤、黑色素瘤、默克细胞癌、间皮瘤、嘴癌、多发性骨
髓瘤/浆细胞肿瘤、蕈样肉芽肿、鼻腔和鼻旁窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口癌、口咽癌、卵
巢癌、卵巢上皮癌、胰腺癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、松果腺星形细胞瘤、松
果腺生殖细胞瘤、成松果腺细胞瘤、垂体腺瘤、胸膜肺母细胞瘤、前列腺癌、直肠癌、肾细胞
癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤、塞扎里综合征、皮肤癌、鳞状...

【专利技术属性】
技术研发人员：约舒华·高德博格，科林·比尔，
申请(专利权)人：品诺制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US