从绿茶茶叶分离儿茶素的方法技术

已有许多关于从绿茶分离（－）－ＥＧＣＧ的报道。然而，许多水溶性与儿茶素相似并且结构与儿茶素类似的组分的存在使得分离纯（－）－ＥＧＣＧ变得困难。缺少简单、有效和廉价的获得纯（－）－ＥＧＣＧ的方法妨碍了在动物和人的临床研究中对（－）－ＥＧＣＧ进行评估。本发明专利技术提供了分离儿茶素（包括（－）－ＥＧＣＧ）的方法：首先将儿茶素转化成它们各自的酯形式，然后通过色谱法分离酯化的儿茶素，并将其变回到儿茶素。本发明专利技术的方法相对简单，并且可获得大量的儿茶素。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及。
技术介绍
绿茶含有许多成分，包括通常已知为儿茶素的多酚。认为儿茶素 是茶叶的许多生物学作用的原因。绿茶多酚的一些主要成分是(-)-表掊儿茶素-3-掊酸酯(EGCG)、(-)-表掊儿茶素(EGC)、表儿茶素-3-掊酸酯 (ECG)和(-)-表儿茶素(EC)。特别是，(-)-EGCG,作为最丰富的儿茶素， 己经发现其具有抗癌、抗菌、抗病毒作用，并且对血液中的胆固醇水 平具有有益的作用。尽管发现绿茶中的其它儿茶素在上述应用中的有 效性低于EGCG，但是它们也可具有其它生物活性，并且提高它们的可 用性可帮助发现这些活性。绿茶还含有其它组分如咖啡因、原花色素、 碳水化物、氨基酸、和可溶性矿物质，它们在绿茶输液中与儿茶素一 起可溶于水中。已有许多关于从绿茶分离(-)-EGCG的报道。然而，许多水溶性与 儿茶素相似并且结构与儿茶素类似的组分的存在使得分离纯(-)-EGCG 变得困难。美国专利6，210，679描述了四步骤过程，包括三个柱色谱分 离过程从而最终得到95-98。/。纯的(-)-EGCG。因为需要使用昂贵的反相 柱添充，该方法耗时且不经济。美国专利公开20030083270描述了通 过在大孔极性树脂上在加压下使用极性洗脱溶剂对绿茶提取物进行色 谱分离提供(-)-EGCG的方法。该方法提供了 75。/。-97。/。纯的(-)-EGCG。 然而，从绿茶提取物获得(-)-EGCG的收率仅为约73%，因此认为该方 法不是有效方法。缺少简单、有效和廉价的获得纯T(-)-EGCG的方法 妨碍了在动物和人的临床研究中对(-)-EGCG进行评估。本专利技术目的因此，本专利技术的目的是提供从绿茶提取物分离儿茶素的方法，该 方法包括相对简单的步骤，并且优选更有效。本专利技术的另一目的是解 决了现有技术中所述的至少一个或多个问题。至少，本专利技术的目的是 为公众提供了一种有用的选择方案。专利技术概述因此，本专利技术提供。首先将儿茶素 转化成相应的酯形式，形成酯混合物，然后通过适当的方法进行分离。优选地，将儿茶素转化成它们各自的全乙酸酯形式。更优选地， 通过乙酸酐将儿茶素转化成相应的全乙酸酯形式。转化的儿茶素可通过柱色谱法进行分离，优选通过包含己烷和乙酸乙酯的混合物在硅胶上洗脱。更优选地，己烷和乙酸乙酯的比为1:2 的体积比。任选地，在分离转化的儿茶素之前可首先过滤酯混合物得到滤液。 更优选地，在分离转化的儿茶素之前滤液可用水洗涤，干燥，然后浓縮。转化的儿茶素被分离后，可将它们变回到儿茶素，优选通过乙酸 铵的甲醇溶液进行。可通过本专利技术方法分离的儿茶素可包括(-)-表掊儿茶素-3-掊酸 酯、(-)-表掊儿茶素、表儿茶素-3-掊酸酯和(-)-表儿茶素。附图说明本专利技术的优选方案将以附图作为例子并参考附图进行说明，其中 图1表示本专利技术的分离方法的优选方案的反应路线图；和图2表示(-)-EGC六乙酸酯(2)的X射线衍射晶体结构。优选实施方案的详述现在参考附图在下文中描述本专利技术。本专利技术的目的、特征和各方面在以下描述中被公开或者是显而易 见的。本领域的普通技术人员可以理解的是，本专利技术的讨论仅用于描 述示例性实施方案，其并非意在对本专利技术的广泛方面进行限制，本发 明的广泛方面以示例性构造被概括。根据本专利技术，令人惊讶地发现，绿茶粗提取物中的儿茶素可在儿 茶素被转化成它们各自的酯形式之后相对容易地分离。然后分离转化 的儿茶素。柱色谱法是广泛使用的分离方法之一。虽然在目前没有任 何证据，但是据信将儿茶素转化成它们各自的酯形式可增强儿茶素对 例如色谱分离期间所用的固定载体的物理性质的区别。儿茶素可被转化成多种不同的酯形式。虽然有可能仅仅将儿茶素 上的一部分羟基转化为酯形式，但是优选将所有的羟基转化成单一类 型的酯基。首先，这减少了后续分离的复杂性。另外，其更加经济。 在以下的实施例中，通过过量的乙酸酐将儿茶素转化成它们各自的全 乙酸酯形式。应当注意到，可使用其它的酯形式如过苯甲酸酯形式。 当然可使用任何适当的方法将儿茶素转化成它们各自的全乙酸酯形 式，例如使用乙酰氯代替乙酸酐。虽然还可将儿茶素转化成醚形式，但不希望如此，因为将儿茶素 转化成酯形式或将酯再变回到儿茶素时所涉及的剧烈的反应条件可能 破坏儿茶素本身。图1表示本专利技术的分离方法的优选方案的反应路线图。如图1所 示，绿茶茶叶中的儿茶素首先被转化成它们的全乙酸酯形式。直接对绿茶茶叶施用酯化剂如乙酸酐可实现这一目的。或者，通过将绿茶茶 叶置于热水中首先获得绿茶粗提取物，可将热水提取物干燥然后与酯 化剂反应。然而，这可能是较不希望的，因为这一额外提取步骤可降 低总提取效率。然后通过常规的柱色谱法分离转化的儿茶素。洗脱液可以是包含己烷和乙酸乙酯的混合物，己烷和乙酸乙酯的优选比为1:2的体积比。为了进一步增强本专利技术的分离方法的效率，在通过色谱法分离转 化的儿茶素之前可首先过滤全乙酸酯混合物。然后滤液可用水洗涤， 干燥，然后通过蒸发进行浓縮。将儿茶素分离成它们各自的酯形式后，可通过例如使用乙酸铵的 甲醇溶液将它们转化成儿茶素。根据本专利技术的方法，可从绿茶提取物分离包括以下的儿茶素类(-)-表掊儿茶素-3-掊酸酯、(-)-表掊儿茶素、表儿茶素-3-掊酸酯和(-)-表儿茶素。实施例 一般概括绿茶包装购自SEIYU,商标为OSK，或者，ShouMee绿茶茶叶购 自Hong Kong的Ying Kee Tea House。除非另作说明，所有试剂和溶剂 购自商业供应商并且无需另外纯化即可使用。在使用前将乙酸铵进行 减压干燥。HPLC中使用的水是双重去离子水。使用Varian-500核磁共 振波谱仪测定&和nC光谱。在Finnigan型Mat 95 ST质谱仪上，使 用阳离子电喷射离子化技术记录低分辨率质谱和高分辨率质谱。在 Biichi熔点B-545仪上记录熔点测定并且该测定值未经校正。在Merck 预涂覆硅胶60 F254板上进行薄层色谱法，并且在254 nm灯下进行观 察。硅胶(Merck， 230-400目)用于柱色谱法。在装备有C-18反相柱 (CAPCELLPAKC18UG 120， 4.6 mm i.d. x 250 mm)的HP 1100液相色谱仪上进行HPLC。从得自SEIYU的绿茶茶叶分离单独的儿茶素将吡啶(12 mL)和乙酸酐(8 mL)添加到在圆底烧瓶中的绿茶茶叶 (4.55 g，购自SEIYU)中，混合物在室温下搅拌过夜，然后将其真空干 燥，反应混合物用乙酸乙酯(20mLx4)洗涤并过滤，滤液用水(20mLx 4)洗涤。滤液用硫酸钠干燥并蒸发，粗产物通过硅胶柱色谱法使用正己 垸:乙酸乙酯(体积比为l:2)作为洗脱液进行纯化，得到粗的(-)-EGCG全 乙酸酯l(Rf值为0.3，绿色)，将粗产物1溶于乙酸乙酯中并通过活性 炭层(l cm宽x 3 cm长)过滤，蒸发后得到纯的(-)-EGCG全乙酸酯(l)， 为白色固体(0.19g，4.3。/o收率)。除1之外，还从柱色谱法(己烷:乙酸乙 酯为1:2， Rf值为0.6)并通过活性炭层过滤分离了(-)-EGC六乙酸酯(2)。 粗化合物2从二氯甲垸:乙醚:己烷(1:2:0.5)重结晶，得到纯的EGC六乙 酸酯2，为白色固体(0.07g， 本文档来自技高网...

【技术保护点】
从绿茶茶叶分离儿茶素的方法，该方法包括以下步骤：将儿茶素转化成相应的酯形式，形成酯混合物；分离酯混合物中的转化的儿茶素。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈德恒，林惠霞，
申请(专利权)人：香港理工大学，麦吉尔大学，
类型：发明
国别省市：HK[中国|香港]