【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医疗检测
，具体涉及一种精子质量评估的方法。
技术介绍
随着社会工业的不断发展，不育夫妇的总发病率明显升高。2004年欧洲生殖学会统计：育龄夫妇1年内不能怀孕者占25%，其中15%寻求治疗，男方因素引起不育占50%。男性不育的病因有性功能障碍(1.7%)，精索静脉曲张(12.3%)，生殖道感染(6.6%)，先天性发育异常(2.1%)后天获得性疾病(2.6%)，内分泌紊乱(0.6%)，免疫性因素(3.1%)，其他异常(3%)，但是高达60%~75%的患者找不到原因，称为特发性男性不育，他们只表现为少精、弱精或畸形精子症等精子质量异常。不明原因的男性不育可能由于多种因素造成，如长期应激环境因素引起内分泌紊乱、活性氧和基因缺陷等。多年来，传统的精液常规分析一直是用于判断男性生育力的最基本临床指标。临床上对绝大部分的男性不育患者的真正不育原因仍然不清楚。尤其是临床上大约有三分之一不育患者，男性的常规精液分析结果均正常和接近正常。临床上把这类患者划为不明原因不育症。因此，长期以来，临床对男性不育的诊断存在很大的困难。最主要的原因是常规精液分析只测定精子的数量，存活力，活动率和形态。这些指标只能反映最基本的精液质量，不能反映所有的精子功能，比如，精子核的成熟和DNA损伤，精子与人卵透明带结合反应与穿透，顶体状况和反应及与卵黄膜结合能力等。因此，需要建立特殊的精子功能试验才能测定以上这些功能。精子获能是精卵结合形成...
【技术保护点】
一种精子质量评估的方法，其特征在于：具体步骤如下：A、精子的洗涤收集新鲜液化精液标本，用磷酸缓冲液或者BWW培养液洗涤精子，充分除去残留的精浆成分，再离心分离出精子；B、提取精子蛋白向A步骤分离出的精子中加入细胞裂解液和蛋白酶抑制剂cocktail，混匀，待无明显的细胞沉淀即充分裂解，在4℃下高速离心，上清液即蛋白提取物；C、测定精子蛋白提取物的蛋白浓度（1）用细胞裂解液配制牛血清白蛋白的蛋白标准原液，再用裂解液按2/1.0/0.5/0.25/0.125/0mg/ml的浓度梯度将蛋白标准原液稀释为蛋白标准溶液，向检测板内依次加入各蛋白标准溶液；加入待测样本于检测板内，再加入裂解液稀释；（2）按A:B=50：1的体积比配制试剂A液和B液的混合液，将其加入上述各蛋白标准溶液和待测样本的孔内，轻轻混匀，将检测板置于37℃反应30min，然后用酶标仪读取各孔吸光度，根据蛋白标准曲线计算出待测样本的蛋白浓度；D、测定精子唾液酸酶活性（1）用检测缓冲液将唾液酸酶标准原液按5/2.5/1.25/0.625/0.312/0 mU/ml的浓度梯度将其稀释为唾液酸酶标准溶液，向检测板内依次加入各唾液酸酶标...
【技术特征摘要】
1.一种精子质量评估的方法，其特征在于：具体步骤如下：
A、精子的洗涤
收集新鲜液化精液标本，用磷酸缓冲液或者BWW培养液洗涤精子，充分除去残留的精浆
成分，再离心分离出精子；
B、提取精子蛋白
向A步骤分离出的精子中加入细胞裂解液和蛋白酶抑制剂cocktail，混匀，待无明显的
细胞沉淀即充分裂解，在4℃下高速离心，上清液即蛋白提取物；
C、测定精子蛋白提取物的蛋白浓度
（1）用细胞裂解液配制牛血清白蛋白的蛋白标准原液，再用裂解液按2/1.0/0.5/0.25/
0.125/0mg/ml的浓度梯度将蛋白标准原液稀释为蛋白标准溶液，向检测板内依次加入各蛋
白标准溶液；加入待测样本于检测板内，再加入裂解液稀释；
（2）按A:B=50：1的体积比配制试剂A液和B液的混合液，将其加入上述各蛋白标准溶液
和待测样本的孔内，轻轻混匀，将检测板置于37℃反应30min，然后用酶标仪读取各孔吸光
度，根据蛋白标准曲线计算出待测样本的蛋白浓度；
D、测定精子唾液酸酶活性
（1）用检测缓冲液将唾液酸酶标准原液按5/2.5/1.25/0.625/0.312/0mU/ml的浓度梯
度将其稀释为唾液酸酶标准溶液，向检测板内依次加入各唾液酸酶标准溶液；加入待测样
本于检测板内，再加入检测缓冲液稀释；
（2）用检测缓冲液稀释荧光试剂，将其加入上述各唾液酸酶标准溶液和待测样本的孔
内，再将检测板置于37℃避光孵育1-2小时后，用酶标仪读取各孔荧光强度，根据唾液酸酶
活性标准曲线计算出待测样本的唾液酸酶活性，最后得出唾液酸酶活性/蛋白浓度的值即
可。
2.根据权利要求1所述的一种精子质量评估的方法，其特征在于：所述的试剂A液为：
1％BCA二钠盐...
【专利技术属性】
技术研发人员：马芳，马学，李福平，
申请(专利权)人：四川大学华西第二医院，
类型：发明
国别省市：四川;51
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