人参皂苷多组分共载靶向纳米体系的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种人参皂苷多组分共载靶向纳米体系的制备方法，包括将蛋黄卵磷脂、胆固醇和聚乙二醇‑二棕榈酰磷脂酰胆碱溶解后缓慢滴加温水搅拌，得到脂质水溶液；将包含人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2和人参皂苷Rb1的多组分有效成分与聚乳酸‑羟基乙酸共聚物溶解后缓慢滴加至脂质水溶液中搅拌均匀并去除溶剂，得到脂质体纳米粒；将核酸适配体溶解后修饰于脂质体纳米粒表面，最后经过过滤、灭菌得到均匀的泛乳光的纳米体系溶液。本发明专利技术通过纳米化技术增加药物的抗肿瘤作用，将三种人参皂苷成分共载于纳米系统中可实现多成分的肿瘤组织共传递，从而克服不同成分代谢行为不同和进入肿瘤细胞能力不同的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，具体涉及到一种人参皂苷多组分共载靶向纳米体系的制备方法。
技术介绍
中药活性成分在抗肿瘤方面发挥出越来越显著的疗效，目前中药活性成分在抗肿瘤应用中仍存在一些问题，例如大多数抗癌药物水溶性差、难吸收、半衰期短、递送效率低、游离药物靶向性差等。抗肿瘤中药制剂亟需解决的现实问题是：在保证制剂安全性的前提下，改善中药有效成分的递送，提高有效成分的肿瘤靶向性；针对特定类型肿瘤合理设计剂型，探索和丰富抗肿瘤中药的新给药途径。近年来，纳米递药系统及新型生物材料的交叉应用为抗癌药物的有效传递带来新的希望，通过纳米载体包载药物可以显著提高药物的体内安全性，其“纳米尺寸”可以增强肠道吸收，促进药物在肿瘤组织的蓄积；还可以通过表面特定功能基团的修饰，提高细胞摄取和肿瘤主动靶向能力。因此，纳米制剂技术为提高抗肿瘤中药体内安全性和递送效率、丰富药物给药方式提供了可行的途径。然而中药抗肿瘤成分与化疗药物不同，其抗肿瘤的“单打独斗”能力一般都弱于化药，但其作用具有多靶点、多层次性，适宜于多成分协同作用，因此开发中药多成分递药系统成为目前抗肿瘤研究的重点之一。但由于不同中药活性成分在理化性质、生物渗透性、体内分布、有效剂量等方面存在较大差异，难以保证各成分以游离方式共传递时，能在病灶部位以恒定比例聚集，从而难以实现最佳的协同抗肿瘤效应，因而传统的中药抗肿瘤制剂基本基于成分自身在体内的命运主导临床疗效，其治疗效果和安全性往往都是被动的、不可控的。人参皂苷是人参中多种皂苷类成分的总称，目前已分离并鉴定出60余种，其中以Rh2、Rg3、Rb1等成分抗肿瘤作用最强，其抗肿瘤机制表现为抑制肿瘤生长及肿瘤新生血管形成，逆转肿瘤多药耐药、影响肿瘤信号转导相关基因的表达及增强患者免疫能力，对化疗具有增效减毒作用等。目前已有研究采用纳米胶束、纳米乳、固体脂质纳米粒、纳米微球等多种纳米载体对单一人参皂苷成分进行包载；另外有研究将人参皂苷Rg3、Rb1、Rh2三种成分采用胶束进行共载，以用于抗肿瘤或其他方面。但与脂质纳米粒相比，聚合物胶束贮藏期间及进入体循环后稳定性相对较差，同时其载药性能有限，因此目前临床抗肿瘤纳米制剂仍以脂质纳米粒为主。例如已经公开的中国专利CN103271891A中公开了一种人参皂苷纳米胶束及其制备方法、应用和药物组合物，该专利中采用了人参皂苷有效成分与纳米聚合物胶束共载，解决了脂溶性药物难溶于水的问题，克服了现有的聚合物胶束载药能力不理想、生物兼容性差的缺陷，然而由于聚合物胶束自身以及该专利的工艺缺陷，仍然没有解决人参皂苷的主动靶向问题，且肿瘤组织细胞摄取能力不够，从而导致靶向组织的药物浓度低。此外，被动靶向制剂的肿瘤组织传输效率有限，开发具有良好肿瘤靶向作用的主动靶向纳米系统更具有应用前景。但目前还未见有根据人参皂苷成分抗肿瘤作用设计所得主动靶向纳米体系，人参皂苷多成分共载的新型递药系统亟需完善。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种人参皂苷多组分共载靶向纳米体系的制备方法，可以解决现有技术中生物相容性差、稳定性较低，肿瘤组织细胞药物活性成分分布少的缺陷，可以获得水溶性高、吸收性好、稳定性高、具有主动靶向性，活性成分可以在肿瘤组织处聚集的效果。为达上述目的，本专利技术的一个实施例中提供了一种人参皂苷多组分共载靶向纳米体系的制备方法，包括以下步骤：步骤1、将蛋黄卵磷脂、胆固醇和聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰胆碱溶解后缓慢滴加温水搅拌，得到脂质水溶液；步骤2、将包含人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2和人参皂苷Rb1的多组分有效成分与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解后缓慢滴加至脂质水溶液中搅拌均匀并去除溶剂，得到脂质体纳米粒；步骤3、将核酸适配体溶解后修饰于脂质体纳米粒表面，最后经过过滤、灭菌得到均匀的泛乳光的纳米体系溶液。作为本专利技术的优化方案，步骤1中的蛋黄卵磷脂、胆固醇和聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰胆碱溶解于无水乙醇中，所述步骤2中人参皂苷多组分有效成分与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解在乙腈中。作为本专利技术的优化方案，步骤2中人参多组分有效成分与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解后经过超声波处理再滴加至脂质水溶液中。作为本专利技术的优化方案，步骤2中多组分有效成分与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解后缓慢滴加至脂质水溶液后在冰浴和超声波处理条件下搅拌。作为本专利技术的优化方案，步骤3中核酸适配体为适配体AS1411。作为本专利技术的优化方案，步骤3中核酸适配体使用磷酸缓冲溶液溶解。作为本专利技术的优化方案，步骤3中使用孔径为0.45μm的滤膜去除未包载药物，使用0.2μm的滤膜滤除病原体。作为本专利技术的优化方案，多组分有效成分中人参皂苷Rg3的含量为10%~25%，人参皂苷Rh2的含量为10%~15%，人参皂苷Rb1的含量为10%~15%，且Rg3、Rh2和Rb1的总量大于等于40%。作为本专利技术的优化方案，纳米体系溶液中含有蛋黄卵磷脂1%~5%、胆固醇1%~5%、聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰胆碱0.5%~5%、聚乳酸-羟基乙酸共聚物10%~35%、核酸适配体0.5%~2%。此外，本专利技术还开了通过上述方法得到的含有人参皂苷多组分共载靶向纳米体系在制备抗肿瘤药物中的应用。此外，本专利技术的物料名称与其对应的缩写对照表如下：英文缩写中文名称PEG-DPPC聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰胆碱PLGA聚乳酸-羟基乙酸共聚物PBS磷酸缓冲液综上所述，本专利技术具有以下优点：本专利技术通过纳米化增加药物的抗肿瘤作用，将三种人参皂苷成分共载于纳米系统中可实现多成分的肿瘤组织共传递，从而克服不同成分代谢行为不同和进入肿瘤细胞能力不同的问题。同时本专利技术采用脂质聚合物纳米体系，其生物相容性好，成本低，易于工业化生产，可克服现有助溶剂或其他递药方式存在的安全性问题，意义重大。本专利技术中采用适配体AS1411修饰于纳米粒表面，以靶向肿瘤细胞表面表达的核仁蛋白为受体，从而可以与肿瘤细胞高特异性、高亲和性的结合。并且本专利技术提供的多成分共载体系不含有机溶媒及有毒副作用的增溶剂，因此无过敏性，副作用小。本专利技术提供的纳米粒活性成分的含量较高，满足了临床药效所需的高浓度，同时该体系通过EPR效应还可以改变皂苷在人体内的分布，提高药物的生物利用度，同时可以使人参皂苷在体内浓集于肿瘤部位，提高该化合物的抑瘤作用。附图说明图1为本专利技术的示意图；图2为三种人参皂苷的HPLC测定图；图3为人参皂苷脂质聚合物纳米粒的平均粒径DLS测定图；图4为人参皂苷脂质聚合物纳米粒的电位测定图；图5为人参皂苷脂质聚合物纳米粒的透射电镜图；图6为人参皂苷脂质聚合物纳米粒的体外药物释放图。具体实施方式实施例1将5mg蛋黄卵磷脂、5mg胆固醇与2.5mgPEG-DPPC材料溶于2mL无水乙醇中，缓慢滴加入20mL60°C的水中，持续搅拌5min得到脂质水溶液。将15mgPLGA材料、10mg人参皂苷Rg3、5mg人参皂苷Rh2和5mg人参皂苷Rb1溶于乙腈中，超声波处理1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人参皂苷多组分共载靶向纳米体系的制备方法，包括以下步骤：步骤1、将蛋黄卵磷脂、胆固醇和聚乙二醇‑二棕榈酰磷脂酰胆碱溶解后缓慢滴加温水搅拌，得到脂质水溶液；步骤2、将包含人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2和人参皂苷Rb1的多组分有效成分与聚乳酸‑羟基乙酸共聚物溶解后缓慢滴加至脂质水溶液中搅拌均匀并去除溶剂，得到脂质体纳米粒；步骤3、将核酸适配体溶解后修饰于脂质体纳米粒表面，最后经过过滤、灭菌得到均匀的泛乳光的纳米体系溶液。

【技术特征摘要】
1.一种人参皂苷多组分共载靶向纳米体系的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、将蛋黄卵磷脂、胆固醇和聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰胆碱溶解后缓
慢滴加温水搅拌，得到脂质水溶液；
步骤2、将包含人参皂苷Rg3、人参皂苷Rh2和人参皂苷Rb1的多组分有
效成分与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解后缓慢滴加至脂质水溶液中搅拌均匀并去
除溶剂，得到脂质体纳米粒；
步骤3、将核酸适配体溶解后修饰于脂质体纳米粒表面，最后经过过滤、灭
菌得到均匀的泛乳光的纳米体系溶液。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1中的蛋黄卵磷脂、
胆固醇和聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰胆碱溶解于无水乙醇中，所述步骤2中人参
皂苷多组分有效成分与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解在乙腈中。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2中人参多组分有效
成分与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解后经过超声波处理再滴加至脂质水溶液中。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2中多组分有效成分
与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶解后缓慢滴加至脂质水溶液后在...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹亮，章津铭，李维，胡一晨，雨田，符佳，杨林，郭晓恒，赵江林，赵钢，
申请(专利权)人：成都大学，
类型：发明
国别省市：四川;51