升麻有机酸的提取方法及新用途技术

本发明专利技术公开了升麻有机酸的提取方法及新用途。升麻脂溶性有机酸制备方法为：加乙醇浸泡、加热回流，过滤；将提取物溶解，加盐酸，以醋酸乙酯萃取；合并上层相溶液，以氢氧化钠萃取；取下层碱液，调节ｐＨ，醋酸乙酯萃取，合并上层相溶液、洗涤，除去醋酸乙酯后得到。升麻水溶性有机酸制备方法为：加蒸馏水加热、过滤，取滤液，浓缩加乙醇，静置、离心；滤液至无醇味，加蒸馏水、过树脂柱，洗脱；收集流出液减压蒸干、加入蒸馏水并反复蒸干，即得。同时公开了升麻有机酸在制备治疗乙型肝炎药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种中药有机酸的提取方法及新用途。特别是涉及升麻有机酸的提取方法及新用途。
技术介绍
药典2000版一部P55记载升麻为毛茛科植物大三叶升麻Cimicifugaheracleifolia Kom.\兴安升麻Cimicifuga dahurica(Turcz.)Maxim.\或升麻Cimicifu foetida L.的干燥根茎。秋季采挖。性味与归经辛、微甘，微寒。归肺、胃、大肠经。功能与主治发表透疹，清热解毒，升举阳气。用于风热头痛，齿痛，口疮，咽喉肿痛，麻疹不透，阳毒发斑；脱肛，子宫脱垂。用法与用量3-9克。乙型肝炎又称为血清性肝炎、乙型病毒性肝炎(简称乙肝)，是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病。通过血液与体液传播，具有慢性携带状态。中国是乙型肝炎最流行的国家，人群感染率高，在某些地区感染率达到35％以上，是当前危害人民健康最严重的传染病.我国HBsAg携带人口在1亿以上，占全世界HBsAg携带人口的50％。根据我国肝炎调查结果，估计我国乙肝病人约有2700万人，每年新发病人约有900万。乙肝临床表现多样化，易发展为慢性肝炎和肝硬化，少数病人可转化为原发性肝癌.肝纤维化是诸多慢性肝病发展为肝硬化过程的共有病理变化，而慢性、持续性肝损伤是肝纤维化形成的前提。造成肝损伤的因素很多，一般因药物、大量酒精、过敏等造成急性肝损伤，乙肝、肝硬化、长服某些药物等可导致急慢性肝损伤。目前市场上用于乙肝的药物中，干扰素是首选药，是国内外公认的较为有效的抗病毒药物。由于机体对干扰素的反应存在较大个体差异，不少研究结果表明，欧美国家患者疗效较佳，而东方(如中国、日本)患者疗效较差，大多数患者在干扰素治疗期间均有不同程度的副作用。另核苷类药物具改善肝组织学病变和肝功能的作用，其安全性和耐受性较好，但在长期应用过程中出现病毒基因的变异，从而降低对药物的敏感产生耐药现象，停药以后发病率相当高。我国中药治疗乙肝的疗效已被大量的临床所证实，中药在抗病毒、降低转氨酶、调整机体免疫力、保护肝细胞等方面都可发挥较好的疗效，但是目前上市药物多为中药复方制剂，本专利技术治疗乙肝的药物为单味中药提取物制剂，副作用小，同时具有多方面的药理作用。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于公开升麻有机酸的提取方法；本专利技术的另一个目的在于公开升麻有机酸抗乙肝病毒，预防和治疗乙型肝炎的新用途。本专利技术目的是通过如下技术方案实现的A脂溶性有机酸取升麻药材1000重量份，加70-80％乙醇使液面漫过药材，浸泡0-16小时后加热回流2-4次，每次6000-8000体积份，过滤；滤液浓缩、干燥，得提取物100-140重量份；取该提取物25-35重量份，以600-1000体积份50-70℃蒸馏水分2-6次将其溶解并转移到分液装置中，加入5-10体积份28-37％盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取2-6次，每次200-500体积份，合并上层相溶液；上层相溶液以2-6％氢氧化钠溶液200-600体积份萃取2-5次，取下层碱液；下层碱液以28-37％盐酸溶液调节pH至2-3后，每次200-500体积份的醋酸乙酯萃取，萃取2-6次；合并上层相溶液，以蒸馏水洗涤，每次50-200体积份，直至最后的蒸馏水洗出液呈pH4-6；该有机层相溶液除去醋酸乙酯后得到升麻脂溶性有机酸3-6重量份；B水溶性有机酸取升麻药材1000重量份，加蒸馏水5000-8000体积份，加热煮沸1-4次，每次保持5000-8000体积份，沸腾1-3小时；沸腾期间经常增补蒸馏水以保持水的用量不少；过滤，取滤液，浓缩到800-1200体积份，放冷后，加入2000-4000体积份的90-100％乙醇，边加边搅拌使混合均匀，静置8-48小时，以1500-4000rpm离心10-50分钟，倾出滤液；滤液回收乙醇至无醇味，加蒸馏水调节体积到800-1200体积份；取该提取液，通过已预处理过的阳离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，收集流出液直至流出液呈pH6-7为止；此流出液全部通过已预处理过的阴离子交换树脂柱，以蒸馏水洗脱，待流出液呈pH8-7后，改用0.3-0.7N盐酸溶液洗脱，并开始收集流出液直至流出液呈pH1-2时为止；该流出液经减压蒸干后，加入10-100体积份蒸馏水并减压蒸干，反复加蒸馏水并反复蒸干，直至最后产物呈pH4-6为止，即得水溶性有机酸5-15重量份。本专利技术所称的升麻有机酸是指由上述方法所得的脂溶性有机酸和(或)水溶性有机酸。本专利技术的升麻有机酸加上药剂学接受的辅料制成临床可接受的各种剂型，如片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、冻干粉针剂、皮下给药制剂、栓剂等剂型。本专利技术中重量份/体积份与克/毫升相对应。升麻有机酸经药理作用研究，证明具有良好的抗乙肝病毒作用，可缓解乙肝的进一步发展。升麻有机酸制成的药物具有比较显著的对抗乙肝病毒、保护肝功能作用。以下实验例的药效学研究用于进一步说明但不限于本专利技术的新用途。药效学研究实验例1体外对乙型肝炎病毒的抑制作用试验受试药物升麻有机酸(脂溶性有机酸、水溶性有机酸)由中国中医研究院中药研究所提供。体外实验前用高纯水配制成10mg/ml的母液，过滤除菌，4℃保存备用。2.2.15细胞乙型肝炎病毒DNA克隆转染的人肝癌细胞(Hep-G2)的2.2.15系，由北京大学第一附属医院病毒室提供。试剂乙型肝炎表面抗原检测试剂盒、乙型肝炎e抗原检测试剂盒，为华美生物工程公司产品；乙型肝炎病毒DNA荧光定量PCR检测试剂盒安达基因诊断中心产品，G418；Engls培养液，日本产品。酶标仪750，Bayer公司产品；ABI5700荧光定量PCR仪。阳性对照药拉米呋啶，葛兰史克制药有限公司产品实验前用高纯水配成20mg/ml的原药液，过滤消毒备用。对2.2.15细胞培养系分泌HBsAg、HBeAg的影响取已长成单层细胞的2.2.15细胞培养板(24孔)，倒掉培养液，加入无毒浓度以下相应稀释度的药液，浓度分别为0.625、0.312、0.156和0.078mg/ml，1ml/孔，每个稀释度做6个复孔，同时设拉米呋啶对照药及细胞对照。置37℃5％CO2培养箱中培养，第8天收集上清，二批实验所收集的上清同时测定HBsAg、HBeAg。采用酶联免疫吸附方法测定，计算抑制率。结果显示对2.2.15细胞分泌HBsAg，在二批实验中升麻提取物所试的4个剂量均有明显的抑制作用，与对照组比较有显著性差异(P＜0.01>，且呈现良好的量效相关性。阳性对照药拉米呋啶对2.2.15细胞分泌HBsAg无抑制作用。结果见表1。对2.2.15细胞分泌HBeAg，在二批实验中升麻提取物所试的4个剂量均有明显的抑制作用，第一批实验组与对照组比较有显著性差异(P＜0.05>，第二批实验由于个别对照空细胞生长状态差抑制率较低，统计学无意义。阳性对照药拉米呋啶对2.2.15细胞分泌HBeAg无抑制作用。结果见表2。表1升麻提取物对2.2.15培养细胞分泌HBsAg的影响 与细胞对照组比较**P＜0.01 *P＜0.05表中结果显示在二批实验中升麻提取物所试的4个剂量对2.2.15细胞分泌HBsAg均有明显的抑制作用，与对照组比较有显著性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种升麻有机酸，其特征在于该有机酸是由如下方法提取得到：取升麻药材１０００重量份，加７０－８０％乙醇使液面漫过药材，浸泡０－１６小时后加热回流２－４次，每次６０００－８０００体积份，过滤；滤液浓缩，干燥，得提取物１００－１４０重量份；取该提取物２５－３５重量份，以６００－１０００体积份５０－７０℃蒸馏水分２－６次将其溶解并转移到分液装置中，加入５－１０体积份２８－３７％盐酸并搅拌均匀；以醋酸乙酯萃取２－６次，每次２００－５００体积份，合并上层相溶液；上层相溶液以２－６％氢氧化钠溶液２００－６００体积份萃取２－５次，取下层碱液；下层碱液以２８－３７％盐酸调节ｐＨ至２－３后，每次２００－５００体积份的醋酸乙酯萃取，共萃取２－６次；合并上层相溶液，以蒸馏水反复洗涤，每次５０－２００体积份，直至最后的蒸馏水洗出液呈ｐＨ４－６；该有机层相溶液除去醋酸乙酯后得到升麻脂溶性有机酸３－６重量份。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：崔晓兰，巢志茂，
申请(专利权)人：崔晓兰，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]