一种快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，该方法是将中国被毛孢菌种采用半连续发酵工艺快速获取富含大量的菌丝体的发酵液，然后将发酵液通过微滤膜处理分离得到中国被毛孢的菌丝体。本发明专利技术改变了传统中国被毛孢间歇性的分批发酵工艺，并且菌丝体的分离采用高效的陶瓷膜微滤替代离心机分离方式。半连续发酵工艺克服了传统分批发酵工艺的工艺环节多，中间间隙时间长，设备效率低等缺点；而采用高效的陶瓷膜过滤发酵液，能够减少进入滤液的菌丝体，既能提高菌丝体的收率，降低滤液的COD，降低污水处理量，又不破坏细胞本身，保证胞内有效成分的全部回收。与传统的工艺相比，本发明专利技术具有显着的经济效益、社会效益和环保效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
，具体涉及一种快速利用深层液态发酵技术生产真菌菌丝体的方法，更确切地说是一种快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法。
技术介绍
微生物发酵可分为分批、补料分批、半连续、连续等多种模式。分批发酵的人力、物力消耗较大，每批发酵都需要进行装料、灭菌、接种、放料、清洗等操作，工序繁琐，发酵周期较长，生产效率较低；补料分批发酵虽可通过补料补充养分或前体的不足，但是由于有害代谢产物的不断积累，产物合成最终难免受到阻遏；连续发酵较分批发酵和补料分批发酵生产强度大大提高，但容易遭受杂菌的污染，菌种易退化，设备投资较大，且发酵产物浓度较低；半连续发酵过程中，通过放掉部分发酵液再补入新鲜培养基，不仅可以补充养分和前体，而且代谢有害物被稀释，从而有利于产物的继续合成。半连续发酵工艺的应用可以起到缓解产物抑制和避免代谢副产物积累的作用，改善了微生物的培养环境，有助于保持菌体活力的稳定，并且对于某些次级代谢产物，其最高的生产速率仅在某些瞬态条件下才能达到。采用半连续发酵工艺不仅可以使这种瞬态条件反复出现，而且还可以提高设备的利用率，因此半连续发酵工艺在次级代谢产物的生产方面有着重要的应用。中国被毛孢菌粉即发酵冬虫夏草菌粉，是从青海新鲜冬虫夏草中分离得到的麦角菌科真菌冬虫夏草的无性世代--中国被毛孢菌种经液体发酵培养所得菌丝体的干燥粉末。主要用于补肺肾，益精气以及肺肾两虚引起的咳嗽、气喘、咯血、腰背酸痛等病及慢性支气管炎的辅助治疗。传统中国被毛孢液态发酵工艺多为间隙性的分批发酵工艺，而分批发酵工艺的人力、物力消耗较大，每批发酵都需要进行装料、灭菌、接种、放料、清洗等操作，工序繁琐，非发酵周期较长，生产效率较低；而后续的分离工艺传统多用离心机进行分离，该方式因受制于离心机分离因子影响，分离过程中菌丝体遭到剪切力破坏，部分有效成分流失到滤液中导致产品质量和收率下降，分离所得滤液较浑浊，里面含有较多的碎菌丝，导致外排滤液COD偏高，该滤液若达到污水排放标准，需要经过复杂的污水处理，污水处理系统工作量太大，给企业带来了严重的经济负担。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决上述中国被毛孢菌粉生产的不足，从而设计了一种快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的绿色新方法，该方法采用半连续发酵工艺既能减少了工艺环节，缩短了非发酵时间，提高了设备利用率，降低了生产成本；同时又采用高效的陶瓷膜过滤，提高菌丝体的收率，减少进入滤液的菌丝体，降低滤液的COD，降低污水处理量；又不破坏细胞本身，保证胞内有效成分的全部回收。该专利技术不但能快速得到高品质的中国被毛孢的菌丝体，又提高了分离过程中菌丝体的收率，增加了经济效益；又降低了废水中COD，减轻了污水处理系统压力，增加了社会效益。本专利技术目的主要是通过以下方式实现的：一种快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，该方法按照下述步骤进行：1)中国被毛孢半连续发酵液制备：将中国被毛孢种子液接种到灭菌后的发酵培养基进行深层液态发酵得到中国被毛孢发酵培养液，所述的深层液态发酵接种量为体积含量的10～20％，通风比为1：0.5-1.5vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在15～20℃下发酵培养10-30天后，放出培养器容积的10-50％的发酵液，补入同等体积的灭菌后的发酵培养基，继续发酵1-10天；如此不断放料、补料，每次补料继续发酵1-10天，反复多次，操作周期可以根据次数调整为12-70天，得到中国被毛孢发酵液；将中国被毛孢菌种子液接种到灭菌后的发酵培养基之前可以将将中国被毛孢菌菌株以常规方法活化后制备得到中国被毛孢菌种子液；优选发酵条件为通风比为1：0.5vvm，罐压0.04Mpa，在20℃下发酵培养25天；2)中国被毛孢发酵液陶瓷膜过滤：将步骤1)中所得的中国被毛孢发酵液通过微滤膜得到发酵液的微滤透析液和菌丝体，收集得到菌丝体；3)低温真空烘干：将步骤2)中所得的菌丝体在真空度为-0.065～-0.095Mpa，60～75℃条件下进行干燥。所述的中国被毛孢种子液是通过以下方法制备得到的：中国被毛孢种子培养基组成为葡萄糖1-3％、蛋白胨0.5-2％、奶粉0.1-1％、麸皮1-3％、磷酸二氢钾0.1-0.5％、七水硫酸镁0.1-0.5％、消泡剂0.01-0.05％；调节pH值5.5-6.5；培养条件为：通风比为1：0.5-1.5vvm，罐压0.02～0.05Mpa，培养温度15～20℃，培养周期5-15天。优选中国被毛孢种子液是通过以下方法制备得到的：将经活化摇瓶中国被毛孢菌菌种接入种子培养基，中国被毛孢种子培养基组成为葡萄糖2％、蛋白胨0.8％、奶粉0.5％、麸皮1.5％、磷酸二氢钾0.3％、七水硫酸镁0.3％、消泡剂0.02-0.03％；调节pH值5.5-6.5；培养条件为：通风比为1：0.5-1vvm，罐压0.03～0.04Mpa，培养温度18～20℃，培养周期5-10天。中国被毛孢发酵培养基组成为葡萄糖1-3％、玉米粉1-3％、蛋白胨0.5-2％、酵母粉0.1-1％、麸皮1-3％、磷酸二氢钾0.1-0.5％、七水硫酸镁0.1-0.5％、消泡剂0.01-0.05％；调节pH值5.5-6.5。该方法步骤2)所述的微滤膜为陶瓷膜或有机膜，其孔径在0.05～0.5μm，操作温度为50～60℃，工作压力：进压为2～4bar，出压为0～5bar。优选该方法步骤2)所述的微滤膜为陶瓷膜或有机膜，其孔径在50nm，操作温度为50～60℃，工作压力：进压为3bar，出压为1bar。本专利技术适用于任何中国被毛孢菌种(Ophiocordycepssinensis)，如保藏于由中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏号CICC14088、14099、14114等均可以使用。本专利技术所采用的中国被毛孢菌株不限于某个具体生产厂家，市售均可使用。本专利技术为快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉提供了一种新的方法。该方法具有以下几个突出的优点：1、发酵周期短：传统的分批发酵工艺，每批发酵都需要进行装料、灭菌、接种、放料、清洗等操作，工序繁琐，总发酵周期长，而采用半连续发酵工艺减少了工艺环节，缩短了非发酵时间和发酵时间，提高了设备利用率和发酵强度，降低了生产成本。2、提高收率：采用微滤膜孔径0.05～10μm，显著提高了菌丝体得率。3、提高产品质量：传统离心机分离过程中中国被毛孢菌丝体遭到剪切力破坏，部分有效成分流失到滤液中导致菌丝体有效成分降低，该工艺采用微滤膜过滤，操作过程中不会产生剪切力，有效保证菌丝体有效成分。3、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，其特征是该方法包括下述步骤：1)中国被毛孢半连续发酵液制备：将中国被毛孢种子液接种到灭菌后的发酵培养基进行深层液态发酵得到中国被毛孢发酵培养液，接种量为体积含量的10～20％，通风比为1：0.5‑1.5vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在15～20℃下发酵培养10‑30天后，放出培养器容积的10‑50％的发酵液，补入同等体积的灭菌后的发酵培养基，继续发酵1‑10天；如此不断放料、补料，每次补料继续发酵1‑10天，反复多次，得到中国被毛孢发酵液；2)中国被毛孢发酵液陶瓷膜过滤：将步骤1)中所得的中国被毛孢发酵液通过微滤膜得到发酵液的微滤透析液和菌丝体，收集菌丝体；3)低温真空烘干：将步骤2)中所得的菌丝体在真空度为‑0.065～‑0.095Mpa，70～85℃条件下进行干燥。

【技术特征摘要】
1.一种快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，其特征是该方法包括下述步骤：
1)中国被毛孢半连续发酵液制备：将中国被毛孢种子液接种到灭菌后的发酵培养基
进行深层液态发酵得到中国被毛孢发酵培养液，接种量为体积含量的10～20％，通风比为
1：0.5-1.5vvm，罐压0.02～0.05Mpa，在15～20℃下发酵培养10-30天后，放出培养器容积的
10-50％的发酵液，补入同等体积的灭菌后的发酵培养基，继续发酵1-10天；如此不断放料、
补料，每次补料继续发酵1-10天，反复多次，得到中国被毛孢发酵液；
2)中国被毛孢发酵液陶瓷膜过滤：将步骤1)中所得的中国被毛孢发酵液通过微滤膜得
到发酵液的微滤透析液和菌丝体，收集菌丝体；
3)低温真空烘干：将步骤2)中所得的菌丝体在真空度为-0.065～-0.095Mpa，70～85℃
条件下进行干燥。
2.根据权利要求1所述的快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，其特征是步骤1)
所述的发酵条件为通风比为1：0.5vvm，罐压0.04Mpa，在20℃下发酵培养25天。
3.根据权利要求1所述的快速深层液态发酵生产中国被毛孢菌粉的方法，其特征是所述的中
国被毛孢种子液是通过以下方法制备得到的：中国被毛孢种子培养基组成为葡萄糖1-3％、
蛋白胨0.5-2％、奶粉0.1-1％、麸皮1-3％、磷酸二氢钾0.1-0.5％、七水硫酸镁0.1-0.5％、消泡
剂0.01-0.05％；调节pH值5.5-6.5；培养条件为：通风比为1：0...

【专利技术属性】
技术研发人员：王文风，徐国华，徐玲，杨亚威，张芙蓉，孙妮娜，董彩虹，刘新利，
申请(专利权)人：江苏神华药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32