一种从杜仲提取环橄榄树脂素9-糖苷的方法技术

一种从杜仲提取环橄榄树脂素9-糖苷的方法，属于医药技术领域。这种杜仲中提取环橄榄树脂素4'-糖苷的制备方法的步骤依次为提取、浓缩、离心、萃取、大孔吸附树脂分离、硅胶柱色谱法分离、ODS柱色谱法分离、MCI柱色谱法分离、Sephadex LH-20色谱法分离、半制备或制备型HPLC色谱分离得到环橄榄树脂素9-糖苷。本发明专利技术的有益效果：本发明专利技术提供了杜仲中环橄榄树脂素9-糖苷的提取方法。该方法得到了纯度大于98%的环橄榄树脂素9-糖苷。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
，具体涉及杜仲中木脂素类化合物制备方法。
技术介绍
杜仲（EucommiaulmoidesOliv.）为杜仲科植物杜仲的干燥树皮。杜仲被誉为“活化石植物”，药用历史悠久，《神农本草经》将其列为上品，谓其“主治腰膝痛，补中，益精气，坚筋骨，除阴下痒湿，小便余沥。久服，轻身耐老。”杜仲是我国传统名贵滋补中药，用于补肝肾，强筋骨。杜仲中已见文献报道的化学成分包括木脂素类、环烯醚萜类、苯丙素类、黄酮类等共约200个化学成分。木脂素类化合物是杜仲化学成分中研究最多、成分最明确、结构最清晰的一类化合物，已分离得到的大多是双四氢呋喃类化合物。迄今为止，从杜仲中分离出来的木脂素类化合物有44个，多为苷类化合物，其糖基均为β-D-葡萄糖。结构类型多为双环氧木脂素（bisepoxylignans,即双四氢呋喃类），如松脂醇二葡萄糖苷、丁香脂二葡萄糖苷等，另外还有少量单环氧木脂素（monoepoxylignans）、新木脂素（neolignans）、倍半木脂素（sesqiulignans）和环木脂素（cyclolignans）等。目前未见从杜仲中分离得到环橄榄树脂素9-糖苷的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是根据上面所述缺陷，提供一种提取率高的从杜仲提取环橄榄树脂素9-糖苷的方法。本专利技术提供的环橄榄树脂素9-糖苷，具有如下结构：。一种杜仲提取环橄榄树脂素9-糖苷的方法，其特征在于，依次通过以下步骤制备得到：（1）杜仲经溶剂提取法，采用50%-95%的乙醇或甲醇提取，减压回收提取液，得粗提物；（2）取步骤（1）所得的粗提物，用蒸馏水溶解后静置，离心，取上清液；（3）取步骤（2）所得的上清液用石油醚萃取，弃去石油醚萃取液，剩余水溶液减压浓缩得浸膏；（4）取步骤（3）所得的浸膏经大孔吸附树脂分离，以蒸馏水和70%-95%的乙醇洗脱，乙醇洗脱液经减压浓缩得乙醇洗脱物；（5）取步骤（4）所得的乙醇洗脱物经硅胶柱色谱法分离，以氯仿/甲醇混合溶剂梯度洗脱；（6）取步骤（5）中所得流分经ODS柱色谱法分离，以甲醇/水或乙醇/水混合溶剂梯度洗脱；（7）取步骤（6）中所得流分经MCI柱色谱法分离，以甲醇/水或乙醇/水混合溶剂梯度洗脱；（8）取步骤（7）中所得流分经SephadexLH-20色谱法分离，以甲醇/水或乙醇/水混合溶剂洗脱，得环橄榄树脂素9-糖苷粗品；（9）取步骤（8）中所得环橄榄树脂素9-糖苷粗品经半制备或制备型HPLC色谱分离，以甲醇/水，乙腈/水或甲醇/乙腈/水为流动相洗脱，得到环橄榄树脂素9-糖苷。本专利技术提供的环橄榄树脂素9-糖苷的制备方法中步骤（3）石油醚与上清液体积比为1:3～3:1，萃取次数为2～5次。本专利技术提供的环橄榄树脂素9-糖苷的制备方法中步骤（4）大孔吸附树脂分离时，浸膏与蒸馏水的重量体积比为1:20～1:30；浸膏与乙醇的重量体积比为1:10～1:40。本专利技术提供的环橄榄树脂素9-糖苷的制备方法中步骤（5）洗脱溶剂为1:0～20:1的氯仿/甲醇。本专利技术提供的环橄榄树脂素9-糖苷的制备方法中步骤（6）洗脱溶剂为1:9～4:0的甲醇/水或乙醇/水。本专利技术提供的环橄榄树脂素9-糖苷的制备方法中步骤（7）洗脱溶剂为1:10～4:0的甲醇/水或乙醇/水。本专利技术提供的环橄榄树脂素9-糖苷的制备方法中步骤（8）洗脱溶剂为1:10～2:1的甲醇/水或乙醇/水。本专利技术提供的环橄榄树脂素9-糖苷的制备方法中步骤（9）流动相为甲醇/水、乙腈/水或甲醇/乙腈/水，从甲醇/水混合溶剂比例为1:10～1:0、乙腈/水混合溶剂比例1:20～1:0的流分中得到环橄榄树脂素9-糖苷。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了杜仲中环橄榄树脂素9-糖苷的提取方法。该方法得到了纯度大于98%的环橄榄树脂素9-糖苷，提取率高。具体实施方式下面的实施例将对本专利技术予以进一步的说明，但并不因此而限制本专利技术。实施例1。（1）杜仲药材20kg，分别加入的95%乙醇，加热回流提取3次，每次2小时，减压回收提取液，得乙醇粗提物。（2）乙醇粗提物加50L蒸馏水，溶解后静置12小时，转速5000rpm离心后得褐色粘稠沉淀和澄清上清液，褐色沉淀弃去。（3）向步骤（2）中澄清上清液中加入等体积石油醚，充分搅匀后，静置12小时，取出上清液，再向剩余的澄清溶液中加入等体积石油醚，重复上述操作二次，石油醚萃取液弃去。剩余的澄清溶液减压浓缩，得浸膏2.2kg。（4）取步骤（3）中浸膏2.2kg经大孔吸附树脂HPD100分离，用50L蒸馏水洗脱，蒸馏水洗脱液弃去。然后用60L95%乙醇洗脱，洗脱液经减压浓缩后，得乙醇洗脱物。（5）取步骤（4）中乙醇洗脱物，经硅胶柱色谱法分离，用氯仿：甲醇分别为1:0，20:1，10:1，7:1，5:1，2:1，1:1进行梯度洗脱。（6）取步骤（5）中以氯仿：甲醇为7:1洗脱所得流分，经ODS柱色谱法分离，用甲醇：水分别为1:9，1:4，2:3，3:2，4:1，1:0进行梯度洗脱。（7）取步骤（6）中甲醇：水为1:4洗脱所得流分，经MCI柱色谱法分离，用甲醇：水分别为1:9，1:4，2:3，3:2，4:1，1:0进行梯度洗脱。（8）取步骤（7）中甲醇：水为2:3洗脱所得流分，经SephadexLH-20柱色谱法分离，用甲醇：水为3:7进行洗脱，得环橄榄树脂素9-糖苷粗品。（9）环橄榄树脂素9-糖苷粗品经制备HPLC色谱分离，以甲醇：水为28:72等度洗脱，流速为2ml/min，在保留时间18分钟得到环橄榄树脂素4'-糖苷2.15g，纯度为98.3%。环橄榄树脂素9-糖苷的结构鉴定数据如下：白色粉末，Molisch反应呈阳性，酸水解检出D-葡萄糖。IR(KBr)cm-1:3391，2936，1605，1514，1450，1371，1256，1155，1076，1031，861，775，630，580，533。UVλmax(CH3OH)nm:207，284。HRESIMSm/z:561.1955([M+Na]+,C26H34NaO12,Calcd561.1948)，573.1742([M+Cl]-,C26H34ClO12,Calcd573.1739)。1HNMR(600MHz,MeOD)δ:6.80(1H,d,J=1.9Hz,H-2)，6.76(1H,d,J=7.9Hz,H-5)，6.66(1H,dd,J=1.9,7.9Hz,H-6)，6.63(1H,3,H-2')，6.18(H,s,H-5')，4.12-4.15(2H,m,7,9-H)，4.07(1H,d,J=7.9Hz,H-1'')，3.85(1H,d,J=11.3Hz,H-9')，3.81(6H,s,3,3'-OCH3)，3.54(1H,d,J=11.3Hz,H-9')，3.45(1H,dd,J=4.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杜仲提取环橄榄树脂素9‑糖苷的方法，其特征在于，依次通过以下步骤制备得到：（1）杜仲经溶剂提取法，采用50%‑95%的乙醇或甲醇提取，减压回收提取液，得粗提物；（2）取步骤（1）所得的粗提物，用蒸馏水溶解后静置，离心，取上清液；（3）取步骤（2）所得的上清液用石油醚萃取，弃去石油醚萃取液，剩余水溶液减压浓缩得浸膏；（4）取步骤（3）所得的浸膏经大孔吸附树脂分离，以蒸馏水和70%‑95%的乙醇洗脱，乙醇洗脱液经减压浓缩得乙醇洗脱物；（5）取步骤（4）所得的乙醇洗脱物经硅胶柱色谱法分离，以氯仿/甲醇混合溶剂梯度洗脱；（6）取步骤（5）中所得流分经ODS柱色谱法分离，以甲醇/水或乙醇/水混合溶剂梯度洗脱；（7）取步骤（6）中所得流分经MCI柱色谱法分离，以甲醇/水或乙醇/水混合溶剂梯度洗脱；（8）取步骤（7）中所得流分经Sephadex LH‑20色谱法分离，以甲醇/水或乙醇/水混合溶剂洗脱，得环橄榄树脂素9‑糖苷粗品；（9）取步骤（8）中所得环橄榄树脂素9‑糖苷粗品经半制备或制备型HPLC色谱分离，以甲醇/水，乙腈/水或甲醇/乙腈/水为流动相洗脱，得到环橄榄树脂素9‑糖苷。

【技术特征摘要】
1.一种杜仲提取环橄榄树脂素9-糖苷的方法，其特征在于，依次通过以下步骤制备得到：
（1）杜仲经溶剂提取法，采用50%-95%的乙醇或甲醇提取，减压回收提取液，得粗提物；
（2）取步骤（1）所得的粗提物，用蒸馏水溶解后静置，离心，取上清液；
（3）取步骤（2）所得的上清液用石油醚萃取，弃去石油醚萃取液，剩余水溶液减压浓缩得浸膏；
（4）取步骤（3）所得的浸膏经大孔吸附树脂分离，以蒸馏水和70%-95%的乙醇洗脱，乙醇洗脱液经减压浓缩得乙醇洗脱物；
（5）取步骤（4）所得的乙醇洗脱物经硅胶柱色谱法分离，以氯仿/甲醇混合溶剂梯度洗脱；
（6）取步骤（5）中所得流分经ODS柱色谱法分离，以甲醇/水或乙醇/水混合溶剂梯度洗脱；
（7）取步骤（6）中所得流分经MCI柱色谱法分离，以甲醇/水或乙醇/水混合溶剂梯度洗脱；
（8）取步骤（7）中所得流分经SephadexLH-20色谱法分离，以甲醇/水或乙醇/水混合溶剂洗脱，得环橄榄树脂素9-糖苷粗品；
（9）取步骤（8）中所得环橄榄树脂素9-糖苷粗品经半制备或制备型HPLC色谱分离，以甲醇/水，乙腈/水或甲醇/乙腈/水为流动相洗脱，得到环橄榄树脂素9-糖苷。
2.根据权利要求1所述的一种杜仲提取环橄榄...

【专利技术属性】
技术研发人员：康兴东，赵春超，陈子琦，吴永忠，邵建华，杨伟庆，陈佳，周朝忠，徐晓庆，
申请(专利权)人：普正药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36