一种蛋白分子活性分离与表征联用系统技术方案

本申请公开了一种蛋白分子活性分离与表征联用系统，包括：非对称流场流分离仪和电喷雾质谱仪，其中，所述非对称流场流分离仪的出样口通过管路与所述电喷雾质谱仪的进样口连接。这样，本发明专利技术中使用非对称流场流分离仪作为分离仪器，相对于常用的传统蛋白分离方法，非对称流场流分离仪的分离条件温和，无分离介质对蛋白组分的剪切力作用，在分离纯化过程中可以保持蛋白分子的立体结构，分离纯化后的蛋白分子具有原始结构的稳定性和活性，且分离后的蛋白样品无需进行后处理，可以缩短操作时间，简化操作流程；使用电喷雾质谱仪作为通用而灵敏的检测仪器，对非对称流场流分离仪分离出的蛋白组分进行成分和结构分析，表征迅速准确。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及蛋白分离
，特别是涉及一种蛋白分子活性分离与表征联用系统。
技术介绍
快速发展的蛋白质组学，需要研究先进的分离与表征联用系统。这种系统中的分离技术应具有分离迅速，选择性高和应用范围广泛等优点，同时在分离纯化过程中不破坏目标蛋白的活性和稳定性；而这种系统中的表征技术则应该有操作简单，表征灵敏度高等优点。常用的传统蛋白分离方法中，电泳技术需要加入表面活性剂，离子交换色谱方法需要加入盐缓冲液，液相色谱方法需加入有机溶液，且在固定相色谱柱中进行，这些都会破坏蛋白分子的立体结构，且容易诱导蛋白组分的分裂。常用的传统蛋白表征方法，基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)技术需要将分离的蛋白样品分离进行后处理，操作时间长，操作不方便。因此，建立一套不破坏蛋白分子结构和活性，且操作简单方便，分离表征迅速，表征结果准确的分离表征联用系统非常有必要。
技术实现思路
有鉴于此，本申请实施例提供一种蛋白分子活性分离与表征联用系统，以使蛋白组分的分离与表征不破坏蛋白分子结构和活性，且操作简单方便，分离表征迅速，表征结果准确。为了实现上述目的，本申请实施例提供的技术方案如下：一种蛋白分子活性分离与表征联用系统，包括：非对称流场流分离仪和电喷雾质谱仪，其中，所述非对称流场流分离仪的出样口通过管路与所述电喷雾质谱仪的进样口连接。优选地，所述非对称流场流分离仪中包括：分离腔室，所述分离腔室由上壁面、垫片以及下壁面组成，所述上壁面为透明的玻璃板，所述上壁面用于在进行蛋白组分的分离时观察有色样品在腔室聚集及流动情况，所述下壁面包括多孔的半透膜，所述下壁面用于使进行蛋白组分分离的流动相通过，所述半透膜用于截留蛋白组分。优选地，所述半透膜为纤维材料半透膜或聚醚砜材料半透膜。优选地，在所述上壁面和所述下壁面之间还包括腔室垫片，所述腔室垫片中设置有用于聚集所分离的蛋白组分的中空空间，所述分离腔室的厚度根据所分离的蛋白组分，通过更换不同厚度的腔室垫片来调整。优选地，还包括：流动相处理装置、进样泵、聚集泵、横流泵、进样器和紫外检测器，其中，所述流动相处理装置通过管路与所述进样泵相连，所述进样泵与所述进样器相连，所述进样器与所述分离腔室的第一进样口相连，所述分离腔室的出样口与所述紫外检测器的入口相连，所述紫外检测器的出口通过管路与所述电喷雾质谱仪的进样口相连；所述流动相处理装置通过管路与所述聚集泵相联，所述聚集泵与所述分离腔室的第二进样口相连；所述横流泵与所述分离腔室串联后经过管路通入废液瓶。优选地，所述流动相处理装置中的流动相为：加入可挥发性铵盐的电喷雾质谱级水，或加入可挥发性铵盐并经过0.1mm滤膜过滤的超纯水。优选地，所述流动相处理装置包括流动相平、流动相采集装置和流动相除气泡装置，所述流动相平、流动相采集装置和所述流动相除气泡装置通过管路依次连接。优选地，所述紫外检测器为可拆除的紫外检测器，并且在所述紫外检测器被拆卸时，所述分离腔室的出样口直接与所述电喷雾质谱仪连接。优选地，所述管路为管径0.125mm的聚醚醚酮管。优选地，所述电喷雾质谱仪为电喷雾离子化质谱仪，所述电喷雾离子化质谱仪中的质量分析器为离子阱分析器，所述电喷雾离子化质谱仪的电喷雾离子源入口作为所述电喷雾离子化质谱仪的进样口与所述非对称流场流分离仪的出样口通过管路连接。应用本申请提供的一种蛋白分子活性分离与表征联用系统，包括：非对称流场流分离仪和电喷雾质谱仪，其中，所述非对称流场流分离仪的出样口通过管路与所述电喷雾质谱仪的进样口连接。这样，本专利技术中使用非对称流场流分离仪作为分离仪器，相对于常用的传统蛋白分离方法，非对称流场流分离仪的分离条件温和，无分离介质对蛋白组分的剪切力作用，在分离纯化过程中可以保持蛋白分子的立体结构，分离纯化后的蛋白分子具有原始结构的稳定性和活性，且分离后的蛋白样品无需进行后处理，可以缩短操作时间，简化操作流程；使用电喷雾质谱仪作为通用而灵敏的检测仪器，对非对称流场流分离仪分离出的蛋白组分进行成分和结构分析，表征迅速准确。附图说明为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本申请实施例提供的一种蛋白分子活性分离与表征联用系统的结构示意图；图2为本申请实施例提供的另一种蛋白分子活性分离与表征联用系统的结构示意图；图3为使用本申请实施例提供的分离与表征联用系统，对蛋白A和蛋白B混合样品分离表征后得到的AF4分离图谱和ESI-MS总离子流图；图4为使用本申请实施例提供的分离与表征联用系统，对蛋白A和蛋白B混合样品分离表征后得到的蛋白A带多电荷的质谱图；图5为使用本申请实施例提供的分离与表征联用系统，对蛋白A和蛋白B混合样品分离表征后得到的蛋白B带多电荷的质谱图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。图1为本申请实施例提供的一种蛋白分子活性分离与表征联用系统的结构示意图。参照图1所示，本申请提供的一种蛋白分子活性分离与表征联用系统，包括：非对称流场流分离仪1和电喷雾质谱仪2，其中，所述非对称流场流分离仪1的出样口通过管路与所述电喷雾质谱仪2的进样口连接。非对称流场流分离(Asymmetricflowfield-flowfractionation，AF4)是场流分离技术(Field-flowfractionation)的一个分支，其分离过程在一个扁平薄腔室内进行，主体流动为抛物线型的层流流动，垂直于横向流动产生的外场使得蛋白分子向累积壁迁移，由于蛋白分子扩散作用存在，当分子扩散与外场作用平衡时，样品位于累积壁上方一定距离，尺寸小的蛋白分子扩散系数大，平衡位置远离累积壁，具有较高的主体流速，会先于大的蛋白分子从腔室内洗脱出，由此本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白分子活性分离与表征联用系统，其特征在于，包括：非对称流场流分离仪和电喷雾质谱仪，其中，所述非对称流场流分离仪的出样口通过管路与所述电喷雾质谱仪的进样口连接。

【技术特征摘要】
1.一种蛋白分子活性分离与表征联用系统，其特征在于，包括：
非对称流场流分离仪和电喷雾质谱仪，其中，
所述非对称流场流分离仪的出样口通过管路与所述电喷雾质谱仪的进样
口连接。
2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述非对称流场流分离仪
中包括：
分离腔室，所述分离腔室由上壁面、垫片以及下壁面组成，所述上壁面
为透明的玻璃板，所述上壁面用于在进行蛋白组分的分离时观察有色样品在
腔室聚集及流动情况，所述下壁面包括多孔的半透膜，所述下壁面用于使进
行蛋白组分分离的流动相通过，所述半透膜用于截留蛋白组分。
3.根据权利要求2所述的系统，其特征在于，所述半透膜为纤维材料半
透膜或聚醚砜材料半透膜。
4.根据权利要求2所述的系统，其特征在于，在所述上壁面和所述下壁
面之间还包括腔室垫片，所述腔室垫片中设置有用于聚集所分离的蛋白组分
的中空空间，所述分离腔室的厚度根据所分离的蛋白组分，通过更换不同厚
度的腔室垫片来调整。
5.根据权利要求2所述的系统，其特征在于，还包括：
流动相处理装置、进样泵、聚集泵、横流泵、进样器和紫外检测器，其
中，
所述流动相处理装置通过管路与所述进样泵相连，所述进样泵与所述进
样器相连，所述进样器与所述分离腔室的第一进样口相连，所述分离腔室的
出样口与所述紫外检测器的入口...

【专利技术属性】
技术研发人员：全灿，鄂云龙，李红梅，
申请(专利权)人：中国计量科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11