一种桦纤孔菌总三萜提取方法技术

本发明专利技术公开了一种桦纤孔菌总三萜提取方法，包括预处理、破壁、超声波处理、减压浓缩及总三萜吸附与纯化步骤，通过破壁粉碎使细胞壁完全破碎，同时联合超声波辅助提取方法，避免了高温对原材料所造成的营养流失、有效成分破坏严重的不良影响。而且促使桦纤孔菌细胞内总三萜物质快速溶出。与传统总三萜提取相比，本发明专利技术方法具有能耗低、总三萜提取率高，生产成本低的特点。通过本发明专利技术破壁联合超声波提取方法，桦纤孔菌总三萜提取率是传统提取方法的1.15~1.72倍。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种富集矿质元素的食用菌提取方法，具体涉及一种桦纤孔菌总三萜提取方法。
技术介绍
桦纤孔菌(Inonotusobliquus(Ach.exPers.)Pilát)也称桦褐孔菌、白桦茸，属于担子菌亚门、层菌纲、非褶菌目、锈革孔菌科，在外文资料中，其常以学名Inonotusobliquus出现。桦纤孔菌菌核呈瘤状，无柄，表面黑灰色，内部黄褐，老后表面深裂，坚硬，干时较脆。具有增强免疫，预防糖病尿等疗效。作为桦纤孔菌的一种主要活性成分，三萜可用于糖尿病、恶性肿瘤、心血管疾病、肝病以及艾滋病的预防和治疗。在三萜类化合物中，白桦脂醇及其衍生物有防治白血病，抗艾滋病病毒活性和抗黑色素细胞瘤活性等特殊功效。因此，桦纤孔菌具有重大的药学价值。矿质元素是人和动物机体的重要组成部分，具有重要的生理功能。食用菌中富集的矿质元素大部分以有机态存在，且稳定性好，其中大部分有机态的矿质元素均与蛋白质、多糖等生物大分子结合，且促进了矿质元素的吸收与利用。目前对桦纤孔菌三萜化合物提取工艺及富集矿质元素后营养含量测定尚少报道，传统的三萜类成分提取方法：萃取法，半仿生提取法，化学衍生法，超声循环技术等易导致三萜降解，近年来超临界流体萃取法成为一种新的提取分离技术，具有保持有效成分活性和无溶剂残留等优点。但是设备复杂，运行成本高，提取范围狭窄，因而没有被广泛应用。
技术实现思路
本专利技术针对上述技术中存在的不足，提供一种桦纤孔菌总三萜提取方法，解决了现有技术中提取时能耗大，生产成本高，提取率低的问题。本专利技术采用的技术方案如下：一种桦纤孔菌总三萜的提取方法，其具体操作步骤如下：步骤1、预处理：桦纤孔菌菌丝在60-80℃条件下，干燥10-16小时；步骤2、破壁：将上述预处理后的桦纤孔菌菌丝破壁粉碎，过200目筛，加入95％乙醇，95％乙醇与菌丝的质量比为30-50:1，配制成混悬液，浸泡24h；步骤3、超声波处理：将上述桦纤孔菌混悬液超声波处理，60-80℃，功率400W，时间10-20min；步骤4、减压浓缩：将上述超声波处理后的混悬液减压浓缩至AmL，即得AmL浓缩液；于13000-16000r/min，0-5℃条件下离心8-15min，取上清液，向上清液中加入95％乙醇定容至AmL；步骤5、总三萜吸附与纯化：将上述定容后的液体以2BV/h的流速过大孔吸附树脂柱层析，以80％乙醇洗脱，变色后收集洗脱出的溶液，洗脱出的溶液即为提取物质。本专利技术的优点在于：本专利技术采取破壁粉碎与超声波辅助提取交替进行的一种破壁方法，促使细胞完全破裂的同时避免了高温对原料说造成的营养损失、有效成分破坏严重的不良影响。超声波辅助提取桦纤孔菌总三萜，机械作用也加速细胞壁的破碎，促进胞内总三萜活性物质的快速溶出。与传统多糖提取相比，破壁粉碎和和超声波辅助提取有效结合，具有能耗低、总三萜提取率高，生产成本低的特点。通过本专利技术破壁联合超声波提取方法，桦纤孔菌总三萜提取率是传统提取方法的1.15～1.72倍。附图说明图1为本专利技术提取桦纤孔菌总三萜的工艺流程图。具体实施方式实施例1步骤1、预处理：桦纤孔菌菌丝在70℃条件下，干燥12小时；步骤2、破壁：将上述预处理后的桦纤孔菌菌丝破壁粉碎，过200目筛，称取100g桦纤孔菌粉溶于100mL95％乙醇中配制成浓度为2％混悬液，浸泡24h；步骤3、超声波处理：将上述桦纤孔菌混悬液超声波处理，70℃，功率400W，时间15min；步骤4、减压浓缩：将上述超声波处理后的混悬液，常压80℃条件下，减压浓缩至20mL，即得浓缩液；于14000r/min，0℃条件下离心10min，取上清液，向上清液中加入95％乙醇定容至20mL；步骤5、总三萜吸附与纯化：对直径为1.5cm，柱长为50cm的大孔吸附树脂柱进行预处理，用95％乙醇浸泡24h，再用95％乙醇洗至流出液与水的体积比为1：5时不浑浊，之后用水洗至无醇味，最后水洗至中性，将上述步骤4定容后的液体以2BV/h的流速过上述预处理后的大孔吸附树脂柱层析，以80％乙醇洗脱，变色后收集洗脱出的溶液，洗脱出的溶液即为提取物质。桦纤孔菌总三萜不同提取方法提取率测定试验如下：1、材料与方法桦纤孔菌粉：沈阳工学院生命工程学院食用菌实验室2、桦纤孔菌总三萜提取方法取2g、200目桦纤孔菌粉，以100mL95％乙醇浸泡24h，分别采用如下：1)、连续加热回流提取(索式提取器)：提取4h；2)、超声波提取：超声15min；3)、旋转蒸馏提取：旋转蒸馏解吸1次，后提取15min，加入100℃蒸馏水20mL，减压内部沸腾5min。3.1总三萜的提取率测定采用香草醛一冰醋酸法测定，以齐墩果酸为标准物，在550nm波长处测定标准物质量浓度与吸光度的对应关系，制备标准曲线。3.1.1总三萜提取率％＝(总三萜质量/桦纤孔菌质量)×100％4、测定结果4.1齐墩果酸标准曲线获得回归方程为：y＝0.5726x+0.0229，R2＝0.9805，根据回归方程测得各种方法提取桦纤孔菌总三萜提取率如表1。5.结论由表1可知，超声波提取法与其他两种方法相差明显，因此可确定破壁联合超声波提取法最适合提取桦纤孔菌总三萜。由于桦纤孔菌细胞壁的主要成分是果胶与纤维素，单纯物理破碎方法，难以将所有的细胞壁进行破碎。破壁粉碎是一种快捷的破壁方式，可使细胞破壁较为彻底，，辅助超声波处理，利用超声弄产生的空化作用、机械作用加速细胞壁的破碎，促使胞内物质的溶出从而提高总三萜提取率且所得桦纤孔菌总三萜较其他提取方法纯净度高。实施例2一种桦纤孔菌总三萜的提取方法，其具体操作步骤如下：步骤1、预处理：桦纤孔菌菌丝在60℃条件下，干燥16小时；步骤2、破壁：将上述预处理后的桦纤孔菌菌丝破壁粉碎，过200目筛，加入95％乙醇，95％乙醇与菌丝的质量比为30:1，配制成混悬液，浸泡24h；步骤3、超声波处理：将上述桦纤孔菌混悬液超声波处理，60℃，功率400W，时间20min；步骤4、减压浓缩：将上述超声波处理后的混悬液减压浓缩至AmL，即得AmL浓缩液；于13000r/min，0℃条件下离心15min，取上清液，向上清液中加入95％乙醇定容至AmL；步骤5、总三萜吸附与纯化：将上述定容后的液体以2BV/h的流速过大孔吸附树脂柱层析，以80％乙醇洗脱，变色后收集洗脱出的溶液，洗脱出的溶液即为提取物质。实施例3一种桦纤孔菌总本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种桦纤孔菌总三萜提取方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1、预处理：桦纤孔菌菌丝在60‑80℃条件下，干燥10‑16小时；步骤2、破壁：将上述预处理后的桦纤孔菌菌丝破壁粉碎，过200目筛，加入95%乙醇，95%乙醇与菌丝的质量比为30‑50:1，配制成混悬液，浸泡24h；步骤3、超声波处理：将上述桦纤孔菌混悬液超声波处理，60‑80 ℃，功率400 W，时间10‑20 min；步骤4、减压浓缩：将上述超声波处理后的混悬液减压浓缩至AmL，即得AmL浓缩液；于13000‑ 16000r/min，0‑5℃条件下离心8‑15 min，取上清液，向上清液中加入95%乙醇定容至AmL；步骤5、总三萜吸附与纯化：将上述定容后的液体以2 BV/h的流速过大孔吸附树脂柱层析，以80%乙醇洗脱，变色后收集洗脱出的溶液，洗脱出的溶液即为提取物质。

【技术特征摘要】
1.一种桦纤孔菌总三萜提取方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤1、预处理：桦纤孔菌菌丝在60-80℃条件下，干燥10-16小时；
步骤2、破壁：将上述预处理后的桦纤孔菌菌丝破壁粉碎，过200目筛，加入95%乙醇，95%
乙醇与菌丝的质量比为30-50:1，配制成混悬液，浸泡24h；
步骤3、超声波处理：将上述桦纤孔菌混悬液超声波处理，60-80℃，功率400W，时间
10-20min；
步骤4、减压浓缩：将上述超声波处理后的混悬液减压浓缩至AmL，即得AmL浓缩液；于
13000-16000r/min，0-5℃条件下离心8-15min，取上清液，向上清液中加入95%乙醇定容
至AmL；
步骤5、总三萜吸附与纯化：将上述定容后的液体以2BV/h的流速过大孔吸附树脂柱层
析，以80%乙醇洗脱，变色后收集洗脱出的溶液，洗脱出的溶液即为提取物质。
2.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭晓帆，于妍，王守明，王亮，王威，刘冰雁，王玉峰，翟玉莹，张婷，韩琳，
申请(专利权)人：沈阳工学院，
类型：发明
国别省市：辽宁;21