利用六个转录标志物检测动物组织中β2受体激动剂的方法技术

本发明专利技术公开了利用六个转录标志物检测动物组织中β2受体激动剂的方法。本发明专利技术所提供的方法包括：利用荧光定量PCR分别扩增待测离体动物组织和/或器官中的ADRB2基因、ATP2A3基因、FABP5基因、FOXO1基因、PDE4C基因、NEB基因与内参基因，根据各基因与内参基因体系中Ct值的差值以及相应公式分别得出b1和b2；按照如下方法确定待测动物组织和/或器官中是否含有或候选含有β2受体激动剂：如b1≥b2，所述待测动物组织含有或候选含有β2受体激动剂，如b1＜b2，所述待测动物组织不含或候选不含β2受体激动剂。本发明专利技术可以有效解决β2受体激动剂的监测难题，有效实现对β2受体激动剂的监测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
中利用六个转录标志物检测动物组织中β2受体激动剂的方法。
技术介绍
β受体激动剂包括非选择性的β受体激动剂如异丙肾上腺素及选择性心脏β1受体激动剂如多巴酚丁胺，选择性β2受体激动剂如沙丁胺醇、叔丁、喘宁等。β2受体激动剂其通过兴奋气道平滑肌和肥大细胞膜表面的β2受体，舒张气道平滑肌、减少肥大细胞和嗜碱性粒细胞脱颗粒及其介质的释放、降低微血管的通透性、增加气道上皮纤毛的摆动等缓解哮喘症状。β2受体激动剂包括：西马特罗，喷布特罗，妥布特罗，西布特罗，溴不特罗，马布特罗，特布他林，氯丙那林，莱克多巴胺，克伦特罗，沙丁胺醇，班布特罗，利托君，克伦普罗，齐帕特罗，马贲特罗等。β2受体激动剂在动物体内的作用机理相同，为：β2受体激动剂作用于细胞膜上的β2肾上腺素能受体(β2AR)受体，刺激受体与鸟苷酸结合蛋白偶联，激活G蛋白与腺苷酸环化酶的偶联，腺苷酸环化酶将三磷酸腺苷转化为3，5-环磷酸腺苷(cAMP)，从而诱发体内的一系列反应。现行我国标准及相关法律法规虽已明令禁止在动物饲料和饮水中添加β2受体激动剂，但仍屡禁不止，而目前主流的药物残留分析方法如仪器分析、免疫分析、传感器及芯片分析等均是基于已知药物的检测，新药作为监测的漏洞，继续威胁着消费者的人身安全。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何检测待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了检测或辅助检测待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂的方法，所述方法为方法1、方法2、方法3或方法4。所述方法1包括：利用荧光定量PCR分别扩增所述待测的离体的动物组织和/或器官中的ADRB2基因、ATP2A3基因、FABP5基因、FOXO1基因、PDE4C基因、NEB基因与内参基因，根据y1、y2、y3、y4、y5、y6、公式1和公式2分别得出b1和b2；按照如下方法确定所述待测动物组织和/或器官中是否含有或候选含有β2受体激动剂：如b1≥b2，所述待测动物组织含有或候选含有β2受体激动剂，如b1＜b2，所述待测动物组织不含或候选不含β2受体激动剂；所述y1、所述y2、所述y3、所述y4、所述y5、所述y6分别为ADRB2基因、ATP2A3基因、FABP5基因、FOXO1基因、PDE4C基因、NEB基因的荧光定量PCR体系与内参基因的荧光定量PCR体系的Ct值的差值；公式1：b1＝0.564×y1+13.288×y2-4.462×y3+3.554×y4-10.740×y5+3.724×y6-101.111；公式2：b2＝1.603×y1+9.127×y2-2.904×y3+4.800×y4-9.195×y5+4.047×y6-86.019。所述方法2包括：根据所述y1、所述y2、所述y3、所述y4、所述y5、所述y6和公式3得出所述待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂含量预测值pv2，根据公式4和所述预测值pv2得出所述待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂含量av2；公式3：pv2＝1.284×y1-6.926×x2+9.304-17.360×x3-18.642×x4+4.348×x5+209.326；公式4：av2＝0.68747×pv2+17.771。所述方法3包括：利用荧光定量PCR分别扩增所述待测的离体的动物组织和/或器官中的ADCY3基因、ADRB2基因、ATP1A3基因、ATP2A3基因、IL1B基因、MYLK基因、PAKACB基因、PTH基因、TNF-α基因、CREM基因、FABP5基因、FOXO1基因、HSL基因、LOC102185492基因、MYH9基因、NEB基因、PDE4C基因与内参基因，根据x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7、x8、x9、x10、x11、x12、x13、x14、x15、x16、x17、公式5和公式6分别得出a1和a2；按照如下方法确定所述待测动物组织和/或器官中是否含有或候选含有β2受体激动剂：如a1≥a2，所述待测动物组织含有或候选含有β2受体激动剂，如a1＜a2，所述待测动物组织不含或候选不含β2受体激动剂；所述x1、所述x2、所述x3、所述x4、所述x5、所述x6、所述x7、所述x8、所述x9、所述x10、所述x11、所述x12、所述x13、所述x14、所述x15、所述x16和所述x17分别为ADCY3基因、ADRB2基因、ATP1A3基因、ATP2A3基因、IL1B基因、MYLK基因、PAKACB基因、PTH基因、TNF-α基因、CREM基因、FABP5基因、FOXO1基因、HSL基因、LOC102185492基因、MYH9基因、NEB基因、PDE4C基因的荧光定量PCR体系与内参基因的荧光定量PCR体系的Ct值的差值；公式5：a1＝14.924×x1-6.362×x2+5.226×x3+7.777×x4+2.034×x5+14.974×x6-7.971×x7+10.516×x8-4.019×x9+18.687×x10-10.382×x11+1.690×x12+3.882×x13+5.632×x14-9.792×x15-18.867×x16-0.499×x17-320.475；公式6：a2＝16.229×x1-3.494×x2+6.767×x3+3.229×x4+2.444×x5+13.809×x6-9.465×x7+12.347×x8-5.194×x9+19.640×x10-9.493×x11+2.413×x12+3.471×x13+5.306×x14-10.147×x15-16.995×x16-0.182×x17-321.610。所述方法4包括：根据所述x1、所述x2、所述x3、所述x4、所述x5、所述x6、所述x7、所述x8、所述x9、所述x10、所述x11、所述x12、所述x13、所述x14、所述x15、所述x16、所述x17和公式7得出所述待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂含量预测值pv1，根据公式8和所述预测值pv1得出所述待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂含量av1；公式7：pv1＝-14.102×x1+4.135×x2+9.903×x3+1.398×x4+2.477×x5-8.862×x6+12.486×x7+12.914×x8-8.496×x9-4.082×x10+6.775×x11-12.455×x12-7.357×x13-0.457×x14-23.512×x15-18.022×x16+14.833×x17+199.170；公式8：av1＝本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测或辅助检测待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂的方法，包括：利用荧光定量PCR分别扩增所述待测的离体的动物组织和/或器官中的ADRB2基因、ATP2A3基因、FABP5基因、FOXO1基因、PDE4C基因、NEB基因与内参基因，根据y1、y2、y3、y4、y5、y6、公式1和公式2分别得出b1和b2；按照如下方法确定所述待测动物组织和/或器官中是否含有或候选含有β2受体激动剂：如b1≥b2，所述待测动物组织含有或候选含有β2受体激动剂，如b1＜b2，所述待测动物组织不含或候选不含β2受体激动剂；所述y1、所述y2、所述y3、所述y4、所述y5、所述y6分别为ADRB2基因、ATP2A3基因、FABP5基因、FOXO1基因、PDE4C基因、NEB基因的荧光定量PCR体系与内参基因的荧光定量PCR体系的Ct值的差值；公式1：b1＝0.564×y1+13.288×y2‑4.462×y3+3.554×y4‑10.740×y5+3.724×y6‑101.111；公式2：b2＝1.603×y1+9.127×y2‑2.904×y3+4.800×y4‑9.195×y5+4.047×y6‑86.019。...

【技术特征摘要】
1.检测或辅助检测待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂的方法，包括：
利用荧光定量PCR分别扩增所述待测的离体的动物组织和/或器官中的ADRB2基因、
ATP2A3基因、FABP5基因、FOXO1基因、PDE4C基因、NEB基因与内参基因，根据y1、y2、y3、y4、
y5、y6、公式1和公式2分别得出b1和b2；
按照如下方法确定所述待测动物组织和/或器官中是否含有或候选含有β2受体激动剂：
如b1≥b2，所述待测动物组织含有或候选含有β2受体激动剂，如b1＜b2，所述待测动物组织
不含或候选不含β2受体激动剂；
所述y1、所述y2、所述y3、所述y4、所述y5、所述y6分别为ADRB2基因、ATP2A3基因、FABP5
基因、FOXO1基因、PDE4C基因、NEB基因的荧光定量PCR体系与内参基因的荧光定量PCR体系
的Ct值的差值；
公式1：b1＝0.564×y1+13.288×y2-4.462×y3+3.554×y4-10.740×y5+3.724×y6-
101.111；
公式2：b2＝1.603×y1+9.127×y2-2.904×y3+4.800×y4-9.195×y5+4.047×y6-
86.019。
2.检测或辅助检测待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂含量的方法，包括：
根据权利要求1所述y1、所述y2、所述y3、所述y4、所述y5、所述y6和公式3得出所述待测
动物组织和/或器官中β2受体激动剂含量预测值pv2，根据公式4和所述预测值pv2得出所述
待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂含量av2；
公式3：pv2＝1.284×y1-6.926×x2+9.304-17.360×x3-18.642×x4+4.348×x5+
209.326；
公式4：av2＝0.68747×pv2+17.771。
3.检测或辅助检测待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂的方法，包括：
利用荧光定量PCR分别扩增所述待测的离体的动物组织和/或器官中的ADCY3基因、
ADRB2基因、ATP1A3基因、ATP2A3基因、IL1B基因、MYLK基因、PAKACB基因、PTH基因、TNF-α基
因、CREM基因、FABP5基因、FOXO1基因、HSL基因、LOC102185492基因、MYH9基因、NEB基因、
PDE4C基因与内参基因，根据x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7、x8、x9、x10、x11、x12、x13、x14、x15、
x16、x17、公式5和公式6分别得出a1和a2；
按照如下方法确定所述待测动物组织和/或器官中是否含有或候选含有β2受体激动剂：
如a1≥a2，所述待测动物组织含有或候选含有β2受体激动剂，如a1＜a2，所述待测动物组织
不含或候选不含β2受体激动剂；
所述x1、所述x2、所述x3、所述x4、所述x5、所述x6、所述x7、所述x8、所述x9、所述x10、所
述x11、所述x12、所述x13、所述x14、所述x15、所述x16和所述x17分别为ADCY3基因、ADRB2基
因、ATP1A3基因、ATP2A3基因、IL1B基因、MYLK基因、PAKACB基因、PTH基因、TNF-α基因、CREM
基因、FABP5基因、FOXO1基因、HSL基因、LOC102185492基因、MYH9基因、NEB基因、PDE4C基因
的荧光定量PCR体系与内参基因的荧光定量PCR体系的Ct值的差值；
公式5：a1＝14.924×x1-6.362×x2+5.226×x3+7.777×x4+2.034×x5+14.974×x6-
7.971×x7+10.516×x8-4.019×x9+18.687×x10-10.382×x11+1.690×x12+3.882×x13+
5.632×x14-9.792×x15-18.867×x16-0.499×x17-320.475；
公式6：a2＝16.229×x1-3.494×x2+6.767×x3+3.229×x4+2.444×x5+13.809×x6-
9.465×x7+12.347×x8-5.194×x9+19.640×x10-9.493×x11+2.413×x12+3.471×x13+
5.306×x14-10.147×x15-16.995×x16-0.182×x17-321.610。
4.检测或辅助检测待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂含量的方法，包括：
根据权利要求3所述x1、所述x2、所述x3、所述x4、所述x5、所述x6、所述x7、所述x8、所述
x9、所述x10、所述x11、所述x12、所述x13、所述x14、所述x15、所述x16、所述x17和公式7得出
所述待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂含量预测值pv1，根据公式8和所述预测值pv1
得出所述待测动物组织和/或器官中β2受体激动剂含量av1；
公式7：pv1＝-14.102×x1+4.135×x2+9.903×...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨曙明，赵璐瑶，张严化，张莹，何雯菁，程永友，侯粲，游新勇，赵杰，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11