本发明专利技术公开了一种抗TOPK第74位酪氨酸残基磷酸化的抗体，属于生物和疾病诊断领域。该抗体是将氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的多肽与载体蛋白偶联，用作抗原，并用该抗原免疫动物，得到多抗血清，纯化后得到的。该抗体能应用于肿瘤细胞水平的免疫印迹方法检测，目前市面上尚无针对TOPK Y74磷酸化检测的任何抗体，本发明专利技术为肿瘤发生的研究及肿瘤的早期诊断及预后预测治疗打下了坚实的基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物和疾病诊断领域，具体涉及一种抗TOPK第74位酪氨酸残基磷酸化的抗体，本专利技术还涉及该抗体的制备方法和应用。
技术介绍
TOPK，又名PBK，即PDZ连接激酶及淋巴因子激活的杀伤性T淋巴细胞源性蛋白激酶，其作为一种新的丝-苏氨酸蛋白激酶[1,2]，在乳腺癌、结直肠癌、黑色素瘤、肺癌、白血病等[3]多种肿瘤细胞中呈高表达，并且表达量与乳腺癌和结直肠癌的恶性程度明显相关[4]。TOPK参与了肿瘤细胞周期进程[5-8]、肿瘤细胞转化[9,10]、增殖[11]和凋亡[12,13]等功能的调控。近年越来越多的研究发现TOPK在肿瘤的临床诊断以及预后预测中发挥了重要作用。2010年ZlobecI等探讨了在2000例结肠癌病例中TOPK的预后价值，提出TOPK高表达的病例预后差，同时提出TOPK高表达的病例与酪氨酸激酶抑制剂的耐受有关，TOPK抑制剂的发现将惠及30-40％结肠癌患者。另外，该研究组还指出TOPK激活相关机制的研究将对克服酪氨酸激酶抑制剂的耐受有重要意义[14]。DeschoolmeesterD等认为TOPK是结肠癌的最有价值的肿瘤标志物之一，与之相关的靶向治疗应逐步展开[15]。也有文献报道TOPK在肺癌中的表达与Ki67(细胞增殖标记物)和p53密切相关，可能会成为非小细胞肺癌独立的预后指标[16]。ShihMC等也认为TOPK通过调控PI3K/AKT/PTEN信号通路影响肺癌细胞的转移，并可作为肺癌预后的指标和潜在的治疗靶点[17]。另外，ChenF[18]等报道称TOPK表达水平在人肝癌组织和细胞系中显著上调，在肝癌SMMC-7721细胞中基因沉默TOPK后导致细胞周期停滞，抑制细胞生长和肿瘤形成，暗示着TOPK可能调节肝细胞的增殖，可能会成为肝癌有意义的分子靶点和预后标志物。Jae-Hyun等[19]在对81例乳腺癌的全基因组表达谱进行分析后发现TOPK上调，并且在其细胞的有丝分裂早期呈高表达，可能通过磷酸化HistoneH3促进有丝分裂，从而增强肿瘤细胞的增殖。除此之外，HuF[20]等人发现Myc–E2F1–TOPK信号通路在恶性淋巴瘤中起着调控作用，TOPK可能会成为淋巴瘤免疫治疗中的靶点。随着研究的深入，TOPK正逐渐成为新的肿瘤发生的标志物和抗肿瘤治疗的靶点。然而，目前对于TOPK的研究，两个重要的研究瓶颈逐渐显现出来。一是TOPK晶体结构解析困难，导致其抑制剂领域的研究进行缓慢，阻碍了其用于临床疾病诊断和治疗的发展前景。其次是TOPK的上游调控机制尚不完全清楚，目前已有报道hDlg[2]，ERK2[9]，c-Myc-E2F1[20]，P53[21]，E2F-CREB/ATF[22]和Cdk1/CyclinB[1,23]能与TOPK相互作用并调节其功能。但是，非磷酸化的TOPK表达并不能准确体现TOPK在细胞内的活性，目前仅有研究表明蛋白激酶Cdk1/CyclinB和ERK2能在Thr9位点磷酸化激活TOPK，且研究证实Thr9位点磷酸化与TOPK促进肿瘤发生的关系无关。因此，进一步寻找与肿瘤关系密切的TOPK磷酸化修饰机制，即TOPK的上游激酶及磷酸化作用位点，并开发相应位点的磷酸化抗体，将有利于扩展TOPK在临床诊断、治疗方面的实际应用。参考文献：1.AbeY,MatsumotoS,KitoK,etal.CloningandexpressionofanovelMAPKK-likeproteinkinase,lymphokine-activatedkillerT-cell-originatedproteinkinase,specificallyexpressedinthetestisandactivatedlymphoidcells.JBiolChem2000；275:21525–21531.2.GaudetS,BrantonD,LueRA.CharacterizationofPDZ-bindingkinase,amitotickinase.ProcNatlAcadSci2000；97:5167–5172.3.DoughertyJD,GarciaAD,NakanoI,etal.PBK/TOPK,aproliferatingneuralprogenitor-specificmitogenactivatedproteinkinasekinase.JNeurosci,2005；25(46):1077-10785.4.NandiA,TidwellM,KarpJ,etal.ProteinexpressionofPDZ-bindingkinaseisup-regulatedinhematologicmalignanciesandstronglydown-regulatedduringterminaldifferentiationofHL-60leukemiccells.BloodCellsMolDis,2004；32(1):240-245.5.MatsumotoS,AbeY,FujibuchiT,etal.CharacterizationofaMAPKK-likeproteinkinasePBK/TOPK.BiochemBiophysResCommun2004；325:997–1004.6.ParkJH,NishidateT,NakamuraY,etal.CriticalrolesofT-LAKcell-originatedproteinkinaseincytokinesis.CancerSci2010；101:403–411.7.FukukawaC,UedaK,NishidateT,etal.CriticalrolesofLGN/GPSM2phosphorylationbyPBK/TOPKincelldivisionofbreastcancercells.GenesChromosomesCancer2010；49:861–872.8.ShindeSR,GangulaNR,KavelaS,etal.PBK/TOPKandPTENparticipateinCHFRmediatedmitoticcheckpoint.CellSignal2013；25:2511–2517.9.ZhuF,ZykovaTA,KangBS,etal.BidirectionalsignalstransducedbyPBK/TOPK-ERKinteractionincreasetumorigenesisofHCT116colorectalcancercells.Gastroenterology2007；1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗TOPK第74位酪氨酸残基磷酸化的抗体，其特征在于是按包括以下步骤的方法制备而成的：1)将氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的多肽与载体蛋白偶联，用作抗原；2)用步骤1)中的抗原免疫动物，得到多抗血清，纯化后得到抗体。
【技术特征摘要】
1.一种抗TOPK第74位酪氨酸残基磷酸化的抗体，其特征在于是按包括以下步骤的方法
制备而成的：
1)将氨基酸序列如SEQIDNO：1所示的多肽与载体蛋白偶联，用作抗原；
2)用步骤1)中的抗原免疫动物，得到多抗血清，纯化后得到抗体。
2.一种抗TOPK第74位酪氨酸残基磷酸化的抗体的制备方法，其特征在于包括以下步
骤：
1)将氨基酸序列如SEQIDNO：1所示的多肽与载体蛋白偶联，用作抗原；
2)用步骤1)中的抗原免疫动物，得到多抗血清，纯化后得到抗体。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱峰，段秋红，肖娟娟，王哲，薛佩佩，孙惠敏，邵晨，曾凡帆，全纯涛，卢涛，刘琳，袁萍，柯昌庶，熊华，路慧，尹燕华，潘华雄，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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