专一性酶法制备高纯度皮诺敛酸的方法技术

本发明专利技术涉及一种专一性酶法制备高纯度皮诺敛酸的方法，属于食品、保健品加工领域。包括以下步骤：松子油Sn-1,3专一性脂肪酶水解，Sn-2单甘酯的分离，皮诺敛酸单甘酯的水解。本发明专利技术以植物油Sn-2位为高不饱和脂肪酸为理论依据，水解Sn-1,3位饱和/单不饱和脂肪酸，再经纯化，得到含量>80％的皮诺敛酸产品。与传统的工艺相比，废料中无皮诺敛酸损耗、减少了操作工序、有效的降低了生产成本，操作简单，易于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品、保健品领域，具体涉及一种制备高纯度皮诺敛酸的方法。
技术介绍
皮诺敛酸为全顺式5、9、12-十八碳三烯酸，它与地球上所有植物当中的不饱和脂肪酸不同，它只存在于松籽油中，不仅能够降低胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)，升高高密度脂蛋白(HDL)，而且还能抑制、消除其他不饱和脂肪酸对机体的不利影响，与α-亚麻酸(9，12，15-十八碳三烯酸)、γ-亚麻酸(6，9，12-十八碳三烯酸)为同分异构体。同时，目前最新研究表明，它还具有抗炎、解热、镇痛，对抗各种真菌、病毒感染，促进中老年人排泄功能等作用。它被专家誉为洗血因子。鉴于皮诺敛酸的功效，提取高纯度皮诺敛酸具有重要意义。传统提取高纯度不饱和脂肪酸的步骤为：植物油→水解/酯交换→尿素包埋/冷冻/层析柱→分子蒸馏。专利201310194780.3一种松子油皮诺敛酸微胶囊及其制备方法中所用的脂肪酸提纯方法步骤为：酯交换→尿素包埋→冷冻结晶，利用尿素包埋特点为操作简单、便于工业化生产，但尿素包埋有效成分利用率低，提纯不彻底，废料中仍残留较多的皮诺敛酸。对于稀缺的松子油来说造成很大的资源浪费；专利201310363815α-亚麻酸的提取方法和专利200510107356纯度大于80％的α-亚麻酸的生产工艺，均是采用水解、尿包、冷冻、蒸馏等步骤完成。
技术实现思路
本专利技术提供一种专一性酶法制备高纯度皮诺敛酸的方法，以解决传统高纯度皮诺敛酸提取有效成分利用率低，产品得率低的问题。本专利技术采取的技术方案是，包括下列步骤：步骤一：松子油Sn-1,3专一性脂肪酶水解将松子油、脂肪酶、溶剂搅拌混合均匀，在20℃-60℃条件下反应2-24小时；步骤二：Sn-2单甘酯的分离将步骤一反应的混合物真空回收溶剂后通过分子蒸馏，取重组分即得到Sn-2皮诺敛酸单甘酯；步骤三：皮诺敛酸单甘酯水解单甘酯与碱溶液按1:1的摩尔质量比混合，30℃-60℃反应≥2小时，形成皮诺敛酸盐与甘油，搅拌加入1摩尔比例的无机酸，水洗混合物弃下层、真空脱溶、过滤后经分子蒸馏，取轻组分即得到高纯度皮诺敛酸产品。所述步骤一的松子油要求酸值≤0.5KOHmg/g，过氧化值≤5meq/kg，皮诺敛酸含量≥15％；所述步骤一的Sn-1，3专一性脂肪酶包括Novozym(lipozyme)435、lipozymeTLIM、lipozymeRMIM或其混合物；所述步骤一中的溶剂为含水1％-5％的三氯甲烷、异丙醇、乙酸乙酯或其混合物；所述步骤一中松子油、脂肪酶、溶剂按照下面比例混合，其中松子油和脂肪酶以质量M计，溶剂以体积V计，质量g对应体积ml；M松子油：M脂肪酶：V溶剂＝1：0.01-0.1:1-10。所述步骤二和步骤三分子蒸馏为一级薄膜蒸发加三级以上的短程蒸馏，薄膜蒸发温度≥80℃且逐级升高；所述步骤三中的碱溶液，碱溶液为NaOH、KOH、Ca(OH)2等无机碱溶解于水、甲醇、乙醇等极性溶剂中。无机酸包括硫酸、盐酸、磷酸、硝酸等。本专利技术的有益效果是：1、本专利技术解决了皮诺敛酸提纯繁琐步骤及酸碱污染的缺点；2、本专利技术反应简单、环保、低温、解决了传统提取过程中繁琐步骤及高温破坏皮诺敛酸有效成分的缺点。3、本专利技术以含量为17％的松子油为原料，提取的含量为70％皮诺敛酸收率达30％以上，最后的副产物中皮诺敛酸含量<1％，解决了尿素包埋法提取松子油中皮诺敛酸利用率低的缺点；具体实施方式本专利技术以《食品化学》中描述的植物油Sn-2位为高不饱和脂肪酸为基础，以松子油Sn-2脂肪酸成分分析为依据，选择性水解松子油Sn-1，3位饱和/单不饱和脂肪酸得到高纯度皮诺敛酸单甘脂，再用化学水解单甘酯得到高纯度皮诺敛酸产品(反应方程式如下)。其中，松子油来自吉林派诺生物技术股份有限公司。实施例1：按M松子油：M脂肪酶：V溶剂＝1：0.01:1的比例顺序向反应容器中加入松子油，其中松子油和脂肪酶以质量M计，溶剂以体积V计，质量g对应体积ml，以下各实施例同此；lipozymeRMIM固定化酶及浓度为95％的三氯甲烷，保持20℃搅拌反应24小时；真空回收三氯甲烷后进入分子蒸馏，取分子蒸馏重组分得到Sn-2皮诺敛酸单甘酯；取与单甘酯相同摩尔比为1：1的氢氧化钠，溶于水中30℃皂化反应2小时，搅拌加入1摩尔比的盐酸溶液，水洗后脱溶、过滤，进入分子蒸馏，取轻组分检测得到含量为82％的皮诺敛酸。实施例2：按M松子油：M脂肪酶：V溶剂＝1：0.1:10的比例顺序向反应容器中加入松子油，Novozym435固定化酶及浓度为99％的乙酸乙酯，保持60℃搅拌反应2小时；真空回收乙酸乙酯后进入分子蒸馏，取分子蒸馏重组分得到Sn-2皮诺敛酸单甘酯；取与单甘酯相同摩尔比为1：1的氢氧化钾，溶于甲醇中30℃皂化反应2小时，搅拌加入1摩尔比的硫酸溶液，水洗后脱溶、过滤，进入分子蒸馏，取轻组分检测得到含量为83％的皮诺敛酸。实施例3：按M松子油：M脂肪酶：V溶剂＝1：0.03:7的比例顺序向反应容器中加入松子油，lipozymeTLIM固定化酶及浓度为96％的异丙醇，保持30℃搅拌反应19小时；真空回收三氯甲烷后进入分子蒸馏，取分子蒸馏重组分得到Sn-2皮诺敛酸单甘酯；取与单甘酯相同摩尔比为1：1的氢氧化钙，溶于水中40℃皂化反应3小时，搅拌加入1摩尔比的硝酸溶液，水洗后脱溶、过滤，进入分子蒸馏，取轻组分检测得到含量为84％的皮诺敛酸。实施例4：按M松子油：M脂肪酶：V溶剂＝1：0.07:5的比例顺序向反应容器中加入松子油，lipozymeRMIM固定化酶及浓度为95％的三氯甲烷，保持50℃搅拌反应10小时；真空回收三氯甲烷后进入分子蒸馏，取分子蒸馏重组分得到Sn-2皮诺敛酸单甘酯；取与单甘酯相同摩尔比为1：1的氢氧化钾，溶于水中50℃皂化反应2小时，搅拌加入1摩尔比的盐酸溶液，水洗后脱溶、过滤，进入分子蒸馏，取轻组分检测得到含量为83％的皮诺敛酸。实施例5：按M松子油：M脂肪酶：V溶剂＝1：0.01:10的比例顺序向反应容器中加入松子油，lipozymeTLIM固定化酶及浓度为95％的异丙醇，保持20℃搅拌反应24小时；真空回收异丙醇后进入分子蒸馏，取分子蒸馏重组分得到Sn-2皮诺敛酸单甘酯；取与单甘酯相同摩尔比为1：1的氢氧化钙，溶于乙醇中60℃皂化反应3小时，搅拌加入1摩尔比的硫酸溶液，水洗后脱溶、过滤，进入分子蒸馏本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种专一性酶法制备高纯度皮诺敛酸的方法，其特征在于包括下列步骤：步骤一：松子油Sn‑1,3专一性脂肪酶水解将松子油、脂肪酶、溶剂搅拌混合均匀，在20℃‑60℃条件下反应2‑24小时；步骤二：Sn‑2单甘酯的分离将步骤一反应的混合物真空回收溶剂后通过分子蒸馏，取重组分即得到Sn‑2皮诺敛酸单甘酯；步骤三:皮诺敛酸单甘酯水解单甘酯与碱溶液按1:1的摩尔质量比混合，30℃‑60℃反应≥2小时，形成皮诺敛酸盐与甘油，搅拌加入1摩尔比例的无机酸，水洗混合物弃下层、真空脱溶、过滤后经分子蒸馏，取轻组分即得到高纯度皮诺敛酸产品。

【技术特征摘要】
1.一种专一性酶法制备高纯度皮诺敛酸的方法，其特征在于包括下列步骤：
步骤一：松子油Sn-1,3专一性脂肪酶水解
将松子油、脂肪酶、溶剂搅拌混合均匀，在20℃-60℃条件下反应2-24小时；
步骤二：Sn-2单甘酯的分离
将步骤一反应的混合物真空回收溶剂后通过分子蒸馏，取重组分即得到Sn-2皮诺敛酸单甘酯；
步骤三:皮诺敛酸单甘酯水解
单甘酯与碱溶液按1:1的摩尔质量比混合，30℃-60℃反应≥2小时，形成皮诺敛酸盐与甘油，搅拌加入1摩尔比例的无机酸，水洗混合物弃下层、真空脱溶、过滤后经分子蒸馏，取轻组分即得到高纯度皮诺敛酸产品。
2.根据权利要求1所述的专一性酶法制备高纯度皮诺敛酸的方法，其特征在于，所述步骤一的松子油要求酸值≤0.5KOHmg/g，过氧化值≤5meq/kg，皮诺敛酸含量≥15％。
3.根据权利要求1所述的专一性酶法制备高纯度皮诺敛酸的方法，其特征在于，所述步骤一的Sn-1，3专一性脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵尔哲，王小锋，王磊，
申请(专利权)人：吉林派诺生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22