一株铜绿假单胞菌和其菌剂以及它们在钝化铅中的应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物领域，具体公开了一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)及其应用，该铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCC No.10844。还公开了一种含有该铜绿假单胞菌的菌剂和钝化铅的方法。本发明专利技术提供的铜绿假单胞菌在水体中对铅具有很强的钝化能力，能够在4-5小时内完成对铅的钝化，对铅的最大去除率可高达97.33％；将该菌株接种于铅污染的土壤后，能够明显提高土壤的脱氢酶活性，同时能够有效地将铅从可变换态转变为稳定形态以达到钝化铅的效果。并且，采用本发明专利技术提供的铜绿假单胞菌对铅进行钝化，操作简便、周期较短且不会造成二次污染，具有较高的经济效益和社会效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一株铜绿假单胞菌，具体地，涉及一株具有钝化铅功能的铜绿假单胞菌及其菌剂，以及它们在钝化铅中的应用。
技术介绍
当前国内土壤的重金属污染十分严重，有16％的土壤在不同程度上受到重金属的毒害，每年损失的粮食有上千万吨，严重危害生产生活和人体健康。近几年，铅中毒事件频频发生，尤其是一系列儿童血铅超标事件引起了国内极大的关注和广泛的讨论。由于铅在环境中广泛存在，通过呼吸道和消化道进入人体后，会引起机体的神经系统、血液系统和消化系统的一系列异常，严重影响人体正常机能。儿童由于代谢和发育方面的特点，对铅毒性特别敏感，因此，铅中毒在儿童体内的表现更为突出。目前重金属土壤的治理方法主要分为物理法、化学法和生物法。目前常用的物理修复法主要有气相抽提技术和热脱附技术；化学修复法主要有淋洗技术、固定/稳定化技术以及氧化-还原技术；生物修复方法主要有植物修复技术和微生物修复技术。物理和化学方法主要适用于工业污染地下水、污泥以及土壤的修复，它们往往存在工程量大、花费高和易产生二次污染的弊端。相比之下，生物修复方法更为环保，更适合农业种地的治理，但是植物修复方法往往周期较长，无法达到快速高效的治理目的。而微生物修复法是通过生物的代谢作用或其产生的酶降低重金属毒性。微生物修复方法因其具有经济友好、对环境扰动小的优势，在土壤和水体环境的修复中具有广阔前景，是一种事宜的重金属治理方法。所以筛选对重金属具有较强钝化能力的菌株对重金属的生物钝化至关重要。虽然目前已经报道了多种具有重金属钝化作用的菌株，但是真正具有较强重金属钝化能力并能够大规模直接用于重金属污染土壤生物修复的却不多，尤其是特别适用于铅钝化的菌株。因此，急需开发一株能够高效钝化环境中的重金属，尤其是铅的微生物菌株。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有的修复重金属污染方法所具有的工程量大、易产生二次污染及修复周期长的缺陷，提供一株能够在简单操作的条件下，无污染的且具有较短修复周期的对重金属铅进行钝化的菌株及其应用。为了实现上述目的，第一方面，本专利技术提供了一株铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，其中，所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCCNo.10844。第二方面，本专利技术提供了一种菌剂，其中，该菌剂含有如上所述的铜绿假单胞菌的菌体。优选地，该菌剂含有上述铜绿假单胞菌的活菌体和/或死菌体。第三方面，本专利技术提供了上述铜绿假单胞菌和/或上述菌剂在钝化铅中的应用。第四方面，本专利技术提供了一种钝化铅的方法，该方法包括：将上述铜绿假单胞菌和/或上述菌剂与含有铅污染的环境接触，以对上述环境中的铅进行钝化，其中，所述含有铅污染的环境包括土壤或水体。本专利技术提供的铜绿假单胞菌在水体中对铅具有很强的钝化能力，能够在4-5小时内完成对铅的钝化，对铅的最大去除率可高达97.33％；将该菌株接种于铅污染土壤后，能够明显提高土壤的脱氢酶活性，同时能够有效地将铅从可变换态转变为稳定形态以达到钝化铅的效果。并且，采用本专利技术提供的铜绿假单胞菌对重金属铅进行钝化，操作简便、周期较短且不会造成二次污染，具有较高的经济效益和社会效益。本专利技术的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。生物保藏本专利技术提供的菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，并于2015年5月22日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCCNo.10844。附图说明附图是用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本专利技术，但并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1表示的是本专利技术提供的铜绿假单胞菌及其菌剂与参比菌株及其菌剂对水体中铅的去除率(％)。图2表示的是本专利技术提供的铜绿假单胞菌及其菌剂与参比菌株及其菌剂对土壤脱氢酶活性的影响。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。根据本专利技术，第一方面，本专利技术提供了一株铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，其中，所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCCNo.10844。本专利技术提供的铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)分离自安徽宣城土壤。在所述铜绿假单胞菌的分离过程中，可以采用本领域常规的用于新菌株分离的方法，例如可以为液相富集法或土壤环流法。液相富集法具体可以包括：称取适量铅污染土壤样品加入到装有LB液体培养基的三角瓶中，加入适量玻璃珠。将三角瓶在28-30℃，160-170rpm下振荡；将土壤混合液转入离心管，取离心后的上清液作为铅钝化微生物的来源。将所述上清液接种到含有铅的LB液体培养基中，在28-30℃，160-170rpm下振荡培养。用无菌吸管吸取1-2mL，移入另一个富集培养三角瓶中。如此转移三次后，将上清液分别稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7或10-8倍，吸取适量涂布于含有50、100、200或300mg/L铅(Pb2+)的LB固体培养基上进行平板划线，28-30℃培养3-4天后，分离单菌落。土壤环流法具体可以包括：称取100g铅污染土壤与适量粒径约为3mm的砂粒混合均匀，置于环流装置的上层。下层装入LB培养基200mL作为环流液。启动空气压缩机，开始驯化过程，期间根据环流液的蒸发情况定期补加环流液。驯化结束后，将下层环流液分别稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7或10-8倍，吸取适量涂布于含有50、100、200或300mg/L铅(Pb2+)的LB固体培养基上进行平板划线，28-30℃培养3-4天后，分离单菌落。本专利技术从筛选出的菌株中选取一株对铅耐抗性最强的细菌进行了DNA提取与鉴定，鉴定结果显示，该菌株的16SRDNA序列SEQIDNo：1所示与铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)有100％的同源性，可以确定该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，并于2015年5月22日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.10844。本专利技术提供的铜绿假单胞菌经过培养能够产生大量的铜绿假单胞菌的活菌体。本专利技术对培养方法没有特别的限制，只要通过该培养方法可以使所述铜绿假单胞菌大量增殖即可，例如可以按照107CFU/mL的接种量将铜绿假单胞菌的活菌体接种于培养基中，并且在好氧条件下，在28-30℃的温度下培养10-12小时后，得到培养液。其中，所述培养基可以为本领域常规使用的培养基，例如可以为LB液体培养基(0.8-1重量％蛋白胨，0.5-0.8重量％酵母粉，1-1.5重量％氯化钠；pH为6.8-7.0；培养温度为28-30℃)或营养肉汤培养基(0.8-1重量％蛋白胨，0.3-0.5重量％牛肉膏，0.5-0.8重量％氯化钠；pH为7.2-7.6；培养温度为28-30℃)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，其特征在于，所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCC No.10844。

【技术特征摘要】
1.一株铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)，其特征在于，所述铜绿假单胞菌的保藏编号为CGMCCNo.10844。2.一种菌剂，其特征在于，该菌剂含有权利要求1所述的铜绿假单胞菌的菌体。3.根据权利要求2所述的菌剂，其中，该菌剂含有所述铜绿假单胞菌的活菌体和/或死菌体。4.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：林森，李晓桐，任立伟，王培红，
申请(专利权)人：粮华生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11