本发明专利技术公开了一种小分子多肽Prdx5截短体及其载体和应用，小分子多肽Prdx5截短体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术研制开发出靶向作用在Nrf2上的新型小分子多肽Prdx5截短体，该多肽分子量小，穿透性能好；可在原核表达系统中表达，生产成本低；具有很好的稳定性，能在一定范围内耐受酸碱度和温度的变化。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程
，具体涉及小分子多肽Prdx5截短体及其载体和应用。
技术介绍
长久以来抗肿瘤药物是被广泛关注和研究的热点问题之一。目前对肿瘤或癌症的治疗，通常是采用手术治疗结合放疗和化疗的综合疗法。放射线和化疗药导致细胞凋亡，从而杀伤肿瘤细胞。高剂量的放疗和化疗药物可以破坏或消灭癌细胞，但同时也损害正常细胞，使患者免疫功能下降，对人体造成一系列毒副作用。多肽药物是目前生物医药领域中极具发展前景的崭新领域，以其高效、安全、特异性强等特点逐渐用于癌症的预防和治疗。基因的功能最终要通过其表达产物——蛋白质来实现，生物体的一切活动或功能都离不开蛋白质的物质基础。发现和鉴定具有重要功能的蛋白质，可为新药的开发带来决定性的影响。基于肿瘤的发生发展及治疗预后的机制研究中，除了传统的原癌抗癌基因外，目前关于活性氧（reactiveoxidativespecies，ROS）在肿瘤生物学中的作用是一个热点的研究领域。ROS在各类细胞中不断的产生和清除，发挥着其正常及病理的功能作用。Nrf2在维持细胞的ROS相对稳态上发挥着重要的作用，ROS可通过Keap1第151位半胱氨酸的氧化修饰，改变Keap1的构象从而释放Nrf2，使得Nrf2脱离泛素降解状态，进而入核并结合于下游多个基因的启动子区域的抗氧化反应元件，调节抗氧化靶基因NQO1、GSTs及HMOX1等转录表达，降低ROS的水平。许多实验研究发现，在肿瘤组织（包括肺癌，肝癌，乳腺癌，卵巢癌等）中Nrf2和Prdx5基因高表达，同时又发现其高表达导致现有的抗肿瘤药物无效。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是提供一种小分子多肽Prdx5截短体，具有抗肿瘤功能，满足生物医药使用需求。本专利技术的另一目的是提供一种上述小分子多肽Prdx5截短体的表达载体。本专利技术还有一目的是提供上述小分子多肽Prdx5截短体的应用。技术方案：为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：小分子多肽Prdx5截短体，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。所述的小分子多肽Prdx5截短体的编码基因，其DNA序列如SEQIDNO.2所示。含有所述的小分子多肽Prdx5截短体的编码基因的载体。所述的小分子多肽Prdx5截短体在制备抗肿瘤药物中的应用。有益效果：与现有技术相比，本专利技术研制开发出靶向作用在Nrf2上的新型小分子多肽Prdx5截短体，该多肽分子量小，穿透性能好；可在原核表达系统中表达，生产成本低；具有很好的稳定性，能在一定范围内耐受酸碱度和温度的变化。附图说明图1是Nrf2和Prdx5全长蛋白的相互作用及免疫沉淀结果图；图2是小分子多肽Prdx5截短体的编码基因载体质粒图；图3是Prdx5与Nrf2相互作用的结构域图；图4是干扰小分子多肽Prdx5截短体表达后对细胞转移的影响结果图。具体实施方案下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南（第三版，J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译，科学出版社，2002年）中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件进行。实施例1材料：ProteinA/Gbeads，细胞裂解液，Nrf2抗体，Prdx5抗体，IgG。方法：细胞予预冷的0.01MPBS洗涤2次；加入1mLPBS后，细胞刮冰上刮取细胞，移至1.5mL离心管中，1000g×5min离心收集细胞；加入配置好的500μL细胞裂解液置于轮转仪上4℃轮转30min彻底裂解细胞，12000g4℃离心10min，将上清液转移至新EP管。预澄清加入20μL混匀的ProteinA/Gbeads，在DNA混合仪上转动1小时，900g离心5min（4℃），将上清液转移至新离心管，弃珠子。取40-60μL上清液作为Input，加入等量2×SDSloadingbuffer，沸水煮5-10min，离心后冻存。其余部分平分为两等分，分别加入等量（1μg）NormalIgG或相应抗体,在DNA混合仪上转动2小时（4℃）。在每个离心管中各加入30μL混匀的ProteinA/Gbeads继续转动2小时。然后900g离心5min（4℃），弃上清。加入1mL洗涤缓冲液洗涤珠子。900g离心5min（4℃），共洗涤3次。最后将40-60μL2×SDSloadingbuffer加入洗好的珠子中，沸水煮5-10min，离心后冻存。连同Input样品一起进行Westernblot检测。实验结果如图1所示：在组织IP和细胞IP中均存在Nrf2和Prdx5全长蛋白的相互作用。实施例2本专利技术提供一种能抑制Nrf2高表达肿瘤细胞增殖的稳定的小分子多肽。所述小分子多肽由自行设计的基因编码，经聚合酶链反应（PCR）合成后插入表达质粒。将表达载体转入大肠杆菌BL21，在LB培养基中培养，37℃下诱导表达。破菌取上清，应用OMEGA公司的DNA抽提试剂盒获得纯化的目的DNA，命名为Prdx5；其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，对应的编码蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。具体构建过程如下：1）表达载体的构建：设计引物，经PCR法连接，通过限制性内切酶HindIII和KpnI双酶切后，插入p3XFLAG-Myc-CMV质粒，如图2所示。构建的表达载体经酶切鉴定正确。材料：E.coliBL21/DE3工程菌株为本室冻存；T4DNA连接酶为GibcoBRL公司产品；限制性内切酶为Biolab公司产品；TaqDNA聚合酶为Promega公司产品；质粒提取试剂盒购自北京博大泰克生物技术公司；Ni离子亲和层析介质购自本元正阳公司；胎牛血清（FCS）、DMEM培养基、1640培养基为Hyclone公司产品。方法：表达载体的构建基因片段的PCR引物由上海桑尼公司合成，引物序列如下：上游引物：5’-CCAAGCTTACCATGTCCAAGACACACCTGCC-3’；下游引物：5’-GGGGTACCGAAAGCTGTGAGATGATATTGGGTGCC-3’。PCR反应体系为：H2O22μL，上游引物1μL，下游引物1μL，PCMV-N-FLAG-PRDX5质粒1μL，TaqDNA聚合酶25μL。PCR反应条件为：94℃变性4min，55℃退火，72℃引物延伸。在基因片段两端设计了KpnI和HindIII两个限制性酶切位点，双酶切连入p3XFLAG-Myc-CMV质粒。连接体系为：H2O10μL，T4连接酶buffer1μL，T本文档来自技高网...
【技术保护点】
小分子多肽Prdx5截短体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.小分子多肽Prdx5截短体，其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。
2.权利要求1所述的小分子多肽Prdx5截短体的编码基因，其DNA序列如SEQIDNO.2所<...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈爱国，季俐俐，薛群，汪志文，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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