本实用新型专利技术公开了一种抗alpha-烯醇化酶抗体免疫层析试纸条。该试纸条包括样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)、底板(7)、检测带T线(4)和质控带C线(5)，所述底板(7)的上部贴合有分析膜(3)，所述分析膜(3)上部的两端分别贴合有结合垫(2)和吸水垫(6)，所述结合垫(2)上部的一端贴合有样品垫(1)，所述检测带T线(4)和质控带C线(5)设置在分析膜(3)上。本实用新型专利技术采用间接免疫检测法，用alpha-烯醇化酶抗原蛋白，实现对样本中抗alpha-烯醇化酶抗体的高特异性快速检测，为临床炎症性肠病等自体免疫性疾病的辅助诊断提供依据。
【技术实现步骤摘要】
本技术涉及一种层析试纸条，属于医学免疫分析检测领域。
技术介绍
烯醇化酶(enolase)是1934年Lohman和Mayerhof在研究肌肉提取物中磷酸甘油酸向丙酮酸转换的过程中发现的。它既可催化糖酵解过程中2-磷酸-D-甘油酸(PGA)向磷酸-烯醇式丙酮酸(PEP)的转化，又可在糖原合成过程中，催化逆向反应，即作为磷酸丙酮酸水合酶，使PEP向PGA转化，因此烯醇化酶在细胞能量代谢过程中起重要的作用【JBiolChem，2000，275(8)：5958-5965】。在脊椎动物中，烯醇化酶存在3种同功酶：α，β，γ。α-烯醇化酶在许多组织均存在，β-烯醇化酶几乎仅见于肌肉组织，γ-烯醇化酶则主要存在于神经元和神经内分泌组织。根据它们的分布和作用不同，α-烯醇化酶又称为非神经元烯醇化酶(non-neuralenolase，NNE)、enolase1(eno-1)、磷酸烯醇丙酮酸脱氢酶(phosphopyruvatehydratase)、c-myc启动子结合蛋白(c-mycpromoter-bindingprotein，MBP-1)、纤维蛋白溶酶原结合蛋白(plasminogen-bindingprotein)。NNE在结构上高度保守，除了作为糖酵解反应的限速酶，还作为自身抗原参与机体免疫反应。研究证明，多种自身免疫病均可检出抗NNE抗体。NNE作为一种自身抗原，既是胞浆酶，又可表达于肾脏、血管等组织及一些细胞如内皮细胞膜或与细胞表面结合。抗NNE自身抗体通过识别NNE的膜联形式和/或干扰它的功能而于局部诱发免疫炎性反应。自身免疫性视网膜病变患者体内存在抗NNE抗体，并特异定位于视网膜神经节细胞层及内核层，诱导该区域细胞凋亡，导致失明【JAutoimmun，2004，23(2)：161-167】。存在于人呼吸道上皮细胞中的NNE自身抗原诱导的自身免疫反应，造成呼吸道上皮细胞损伤，诱发气道炎症反应，参与重症哮喘和阿斯匹林敏感性哮喘的发生【JAllergyClinImmunol，2006，118(2)：376-381】。类风湿性关节炎患者的关节滑膜中可见大量的NNE表达，作为一种自身抗原，NNE发生氨基甲酰鸟氨酸化，并刺激机体产生特异性自身抗体，从而引发类风湿性关节炎的慢性炎症反应【ArthritisResTher，2005，7(6)：1421-1429】。研究还发现，大约有10-18％的炎症性肠病(inflammatoryboweldisease，IBD)血清中抗NNE抗体阳性【ClinExpImmunol.1998；112：10-16】。目前实验室常用的检测抗NNE的方法是酶联免疫吸酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)和免疫印迹法(immunoblottingtest，IBT)。尚未发现有商品化的抗NNE抗体检测试剂盒。ELISA法检测可用于高通量标本测定，灵敏度也较高，目前被广泛认可，但操作比较繁琐，需多次加样和洗涤，完成整个实验过程需三小时左右，且易受温度和孵育条件的影响，需酶标仪，亦需要专业免疫学技术人员在专业实验室中进行实验操作，给实验带来诸多不便。免疫印迹法综合了SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性和敏感性，但操作相对复杂，完成整个实验过程需三小时左右，亦需要专业免疫学技术人员在实验室中进行实验操作，同时易受各种温度和孵育时间等环境条件因素的影响，对试验带来诸多不便。且试剂具有较强的毒性和污染性。免疫层析法(immunochromatography)是近几年来兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，形成肉眼可见的检测带。现有的免疫层析试纸条产品常用的示踪标记粒子有纳米金、纳米硒、乳胶等等，其中以纳米金应用最为广泛。与其他检测方法相比，免疫层析法检测时间短，只需要5～20分钟，操作人员无需培训，操作简便、快速，无需低温保存，储运方便等优势。在自体免疫性疾病诊断方面，已出现较多的免疫层析试纸，但抗NNE抗体的免疫层析试纸在国内外市场上仍没有问世。
技术实现思路
本技术所要解决的技术问题是为了克服现有方法的不足，将免疫层析法应用到抗NNE抗体的检测中，采用间接免疫法来实现对样品中的NNE抗体进行检测，通过把NNE抗原蛋白包被在结合垫或分析膜检测带上，实现对样品中NNE抗体的高特异、高准确性的检测，快速筛查抗NNE抗体阳性标本，为临床炎症性肠病等自体免疫性疾病提供快速的辅助诊断。本技术所要解决的技术问题在于提供一种免疫层析法抗NNE抗体测试纸条。本技术所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：一种抗NNE抗体免疫层析试纸条，包括样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)、底板(7)、检测带T线(4)和质控带C线(5)，所述底板的上部贴合有分析膜，所述分析膜上部的两端分别贴合有结合垫和吸水垫，所述结合垫上部的一端贴合有样品垫，所述检测带T线和质控带C线设置在分析膜上。所述的结合垫(2)包被胶体金或彩色胶乳标记物。优选例1中，所述的结合垫(2)包被有标记的NNE抗原蛋白，所述的检测带T线(4)包被有抗人IgG，所述的质控带C线(5)包被有NNE的单克隆或多克隆抗体的一种或多种。所述的NNE单克隆或多克隆抗体是指用NNE抗原蛋白作为免疫原所获得的鼠源、兔源、马源、豚鼠源、骆驼源的单克隆抗体或多克隆抗体。优选例2中，所述的结合垫(2)包被有标记的NNE抗原蛋白和标记物b层；所述的检测带T线(4)包被有抗人IgG，所述的质控带C线(5)包被有蛋白C。优选例3中，所述的结合垫(2)包被有标记物a层和标记物b层；所述的检测带T线(4)包被有NNE抗原，所述的质控带C线(5)包被有蛋白C。所述标记物a层的标记蛋白为抗人IgG单克隆抗体、抗人IgG多克隆抗体、葡萄球菌A蛋白(SPA)、链球菌G蛋白(ProteinG)中的一种或多种。所述的抗人IgG多克隆抗体为鼠源、马源、羊源、兔源、骆驼源或豚鼠源中的一种；所述的抗人IgG单克隆抗体为鼠源、骆驼源或兔源中的一种。所述的控制线上的蛋白C与标记物b层中的标记蛋白B同时或不同时为单克隆抗体或多克隆抗体中的一种，并且标记物b层中的标记蛋白B和质控线上的蛋白C可发生特异性结合形成免疫复合物。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种alpha‑烯醇化酶抗体免疫层析试纸条，其特征在于：包括样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)、底板(7)、检测带T线(4)和质控带C线(5)，所述底板(7)的上部贴合有分析膜(3)，所述分析膜(3)上部的两端分别贴合有结合垫(2)和吸水垫(6)，所述结合垫(2)上部的一端贴合有样品垫(1)，所述检测带T线(4)和质控带C线(5)设置在分析膜(3)上，结合垫(2)或分析膜(3)上含有alpha‑烯醇化酶抗原蛋白。
【技术特征摘要】
1.一种alpha-烯醇化酶抗体免疫层析试纸条，其特征在于：包括样品垫(1)、结合垫
(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)、底板(7)、检测带T线(4)和质控带C线(5)，所述底板(7)的上部
贴合有分析膜(3)，所述分析膜(3)上部的两端分别贴合有结合垫(2)和吸水垫(6)，所述结
合垫(2)上部的一端贴合有样品垫(1)，所述检测带T线(4)和质控带C线(5)设置在分析膜
(3)上，结合垫(2)或分析膜(3)上含有alpha-烯醇化酶抗原蛋白。
2.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述的结合垫(2)包被胶体金
标记物或乳胶标记物。
3.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述的结合垫(2)包被有标记
的alpha-烯醇化酶抗原蛋白和标记物b层；所述的检测带T线(4)包被有抗人IgG抗体；所述
的质控带C线(5)包被有蛋白C。
4.根据权利要求1所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述的结合垫(2)包被有标记
物a层和标记物b层；所述的检...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈菲，霍如松，周阳，吴根现，
申请(专利权)人：苏州和锐医药科技有限公司，
类型：新型
国别省市：江苏;32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。