一种罗伊氏乳杆菌及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种罗伊氏乳杆菌，其分类命名为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)TR02，保藏在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为：CCTCC No.M 2016546，保藏日期为2016年10月10日。本发明专利技术还公开了该罗伊氏乳杆菌在制备治疗胃肠道疾病的药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
，尤其涉及一种罗伊氏乳杆菌及其在制备治疗胃肠道疾病的药物中的应用。
技术介绍
溃疡性结肠炎(UC)、隐窝炎和罗恩氏病是炎性肠病(IBD)的主要类型，所述炎性肠病的特征在于肠中的慢性炎症。临床症状是腹泻、腹痛、偶然性直肠出血、体重减轻、疲倦和有时发热。尽管会发生在任何年龄，IBD最常见于青少年和年轻的成年人中，所以这些人可能遭受延迟的发育和矮化的生长。资料显示，每年美国UC患病率为200/10万人，治疗UC的花费在1至1.5亿美元左右，截止到2012年，UC患者总数是2000年的2.5倍，且复发率达72％；近年来我国UC的患病人数呈明显上升趋势。在医学上，通过减少炎症并从而控制胃肠道征状来治疗IBD。但是，目前尚不能在医学上治愈IBD。IBD的临床进程有很大差异，具有轻度至中度征状的患者无需住院治疗，但是，10-15％的患者会发生该疾病的严重进程，其在许多情况下继之以外科手术，结肠切除术可以消除UC，但是会降低生活质量和增加并发症的风险。用于治疗IBS的药物已经获得普及，尽管它们在临床试验中的效力是不大的，并且它们的临床实用性受到不利副作用的限制，可利用的药物包括：使用5-对氨水杨酸(5-ASA)、皮质类固醇和免疫调节药物。通常使用5-ASA进行轻度至中度IBD征状的长期治疗，而皮质类固醇和免疫调节药物被用于治疗严重的征状；腹泻或腹痛作为5-ASA的副作用而出现，而皮质类固醇的长期使用经常显示出严重的副作用，包括骨质减轻、感染、糖尿病、肌肉消瘦和精神病学障碍；免疫调节药物会抑制免疫系统，这会控制IBD征状。但是，产生的免疫受损的状态会使患者易感许多疾病。血清素能性药剂已经表现出对IBS的总体征状的效力，但是，最近关于安全性的忧虑已经严重地限制了它们的应用。益生菌被定义为“活的微生物，其在以特定数目摄入以后，会发挥超出固有的基础营养以外的健康益处”(ArayaM.等人,2002；GuarnerF.等人,1998)。来自双歧杆菌属的几种乳酸细菌和种是益生菌，这暗示，已经证实它们会促进特定健康效应。益生细菌必须满足与没有毒性、生存力、附着和有益效果有关的几个要求。然而，现有益生菌对治疗肠炎效果不佳。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的第一目的在于提供一种罗伊氏乳杆菌。本专利技术的第二目的在于提供一种罗伊氏乳杆菌在制备治疗胃肠道疾病的药物中的应用。本专利技术的第三目的在于提供一种罗伊氏乳杆菌在制备治疗肠炎的药物中的应用。技术方案：为了解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案为：一种罗伊氏乳杆菌，其分类命名为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02，在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)保藏，保藏单位地址：湖北省武汉市武昌区武汉大学，邮政编码为430072，其保藏编号为：CCTCCNo.M2016546，保藏日期为2016年10月10日。罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02的生理活性特征如下：所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02在MRS培养基平板上菌落较小，乳白色，直径1-2mm，表面平滑，边缘较规则。所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02菌体为杆状，革兰氏染色阳性，不形成芽孢，产生乳酸，兼性厌氧。罗伊氏乳杆菌的16SrDNA序列如SEQIDNo.1所示。将所测16SrDNA序列通过BLAST比对，鉴定其为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)。所述的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02是在制备抗菌药物中的应用。所述的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02是在制备治疗胃肠道疾病的药物中的应用。所述的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02是在制备治疗肠炎的药物中的应用。具体应用为：将罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02接种于发酵培养基中，在35-39℃下发酵培养8-16小时，得到的发酵液作为应用菌剂。本专利技术中所述发酵培养基的配方为：1000mL蒸馏水，蛋白胨10g，葡萄糖20g，酵母粉9g，乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸三铵2g，半胱氨酸0.5g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，吐温1ml，pH5.5-6.5。有益效果：与现有技术相比，本专利技术的优点是：(1)本专利技术提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02对多种病原菌具有抑制作用；对病原菌的作用方式多样化；繁殖速度快；能够人工培养，易于操作，便于生产应用；抗逆能力强等优点。(2)本专利技术提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02培养条件简单、发酵时间短、容易保存，适于工业化生产，具有良好的开发应用前景。附图说明图1为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02的菌落图。图2为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02的菌落放大图。图3为菌种第一批次功能性评价生长曲线。图4为菌种第二批次功能性评价生长曲线。图5为菌株耐酸实验结果图。图6为乳酸菌数量与肠炎小鼠的体重关系曲线。图7为乳酸菌数量与肠炎小鼠的结肠长度关系曲线。图8为治疗前后肠炎小鼠切片图。图9为罗伊氏乳杆菌TR02与白念珠菌培养液培养抑菌效果图。具体实施方式下面结合实验例详细阐述本专利技术罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02的应用。本专利技术实施例中，以下缩写所代表的意义分别为：MRS：乳酸细菌培养基DSS：葡聚糖硫酸钠Sulfasalazine水杨酸偶氮磺胺吡啶Microcapsule微囊实施例1菌株的分离1、菌种和培养基和培养条件(1)菌源来自中国某军区健康士兵粪便。(2)培养基平板培养基：1000mL蒸馏水，蛋白胨10g，葡萄糖20g，酵母粉9g，乙酸钠5g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸三铵2g，半胱氨酸0.5g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，吐温1ml，琼脂粉15-20g，pH5.5-6.5。2、菌株的分离和鉴定(1)菌株的分离预先经灭菌处理后的手套箱中取适量新鲜粪便置于盛装有无菌培养基的无菌试管中，充分震荡涡旋混匀；以上述充分震荡涡旋混匀的粪便溶液为原液，做十倍梯度稀释至合适梯度，取100μl均匀涂布于MRS+0.05％半胱氨酸固体平板培养基上，随后取出置于厌氧罐中，37℃厌氧培养过夜。次日可见平板上长有形态大小各异的菌落，结合罗伊氏乳杆菌典型菌落形态特征，挑取若干有代表性的菌落作二代划线纯化处理，平板厌氧活化1天，得培养物，随后做菌株鉴定。(2)菌株的鉴定革兰氏染色形态学鉴定：a、涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，在玻片上用记号笔做记号，便于观察，随后将玻片倒置，然后用移液器吸取10μl无菌生理盐水均匀涂布在记号处，继而用移液枪挑取纯培养物均匀溶于生理盐水中，涂布面不宜过大。b、干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。c、固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)TR02，保藏在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为：CCTCC No.M 2016546，保藏日期为2016年10月10日。

【技术特征摘要】
1.一种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)TR02，保藏在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为：CCTCCNo.M2016546，保藏日期为2016年10月...

【专利技术属性】
技术研发人员：李珮铷，贾长生，边高瑞，
申请(专利权)人：天益健康科学研究院镇江有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32