一种对猪有免疫增强活性的IFN‑γ的制备方法技术

本发明专利技术涉及兽医生物制品技术领域，具体涉及一种对猪有免疫增强活性的IFN‑γ的制备方法；包括以下步骤：(1)IFN‑γ量产(2)微胶囊(3)配料；本发明专利技术对机体免疫系统具有强大的调节作用，进一步促进单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞的激活，添加在饲料中能有效的提高猪自身的免疫力，对目前高致病性猪蓝耳病、高致病性禽流感、口蹄疫、猪瘟等重大动物疫病有很好的免疫效果，有效的提高猪的存活率，减少疾病的发生，减少养殖成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及兽医生物制品
，具体涉及一种对猪有免疫增强活性的IFN-γ的制备方法。
技术介绍
干扰素-γ(Interferon-gamma，IFN-γ)是一种具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的细胞因子，主要由活化的T细胞和NK细胞产生，IFN-γ对机体免疫系统具有强大的调节作用，是机体发挥免疫功能、清除体内病原体不可缺少的成分，因此，IFN-γ在疾病的诊断、治疗和疫苗免疫效果检测等方面起着重大作用，是现代分子生物学、免疫学和临床医学研究的热点之一，IFN-γ能进一步促进单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞的激活。当前高致病性猪蓝耳病、高致病性禽流感、口蹄疫、猪瘟等重大动物疫病一直威胁着邕宁区畜牧业的健康发展，目前对于IFN-γ的研究集中在其作为免疫佐剂增强疫苗毒株的免疫增强作用上，而将IFN-γ作为饲料添加剂的应用鲜有报道，本研究将进一步推动新型的免疫增强剂IFN-γ在猪病免疫防治中的应用，为猪病防治提供新的方法和思路。
技术实现思路
本专利技术为解决上述技术问题，提供了一种对猪有免疫增强活性的IFN-γ的制备方法。具体是通过以下技术方案来实现的：一种对猪有免疫增强活性的IFN-γ的制备方法，包括以下步骤：(1)IFN-γ量产，包括以下步骤：a、发酵：将IFN-γ质粒转入大肠杆菌DH5α菌株中，35～36℃，300～320rpm震荡培养1.5～2h，得大肠杆菌菌液，将其按1：90～100的体积比接种于发酵培养基中，发酵培养25h以上。b、萃取：将步骤a中发酵后的菌液震荡搅拌，冰浴10min，倒入离心管中，以4000～5000rpm离心5～7min，去除上清液，在剩余的菌体悬浮液中加入提取液，在冰浴20～30min，再以4000～5000rpm离心10～15min，去除上清液。提取液是将0.15～0.2mol/L的CaCl2、0.45～0.6mol/L的EDTA和葡萄糖按1∶0.65～0.85∶1.5～2的体积比混合。c、加热：取步骤b中的悬浮液，震荡搅拌15～20min，置于沸水浴中加热15～20min，冷却至20～25℃，加入悬浮液等质量的异戊醇，4000～5000rpm离心取沉淀。(2)微胶囊：将10～15份聚乙烯醇、15～20份乙基纤维素、6～10份木质素、3～5.5份淀粉和40～60份的蒸馏水混合得混合料，在100℃下水浴搅拌30min，冷却至常温后，加入5～7份的海藻酸钠、2.5～3份的明胶，70℃下水浴搅拌20～30min，真空干燥。(3)配料：将步骤(2)中的微胶囊按1～1.5μm的厚度涂覆在步骤(1)中的沉淀上，加入微胶囊质量的0.3～0.5倍的丙酮和沉淀质量的0.5～0.6倍的乳化剂，拌匀，真空干燥至丙酮完全挥发，得到微胶囊，在100份日粮中添加0.05～0.1份的微胶囊，拌匀。进一步，所述的发酵培养基，由以下按重量份计的原料组成：蛋白胨4～7、葡萄糖4～7、白头翁10～15、地锦草4～7、马齿苋8～12、黄柏2～4、0.01～0.02％的生理盐水50～60。进一步，所述的发酵培养基，是将白头翁、地锦草、马齿苋、黄柏按比例称取后，捣碎20～25min，真空压榨，得汁液，再加入蛋白胨和葡萄糖，30～40℃下搅拌15～20min，再混入0.01～0.02％的生理盐水，拌匀，控制培养基的温度为25℃即可。进一步，所述的乳化剂，卵磷脂、黄原胶和橄榄油按1∶0.2～0.4∶0.35～0.45的质量比混合制得。所述的冰浴，温度为4～7℃。综上所述，本专利技术的有益效果在于：本专利技术对机体免疫系统具有强大的调节作用，进一步促进单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞的激活，添加在饲料中能有效的提高猪自身的免疫力，对目前高致病性猪蓝耳病、高致病性禽流感、口蹄疫、猪瘟等重大动物疫病有很好的免疫效果，有效的提高猪的存活率，减少疾病的发生，减少养殖成本。具体实施方式下面对本专利技术的具体实施方式作进一步详细的说明，但本专利技术并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本专利技术权利要求所要求保护的范围。实施例1一种对猪有免疫增强活性的IFN-γ的制备方法，包括以下步骤：(1)IFN-γ量产，包括以下步骤：a、发酵：将IFN-γ质粒转入大肠杆菌DH5a菌株中，35℃，300rpm震荡培养1.5h，得大肠杆菌菌液，将其按1∶90的体积比接种于发酵培养基中，发酵培养25h以上。b、萃取：将步骤a中发酵后的菌液震荡搅拌，冰浴10min，倒入离心管中，以4000rpm离心5min，去除上清液，在剩余的菌体悬浮液中加入提取液，在冰浴20min，再以4000rpm离心10min，去除上清液。提取液是将0.15mol/L的CaCl2、0.45mol/L的EDTA和葡萄糖按1∶0.65∶1.5的体积比混合。c、加热：取步骤b中的悬浮液，震荡搅拌15min，置于沸水浴中加热15min，冷却至20℃，加入悬浮液等质量的异戊醇，4000rpm离心取沉淀。(2)微胶囊：将10g聚乙烯醇、15g乙基纤维素、6g木质素、3g淀粉和40g的蒸馏水混合得混合料，在100℃下水浴搅拌30min，冷却至常温后，加入5g的海藻酸钠、2.5g的明胶，70℃下水浴搅拌20min，真空干燥。(3)配料：将步骤(2)中的微胶囊按1μm的厚度涂覆在步骤(1)中的沉淀上，加入微胶囊质量的0.3倍的丙酮和沉淀质量的0.5倍的乳化剂，拌匀，真空干燥至丙酮完全挥发，得到微胶囊，在100g日粮中添加0.05g的微胶囊，拌匀。所述的发酵培养基，由以下按重量份计的原料组成：蛋白胨4g、葡萄糖4g、白头翁10g、地锦草4g、马齿苋8g、黄柏2g、0.01％的生理盐水50g。所述的发酵培养基，是将白头翁、地锦草、马齿苋、黄柏按比例称取后，捣碎20min，真空压榨，得汁液，再加入蛋白胨和葡萄糖，30℃下搅拌15min，再混入0.01％的生理盐水，拌匀，控制培养基的温度为25℃即可。所述的乳化剂，卵磷脂、黄原胶和橄榄油按1∶0.2∶0.35的质量比混合制得。实施例2一种对猪有免疫增强活性的IFN-γ的制备方法，包括以下步骤：(1)IFN-γ量产，包括以下步骤：a、发酵：将IFN-γ质粒转入大肠杆菌DH5α菌株中，36℃，320rpm震荡培养2h，得大肠杆菌菌液，将其按1∶100的体积比接种于发酵培养基中，发酵培养25h以上。b、萃取：将步骤a中发酵后的菌液震荡搅拌，冰浴10min，倒入离心管中，以5000rpm离心7min，去除上清液，在剩余的菌体悬浮液中加入提取液，在冰浴30min，再以5000rpm离心15min，去除上清液。提取液是将0.2mol/L的CaCl2、0.6mol/L的EDTA和葡萄糖按1∶0.85∶2的体积比混合。c、加热：取步骤b中的悬浮液，震荡搅拌20min，置于沸水浴中加热20min，冷却至25℃，加入悬浮液等质量的异戊醇，5000rpm离心取沉淀。(2)微胶囊：将15g聚乙烯醇、20g乙基纤维素、10g木质素、5.5g淀粉和60g的蒸馏水混合得混合料，在100℃下水浴搅拌30min，冷却至常温后，加入7g的海藻酸钠、3g的明胶，70℃下水浴搅拌30min，真空干燥。(3)配料：将步骤(2)中的微胶囊按1.5μm的厚度涂覆在步骤(1)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对猪有免疫增强活性的IFN‑γ的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)IFN‑γ量产，包括以下步骤：a、发酵：将IFN‑γ质粒转入大肠杆菌DH5α菌株中，35～36℃，300～320rpm震荡培养1.5～2h，得大肠杆菌菌液，将其按1∶90～100的体积比接种于发酵培养基中，发酵培养25h以上；b、萃取：将步骤a中发酵后的菌液震荡搅拌，冰浴10min，倒入离心管中，以4000～5000rpm离心5～7min，去除上清液，在剩余的菌体悬浮液中加入提取液，在冰浴20～30min，再以4000～5000rpm离心10～15min，去除上清液；提取液是将0.15～0.2mol/L的CaCl2、0.45～0.6mol/L的EDTA和葡萄糖按1∶0.65～0.85∶1.5～2的体积比混合；c、加热：取步骤b中的悬浮液，震荡搅拌15～20min，置于沸水浴中加热15～20min，冷却至20～25℃，加入悬浮液等质量的异戊醇，4000～5000rpm离心取沉淀；(2)微胶囊：将10～15份聚乙烯醇、15～20份乙基纤维素、6～10份木质素、3～5.5份淀粉和40～60份的蒸馏水混合得混合料，在100℃下水浴搅拌30min，冷却至常温后，加入5～7份的海藻酸钠、2.5～3份的明胶，70℃下水浴搅拌20～30min，真空干燥；(3)配料：将步骤(2)中的微胶囊按1～1.5μm的厚度涂覆在步骤(1)中的沉淀上，加入微胶囊质量的0.3～0.5倍的丙酮和沉淀质量的0.5～0.6倍的乳化剂，拌匀，真空干燥至丙酮完全挥发，得到微胶囊，在100份日粮中添加0.05～0.1份的微胶囊，拌匀。...

【技术特征摘要】
1.一种对猪有免疫增强活性的IFN-γ的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)IFN-γ量产，包括以下步骤：a、发酵：将IFN-γ质粒转入大肠杆菌DH5α菌株中，35～36℃，300～320rpm震荡培养1.5～2h，得大肠杆菌菌液，将其按1∶90～100的体积比接种于发酵培养基中，发酵培养25h以上；b、萃取：将步骤a中发酵后的菌液震荡搅拌，冰浴10min，倒入离心管中，以4000～5000rpm离心5～7min，去除上清液，在剩余的菌体悬浮液中加入提取液，在冰浴20～30min，再以4000～5000rpm离心10～15min，去除上清液；提取液是将0.15～0.2mol/L的CaCl2、0.45～0.6mol/L的EDTA和葡萄糖按1∶0.65～0.85∶1.5～2的体积比混合；c、加热：取步骤b中的悬浮液，震荡搅拌15～20min，置于沸水浴中加热15～20min，冷却至20～25℃，加入悬浮液等质量的异戊醇，4000～5000rpm离心取沉淀；(2)微胶囊：将10～15份聚乙烯醇、15～20份乙基纤维素、6～10份木质素、3～5.5份淀粉和40～60份的蒸馏水混合得混合料，在100℃下水浴搅拌30min，冷却至常温后，加入5～7份的海...

【专利技术属性】
技术研发人员：张艳雯，郑一民，张宁，兰宗宝，
申请(专利权)人：南宁学院，
类型：发明
国别省市：广西;45