一种微流控纸芯片及化学发光免疫检测方法技术

本发明专利技术公开一种微流控纸芯片及化学发光免疫检测方法。微流控纸芯片芯片是由进样层、检测层、吸水层和转轴组装而成，进样层和吸水层可以围绕各自转轴旋转，进而与检测层对齐形成亲水通道。检测操作时，洗涤分离和发光测定进样的缓冲溶液和显色液是在进样层进样口上统一滴加的，可以减少分开滴加的繁复操作；检测层上的各反应池可以分别滴加抗原标品和检测样品，以便在检测后可以在同一张纸芯片上得到标准曲线并计算出检测样品浓度。采用本发明专利技术的微流控纸芯片及化学发光免疫检测方法，减少了检测时的繁复操作，有效消除误差，增加了检测的准确性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫检测领域，特别是涉及一种微流控纸芯片及化学发光免疫检测方法。
技术介绍
微流控纸芯片是近年来备受关注的一种快速检测、即时诊断分析器件，具有广阔的应用前景。微流控纸芯片是以纸作为制作材料，用一定的技术手段在纸上形成亲水和疏水相间的区域，并集成了进样、反应、检测等基本操作单元。由于它具有重量轻、成本低廉、生物相容性好、一次性便携式分析、操作简便、所需样品的体积小、分析速度快、可以进行多种物质同时检测等优点，己经被越来越多地应用于临床检测、环境监控、食品安全分析等领域。微流控纸芯片的研究工作主要集中于芯片制作方法和芯片检测技术上。常见的微流控纸芯片制作方法包括光刻法、蜡印法、喷墨打印法、绘图法、等离子蚀刻法、柔印等。微流控纸芯片上生物大分子通常利用免疫反应进行检测，靠抗原与抗体特异性结合而建立的高选择性生物化学方法，而化学发光免疫分析技术最新发展起来的一项免疫测定技术，具有高灵敏性和高特异性的特点。将微流控纸芯片实验室与化学发光免疫分析方法结合后，具有成本低、操作简单、特异性强、灵敏度高、线性范围宽、检测快速等特点。现有的微流控纸芯片用于免疫反应检测时，需要在每个测试点上分别进行多步洗涤分离操作，繁琐费时。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种微流控纸芯片，通过进样层和吸水层围绕各自转轴旋转，进而与检测层对齐形成亲水通道，化学发光免疫分析检测时，在进样层进样口上统一滴加缓冲溶液和显色液，通过不同的旋转及操作，可以完成纸芯片上免疫分析检测，减少滴加时的繁复操作，以解决现有微流控纸芯片免疫分析检测时每个测试点上分别进行多步洗涤分离操作，繁琐费时的问题。为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：一种微流控纸芯片，所述微流控纸芯片包括：进样层、检测层、吸水层、转轴和转轴孔；所述进样层包括进样口、通道和交换口；所述检测层包括第一进样观察孔和反应池；所述吸水层包括第二进样观察孔和吸水区；所述进样口、所述第一进样观察孔和所述第二进样观察孔直径相同；当所述进样口、所述第一进样观察孔和所述第二进样观察孔重合时，所述交换口、所述反应池和所述吸水区位置对应重合；所述进样层包括第一进样层和第二进样层；所述转轴包括第一转轴和第二转轴，所述进样层的转轴孔位于所述进样层的一端，所述检测层的转轴孔位于所述检测层的两端，所述吸水层的转轴孔位于所述吸水层的一端；所述第一转轴通过转轴孔从上至下依次连接所述第一进样层的一端、所述检测层的一端和所述第二进样层的一端；所述第二转轴通过转轴孔从上至下依次连接所述检测层的另一端和所述吸水层的一端，所述吸水层位于所述第二进样层的下方。可选的，所述进样层包括疏水区和亲水区，所述疏水区由蜡打印后融化形成，所述亲水区由所述进样口、所述通道和所述交换口组成。可选的，所述检测层包括疏水区和亲水区，所述疏水区由蜡打印后融化形成，所述亲水区由所述第一进样观察孔和所述反应池组成。可选的，所述检测区的反应池个数大于1。可选的，所述吸水层包括疏水区和亲水区，所述疏水区由蜡打印后融化形成，所述亲水区由所述第二进样观察孔和吸水区组成。可选的，所述转轴采用鸡眼铆钉。一种化学发光免疫检测方法，所述方法包括：将微流控纸芯片的进样层和吸水层旋转至检测层两侧，使所述进样层和所述检测层不重叠、所述检测层和所述吸水层不重叠，所述微流控纸芯片包括：进样层、检测层、吸水层、转轴和转轴孔；所述进样层包括进样口、通道和交换口；所述检测层包括第一进样观察孔和反应池；所述吸水层包括第二进样观察孔和吸水区；所述进样口、所述第一进样观察孔和所述第二进样观察孔直径相同；当所述进样口、所述第一进样观察孔和所述第二进样观察孔重合时，所述交换口、所述反应池和所述吸水区位置对应重合；所述进样层包括第一进样层和第二进样层；所述转轴包括第一转轴和第二转轴，所述进样层的转轴孔位于所述进样层的一端，所述检测层的转轴孔位于所述检测层的两端，所述吸水层的转轴孔位于所述吸水层的一端；所述第一转轴通过转轴孔从上至下依次连接所述第一进样层的一端、所述检测层的一端和所述第二进样层的一端；所述第二转轴通过转轴孔从上至下依次连接所述检测层的另一端和所述吸水层的一端，所述吸水层位于所述第二进样层的下方；向所述检测层的反应池滴加抗原；将所述第一进样层旋转至与所述检测层重合，并将所述吸水层旋转至与所述检测层重合，使得所述第一进样层的进样口与所述检测层的第一进样观察孔和所述吸水层的第二进样观察孔重合；向所述第一进样层的进样口滴加缓冲液进行冲洗；将微流控纸芯片的进样层旋转至所述检测层一侧，使所述进样层和所述检测层不重叠；向所述检测层的反应池滴加抗体；将所述第一进样层旋转至与所述检测层重合，并将所述吸水层旋转至与所述检测层重合，使得所述第一进样层的进样口与所述检测层的第一进样观察孔和所述吸水层的第二进样观察孔重合；向所述第一进样层的进样口滴加缓冲液进行冲洗；将所述第一进样层旋转至所述检测层一侧，使得所述第一进样层的进样口与所述检测层的第一进样观察孔不重合；并将所述第二进样层旋转至与所述检测层重合，使得所述第二进样层的进样口与所述检测层的第一进样观察孔重合；通过所述第一进样观察孔向所述第二进样层的进样口滴加显色液；在暗室拍摄所述检测层图片并分析所述图片的灰度；根据所述图片的灰度计算所述抗原的浓度。可选的，所述向所述检测层的反应池滴加抗原具体包括：向第一反应池分别滴加已知不同浓度的标准抗原，向第二反应池滴加待检测抗原，所述第一反应池个数大于1，所述第二反应池个数大于等于1。可选的，所述根据所述图片的灰度计算所述抗原的浓度具体包括：首先根据所述已知不同浓度的标准抗原浓度与相应灰度关系得到标准曲线；然后根据待检测抗原的灰度利用所述标准曲线计算出待检测抗原浓度。以上方法步骤不固定于一种执行顺序，可根据实验需要调换顺序。根据本专利技术提供的具体实施例，本专利技术的有益效果为：通过微流控纸芯片的结构设计，进样层和吸水层围绕各自转轴旋转，进而与检测层对齐形成亲水通道，化学发光免疫分析检测时，在进样层进样口上统一滴加缓冲溶液和显色液，通过不同的旋转及操作，可以完成纸芯片上免疫分析检测，减少了滴加时的繁复操作。在检测层上设置多个反应池，可以分别滴加抗原标品和检测样品，实现同时检测以便制作标准曲线，增加了检测的准确性。本专利技术应用于生物分子(如肿瘤、心梗、肝炎指标标志物等)的免疫反应检测中，能够更快速准确完成相关指标检测。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术微流控纸芯片结构图；图2为本专利技术化学发光免疫检测实施例1得到的检测结果图；图3为本专利技术化学发光免疫检测实施例2得到的检测结果图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微流控纸芯片，其特征在于，所述微流控纸芯片包括：进样层、检测层、吸水层、转轴和转轴孔；所述进样层包括进样口、通道和交换口；所述检测层包括第一进样观察孔和反应池；所述吸水层包括第二进样观察孔和吸水区；所述进样口、所述第一进样观察孔和所述第二进样观察孔直径相同；当所述进样口、所述第一进样观察孔和所述第二进样观察孔重合时，所述交换口、所述反应池和所述吸水区位置对应重合；所述进样层包括第一进样层和第二进样层；所述转轴包括第一转轴和第二转轴，所述进样层的转轴孔位于所述进样层的一端，所述检测层的转轴孔位于所述检测层的两端，所述吸水层的转轴孔位于所述吸水层的一端；所述第一转轴通过转轴孔从上至下依次连接所述第一进样层的一端、所述检测层的一端和所述第二进样层的一端；所述第二转轴通过转轴孔从上至下依次连接所述检测层的另一端和所述吸水层的一端，所述吸水层位于所述第二进样层的下方。

【技术特征摘要】
1.一种微流控纸芯片，其特征在于，所述微流控纸芯片包括：进样层、检测层、吸水层、转轴和转轴孔；所述进样层包括进样口、通道和交换口；所述检测层包括第一进样观察孔和反应池；所述吸水层包括第二进样观察孔和吸水区；所述进样口、所述第一进样观察孔和所述第二进样观察孔直径相同；当所述进样口、所述第一进样观察孔和所述第二进样观察孔重合时，所述交换口、所述反应池和所述吸水区位置对应重合；所述进样层包括第一进样层和第二进样层；所述转轴包括第一转轴和第二转轴，所述进样层的转轴孔位于所述进样层的一端，所述检测层的转轴孔位于所述检测层的两端，所述吸水层的转轴孔位于所述吸水层的一端；所述第一转轴通过转轴孔从上至下依次连接所述第一进样层的一端、所述检测层的一端和所述第二进样层的一端；所述第二转轴通过转轴孔从上至下依次连接所述检测层的另一端和所述吸水层的一端，所述吸水层位于所述第二进样层的下方。2.根据权利要求1所述的微流控纸芯片，其特征在于，所述进样层包括疏水区和亲水区，所述疏水区由蜡打印后融化形成，所述亲水区由所述进样口、所述通道和所述交换口组成。3.根据权利要求1所述的微流控纸芯片，其特征在于，所述检测层包括疏水区和亲水区，所述疏水区由蜡打印后融化形成，所述亲水区由所述第一进样观察孔和所述反应池组成。4.根据权利要求1所述的微流控纸芯片，其特征在于，所述检测层的反应池个数大于1。5.根据权利要求1所述的微流控纸芯片，其特征在于，所述吸水层包括疏水区和亲水区，所述疏水区由蜡打印后融化形成，所述亲水区由所述第二进样观察孔和吸水区组成。6.根据权利要求1所述的微流控纸芯片，其特征在于，所述转轴采用鸡眼铆钉。7.一种化学发光免疫检测方法，其特征在于，所述方法包括：将微流控纸芯片的进样层和吸水层旋转至检测层两侧，使所述进样层和所述检测层不重叠、所述检测层和所述吸水层不重叠，所述微流控纸芯片包括：进样层、检测层、吸水层、转轴和转轴孔；所述进样层包括进样口、通道和交换口；所述检测层包括第一进样观察孔和反应池；所述吸水层包括第二进样观察孔和吸水区；所述进样口、所述第一进样观察孔和所述第二进样观察孔直径相同；当所述进样口、所述第一...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明，张美姿，李峥，王宁，史旺林，胡肖传，李鑫杰，
申请(专利权)人：航天神舟生物科技集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11