虫草多酶制品制造技术

本发明专利技术公开一种虫草多酶制品，依次按照如下步骤制作：将酿酒酵母和克洛德巴利酵母分别单独发酵，发酵温度为30℃，时间为24 h；将两种酵母发酵菌液等体积混合得混合液，离心取沉淀，再用与混合液等体积的0.05 mol/L，pH7.8无菌磷酸缓冲液重悬沉淀后经过高压均质机破壁，得破壁的酵母菌菌液备用；以蛹虫草菌发酵法生产蛹虫草发酵菌丝体，待蛹虫草菌丝体长出后，将破壁酵母菌菌液加到蛹虫草发酵菌液中，破壁酵母菌菌液与蛹虫草发酵菌液的体积比为1:2，用食品级盐酸调整蛹虫草发酵菌液至pH6.2~pH6.8后再发酵24~48 h；将蛹虫草发酵液用胶体磨磨碎后用高压均质机均质，制成虫草多酶制品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种虫草制品，尤其是一种可提高虫草多糖、虫草素等蛹虫草活性成分且可显著提高SOD、CAT和GSH-Px含量的虫草多酶制品。
技术介绍
蛹虫草[Cordycepsmilitaris(L.)Link]，又名北冬虫夏草，《新华本草纲要》记载蛹虫草功效为：“全草味甘，性平，有益肺肾，补精髓，止血化痰”。因菌丝体中含有虫草多糖、虫草素等多种生理活性物质，具有抗菌、抗癌、抗血小板凝集等作用，在临床上已经用于肝病、肾病、呼吸系统疾病的辅助治疗。目前常采用生物发酵的方法生产蛹虫草，具体步骤如下：a.培养基配制：取自来水1000ml，去皮切条土豆200g，蔗糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生素B120mg，煮沸30min左右，用纱布过滤，取液体，分装到三角瓶中；将装有培养基的三角瓶在高压灭菌锅中灭菌（121℃,30min），冷却后待用。b.在无菌超净台中用无菌接菌环取斜面保存的虫草菌种（豆粒大小2~3块）至灭菌后的发酵培养基中，于22℃,150rpm黑暗条件下震荡培养至菌球充满全部液体培养基即可。在人体内，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）可形成一套完整的抗氧化酶体系，能彻底清除体内氧自由基，从而可延缓衰老、抗疲劳、预防慢性疾病和自身免疫性疾病等。但是，当人超过25岁后，体内自身合成抗氧化物质速度逐渐减缓，加之环境污染、工作压力或慢性疾病等又会产生大量的氧自由基，因此人体内的抗氧化物质就不能满足需要。只能通过补充外源性抗氧化剂，以提升体内SOD等抗氧化酶含量，抑制自由基氧化损伤，进而实现预防因氧化伤害所造成的老化性疾病。研究表明，蛹虫草发酵菌丝体中也含有SOD，但比活力仅仅为16.59U/mL，而另外两种重要的抗氧化酶CAT和GSH-Px在蛹虫草中未见报道，影响了蛹虫草制品的保健功效。
技术实现思路
本专利技术是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种可提高虫草多糖、虫草素等蛹虫草活性成分且可显著提高SOD、CAT和GSH-Px含量的虫草多酶制品。本专利技术的技术解决方案是：一种虫草多酶制品，其特征在于依次按照如下步骤制作：a.将酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae，菌种编号CICC33032）和克洛德巴利酵母（Debaryomyceskloeckeri，菌种编号ACCC20008）分别单独发酵，发酵温度为30℃，时间为24h；b.将两种酵母发酵菌液等体积混合得混合液，离心取沉淀，再用与混合液等体积的0.05mol/L，pH7.8无菌磷酸缓冲液重悬沉淀后经过高压均质机破壁，得破壁的酵母菌菌液备用；c.以蛹虫草菌发酵法生产蛹虫草发酵菌丝体，待蛹虫草菌丝体长出后，将破壁酵母菌菌液加到蛹虫草发酵菌液中，破壁酵母菌菌液与蛹虫草发酵菌液的体积比为1:2，用食品级盐酸调整蛹虫草发酵菌液至pH6.2~pH6.8后再发酵24~48h；d.将蛹虫草发酵液用胶体磨磨碎后用高压均质机均质，制成虫草多酶制品。本专利技术不仅提高了蛹虫草制品中虫草多糖、虫草素等基本虫草活性成分，而且显著提高了SOD、CAT和GSH-Px的含量，SOD比活力达到300U/g，CAT达到50Ｕ／mL，GSH-Px也达到了100U/mL，极大提高了虫草发酵菌丝体的药效及营养价值。具体实施方式本专利技术的虫草多酶片依次按照如下步骤制作：a.将酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae，菌种编号CICC33032）和克洛德巴利酵母（Debaryomyceskloeckeri，菌种编号ACCC20008）分别单独发酵，发酵温度为30℃，时间为24h，此时各菌液中的菌数达到107个/mL；所用菌种可外购得到；b.将两种酵母发酵菌液等体积混合得混合液，离心取沉淀，再用与混合液等体积的0.05mol/L，pH7.8无菌磷酸缓冲液重悬沉淀后经过高压均质机均质破壁，得破壁的酵母菌菌液备用；c.以
技术介绍
所述的蛹虫草菌发酵法（虫草菌种外购）生产蛹虫草发酵菌丝体，当蛹虫草菌丝体长出后，将破壁酵母菌菌液加到蛹虫草发酵菌液中，破壁酵母菌菌液与蛹虫草发酵菌液的体积比为1:2，用食品级盐酸调整蛹虫草发酵菌液至pH6.5后再发酵36h；d.将蛹虫草发酵液用胶体磨磨碎后用高压均质机均质，可按照现有技术的方法制成各种剂型的虫草多酶制品，如制成口服液或经过喷雾干燥制成胶囊或片剂等。对比实验1：虫草对比例：按照以下比例制备培养基：自来水1000mL，去皮切条土豆200g，蔗糖20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生素B120mg，煮沸30min左右，用纱布过滤，取液体，分装到三角瓶中，将装有培养基的三角瓶在高压灭菌锅中灭菌（121℃,30min），冷却后待用；在无菌超净台中用无菌接菌环取斜面保存的虫草菌种（豆粒大小2~3块）至灭菌后的发酵培养基中，于22℃,150rpm黑暗条件下震荡培养3~4天，至菌球充满全部液体培养基，为虫草对比例。将本专利技术实施例所得均质的蛹虫草发酵液与对比例对比，结果如表1：试验样品虫草素虫草多糖SODGSH-PxCAT虫草对比例1.746mg/g16.5%（m/m）14.8U/g未检出2.3U/g本专利技术实施例1.858mg/g18.0%（m/m）5700U/g7500U/g40U/g通过对比可以看出，本专利技术可提高虫草制品中虫草多糖、虫草素等蛹虫草活性成分且可显著提高SOD、CAT和GSH-Px含量。对比实验2：选用18~22g雄性昆明小鼠50只，适应性饲养一周后随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、虫草对照组和本技术实施例组，每组10只。其中模型对照组、阳性对照组、虫草对照组和本技术实施例组每天皮下注射D-半乳糖1.25g/kg，空白对照组皮下注射同体积生理盐水。同时虫草对照组灌胃上述对比例1（虫草发酵液）2mL/kg（2mL虫草发酵液中干物质重量为50mg，相当于50mg/kg），本专利技术实施例组灌胃本专利技术实施例得到的片剂50mg/kg，阳性对照组灌胃VE-C复合剂50mg/kg，空白对照组和模型组给予等量蒸馏水，连续6周，小鼠末次给药后第2天，眼眶取血，用T-SOD、GSH-Px、CAT检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）测定血清SOD、GSH-Px和CAT活性。腹腔巨噬细胞吞噬指数是末次给样并取血后，给小鼠腹腔注射鸡红细胞悬液，注射后30min处死小鼠，腹腔注入2mL生理盐水，取腹腔洗液制片，放37℃培养箱内孵育30min，取出于生理盐水中漂洗后晾干，用1：1丙酮甲醛溶液固定，4％（v／v）Giemsa一磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水冲洗后晾干。油镜下计数巨噬细胞，每张片计数100个，观察记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数。吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数／计数的巨噬细胞数；脾脏指数是脾脏质量与体质量的比值，结果如表2：T-SOD（U/mL）GSH-Px（U/mL）CAT（U/mL）腹腔巨噬细胞吞噬指数脾脏指数空白对照组100.2±3.2634.12±3.1241.26±7.791.09±0.150.035±0.009模型对照组51.23±11.6521.35±2.3111.22±3.930.85±0.120.030±0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种虫草多酶制品，其特征在于依次按照如下步骤制作：a. 将酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae，菌种编号CICC 33032）和克洛德巴利酵母（Debaryomyces kloeckeri，菌种编号ACCC 20008）分别单独发酵，发酵温度为30℃，时间为24h；b.将两种酵母发酵菌液等体积混合得混合液，离心取沉淀，再用与混合液等体积的0.05mol/L，pH7.8无菌磷酸缓冲液重悬沉淀后经过高压均质机破壁，得破壁的酵母菌菌液备用；c. 以蛹虫草菌发酵法生产蛹虫草发酵菌丝体，待蛹虫草菌丝体长出后，将破壁酵母菌菌液加到蛹虫草发酵菌液中，破壁酵母菌菌液与蛹虫草发酵菌液的体积比为1:2，用食品级盐酸调整蛹虫草发酵菌液至pH6.2~pH6.8后再发酵24~48h；d. 将蛹虫草发酵液用胶体磨磨碎后用高压均质机均质，制成虫草多酶制品。

【技术特征摘要】
1.一种虫草多酶制品，其特征在于依次按照如下步骤制作：a.将酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae，菌种编号CICC33032）和克洛德巴利酵母（Debaryomyceskloeckeri，菌种编号ACCC20008）分别单独发酵，发酵温度为30℃，时间为24h；b.将两种酵母发酵菌液等体积混合得混合液，离心取沉淀，再用与混合液等体积的0.05mol/...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙永欣，綦玉良，
申请(专利权)人：大连巴德海洋生物研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21