一种鸡脾脏水解液、其制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种通过酶法水解得到的鸡脾脏水解液、其制备方法及应用，属于生物技术领域，本发明专利技术所提供的鸡脾脏水解液是通过以下步骤制备而成：首先将去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的鸡脾脏，用纯化水清洗干净，加入生理盐水，然后加入古尔胶和明胶，剪切研磨，得匀浆液；然后取匀浆液至反应器中加入蛋白酶，水解，得水解液；最后将水解液离心，除去蛋白酶，得提取液，加入山梨酸钾，即得鸡脾脏水解液。本发明专利技术制备的产品与传统饲料相比，蛋白的消化吸收率显著提高，无苦味，而且具有提高细胞免疫和体液免疫的功能，附加值高，生产周期短，适合工厂化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种通过酶法水解得到的鸡脾脏水解液、其制备方法及应用。技术背景中国是家禽养殖大国，2014年禽肉产量达1751万吨（中国统计局）。鸡脾脏是鸡的免疫器官，约占鸡体重的0.2%，每年产量达3.5万吨。鸡脾脏一般与鸡肠道、胰腺等共同作为下脚料低价处理。传统制法是将鸡脾脏下脚料加热加压处理，制成动物源性饲料，饲喂动物，补充粗蛋白和微量元素。但是，传统制法获得的饲料产品功能单一、附加值低，不利于鸡脾脏的开发利用。早在20世纪50年代，国外研究发现，动物脾脏含有大量的免疫活性物质，具有免疫增效作用，因此，以牛脾脏、猪脾脏为原料，通过反复冻融、低温透析或超滤工艺，人们获得了具有免疫增效活性的转移因子溶液，作为生物制品应用于人医领域。兽医领域也开展了相关研究，主要是利用动物脾脏制备转移因子，生产周期一般为5天，生产周期长，目前，以猪脾脏为原料制备的转移因子口服溶液已获得新兽药注册并上市销售，实现了猪脾脏的“二次”开发。然而，对于鸡脾脏的开发利用，将鸡脾脏水解成小分子蛋白，制备成鸡脾脏水解液饲料，并对其功能进行研究，国内还未见有报道。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的是提供一种通过酶法制备鸡脾脏水解液，解决了传统方法附加值低、功能单一，制作周期长、步骤繁琐、成本高等问题。本专利技术还提供了所述鸡脾脏水解液的制备方法。本专利技术还提供了所述鸡脾脏水解液在动物饲养中的应用。本专利技术为了实现上述目的所采用的技术方案为：本专利技术提供了一种鸡脾脏水解液的制备方法，包括以下步骤：（1）将去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的鸡脾脏，用纯化水清洗干净，按照重量比1:1比例加入生理盐水，然后加入占鸡脾脏重量0.12%的古尔胶和明胶，倒入胶体磨，剪切研磨，得匀浆液；（2）取匀浆液至反应器中，按体积比1:1加入纯化水混合均匀，得混合液，每16ml匀浆液中加入3000-6000U蛋白酶，水解，得水解液；（3）将水解液离心，上清液过10KDa中空纤维超滤柱除去蛋白酶，得提取液，加入山梨酸钾，即得鸡脾脏水解液。进一步的，步骤（1）中，所述古尔胶和明胶的质量比为1：3。进一步的，步骤（1）中，所述剪切研磨的条件为：转速为3900r/min，研磨时间为30-60s。进一步的，本专利技术所使用的蛋白酶为复合蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或两种。上述制备方法中，所述蛋白酶为复合蛋白酶时，调节混合液的PH值为6.8-7.0，水解时间为3.5h；所述蛋白酶为木瓜蛋白酶时，调节混合液的PH值为6.0-6.2，水解时间为4h；所述蛋白酶为复合蛋白酶及木瓜蛋白酶两种时，混合液中先加入木瓜蛋白酶，调节pH值为6.0，水解1小时，再加入复合蛋白酶，调节pH值为6.6，继续水解2小时，收集水解液；所述水解的温度均在47.5-52.5℃；本专利技术所述PH值的调节采用PH值为3.2-4.0柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液或PH值为9.0-9.4甘氨酸-氢氧化钠缓冲液。进一步的，所述蛋白酶为两种时，所述木瓜蛋白酶同复合蛋白酶的质量比为2:1。进一步的，步骤（3）中，所述离心的条件为：在3000-4000r/min的转速下离心5-10min。进一步的，步骤（3）中，所述山梨酸钾的加入量占提取液质量的0.01-0.02%。根据上述制备方法制备的鸡脾脏水解液也在本专利技术的保护范围之内。本专利技术还提供了一种利用上述制备方法制备的鸡脾脏水解液在动物饲养中的应用。本专利技术利用复合蛋白酶、木瓜蛋白酶对鸡脾脏进行水解，获得产品的主要成分是小分子多肽、游离氨基酸、核酸、微量元素等，与传统饲料相比，蛋白的消化吸收率显著提高，而且具有提高细胞免疫和体液免疫的功能，附加值高；与鸡脾脏转移因子相比，蛋白含量高20倍、生产周期缩短60%以上、制作工艺简单、成本低；本专利技术通过加入适量的古尔胶及明胶，能够通过底物竞争，使水解机制向着有利于生成无苦味产物方向转变，同时起到一定的掩盖作用，制备的产物无苦味，蛋白含量为2.5%-5%。本专利技术的有益效果为：（1）本专利技术使用胶体磨进行细胞破碎，可以将95%的细胞破碎，细胞内容物充分释放，提高了蛋白水解效率，比常规方法的单位时间水解度提高20-30%；（2）本专利技术采用木瓜蛋白酶或双酶水解法，水解度高达60%-75%，氮回收率达90%以上，联合添加适量的古尔胶及明胶，获得的蛋白水解液无苦味，分散性好，适合动物口服使用；（3）本专利技术采用了超滤方法去除蛋白酶，与传统加热方法相比，保护了小分子蛋白的免疫活性；生产周期短，仅需1-2天即可完成一批次生产。具体实施方式为了更好的理解本专利技术，下面结合具体实施例来进一步说明。本专利技术所使用的复合蛋白酶（20万U/g）及木瓜蛋白酶（10万U/g）均购自山东西唐生物科技有限公司。本专利技术制备过程中，PH值的调节采用PH值为3.2-4.0柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液或PH值为9.0-9.4甘氨酸-氢氧化钠缓冲液。实施例1一种鸡脾脏水解液的制备方法，包括以下步骤：（1）将去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的鸡脾脏，用纯化水清洗干净，按照重量比1:1比例加入生理盐水,然后加入占鸡脾脏重量0.12%的古尔胶和明胶（古尔胶和明胶的质量比为1：3），倒入胶体磨，以3900r/min剪切研磨30s，得匀浆液；（2）取匀浆液至反应器中，按体积比1:1加入纯化水混合均匀，得混合液，按每16ml匀浆液中加入4000U复合蛋白酶，调节混合液的PH值至6.2，在50℃下水解3.5小时，得水解液；（3）将水解液在3000r/min条件下离心10分钟，上清液过10KDa中空纤维超滤柱除去复合蛋白酶，得提取液，加入占提取液重量0.01%的山梨酸钾，即得鸡脾脏水解液。实施例2一种鸡脾脏水解液的制备方法，包括以下步骤：（1）将去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的鸡脾脏，用纯化水清洗干净，按照重量比1:1比例加入生理盐水,然后加入占鸡脾脏重量0.12%的古尔胶和明胶（古尔胶和明胶的质量比为1：3），倒入胶体磨，以3900r/min剪切研磨30s，得匀浆液；（2）取匀浆液至反应器中，按1:1加入纯化水混合均匀，得混合液，按每16ml匀浆液中加入3000U的木瓜蛋白酶，调节混合液的pH值为6.2，50℃水解4小时，收集水解液；（3）将水解液在4000r/min条件下离心5分钟，上清液过10KDa中空纤维超滤柱除去木瓜蛋白酶，得提取液，加入占提取液重量0.01%的山梨酸钾，即得鸡脾脏水解液。实施例3一种鸡脾本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鸡脾脏水解液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的鸡脾脏，用纯化水清洗干净，按照重量比1:1 比例加入生理盐水，然后加入占鸡脾脏重量0.12%的古尔胶和明胶，倒入胶体磨，剪切研磨，得匀浆液；（2）取匀浆液至反应器中，按体积比1:1加入纯化水混合均匀，得混合液，按每16ml匀浆液中加入3000‑6000U蛋白酶，水解，得水解液；（3）将水解液离心，上清液过10KDa中空纤维超滤柱除去蛋白酶，得提取液，加入山梨酸钾，即得鸡脾脏水解液。

【技术特征摘要】
1.一种鸡脾脏水解液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将去除外表脂肪、表皮及皮下筋膜的鸡脾脏，用纯化水清洗干净，按照重量比1:1
比例加入生理盐水，然后加入占鸡脾脏重量0.12%的古尔胶和明胶，倒入胶体磨，剪切研磨，
得匀浆液；
（2）取匀浆液至反应器中，按体积比1:1加入纯化水混合均匀，得混合液，按每16ml匀浆
液中加入3000-6000U蛋白酶，水解，得水解液；
（3）将水解液离心，上清液过10KDa中空纤维超滤柱除去蛋白酶，得提取液，加入山梨酸
钾，即得鸡脾脏水解液。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述古尔胶和明胶的质量比为1：3。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述剪切研磨的条件为：转速为
3900r/min，研磨时间为30-60s。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶为复合蛋白酶、木瓜蛋白
酶中的一种或两种。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶为复合蛋白酶时，调节混
合液的PH值为6.8-7.0，水解时间为3...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄迪海，秦卓明，张再辉，刘霞，徐秀荣，盛晓丹，
申请(专利权)人：山东省健牧生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37