一种预防反刍动物草酸中毒的复合菌剂及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种预防反刍动物草酸中毒的复合菌剂及其制备方法与应用。所述复合菌剂包括乳酸菌10‑500亿cfu/g，枯草芽孢杆菌100‑800亿cfu/g，凝结芽孢杆菌100‑800亿cfu/g。本发明专利技术还包括含有所述复合菌剂的脂类微胶囊剂，以重量份计包括复合菌剂1‑10份，油脂10‑50份。本发明专利技术复合菌剂中微生物种类搭配合理，产生的微生物体系互补性强，能增强草酸的降解能力，还有助于饲草中纤维素的降解，增强营养，提高免疫力；各微生物的配合，尤其是按照1:2:2的用量配比进行配合，可以各菌种组起到协同增效作用，效果优异。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于饲料添加剂领域，具体涉及一种预防反刍动物草酸中毒的复合菌剂及其制备方法与应用。
技术介绍
草酸及草酸盐是广泛存在于饲草中的抗营养因子，能显著降低动物对矿物质元素的吸收利用效率。牛羊是以植物为主的反刍动物，因此，草酸对反刍动物的危害更大。通常，饲草中草酸由瘤胃中微生物降解为无害的甲酸和二氧化碳，或者与钙结合形成不溶性的草酸钙排出体外。当牛羊中草酸降解菌数量下降时，或者饲料中高草酸和低钙同时出现时，动物草酸中毒的风险增大。急性草酸中毒主要是未被降解的高浓度草酸入血与大量血钙结合，造成血液中钙浓度急剧降低，影响正常的细胞功能，导致动物肌肉震颤、循环虚脱，最终导致死亡。如果是草酸慢性中毒，不溶性的草酸钙会严重损伤肾小管，造成泌尿系统结石甚至死亡。草酸慢性中毒导致的结石在公畜中发生率更高。牛羊草酸盐中毒时，食欲不振、反刍减少、两眼无神、精神沉郁；频繁起立与卧倒，便秘，排尿不畅，偶尔排出棕红色血尿；心率加速，肌肉震颤与抽搐，血液凝固时间延长；严重的可导致死亡。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供一种预防反刍动物草酸中毒的复合菌剂及其制备方法与应用。本专利技术技术方案如下：一种预防反刍动物草酸中毒的复合菌剂，包括乳酸菌10-500亿cfu/g，枯草芽孢杆菌100-800亿cfu/g，凝结芽孢杆菌100-800亿cfu/g。其中，所述乳酸菌包括乳酸杆菌菌、双歧杆菌菌等中的一种或几种；优选为副干酪乳杆菌CGMCC1.2468，动物双歧杆菌CGMCC1.2226中的一种或两种。优选地，所述枯草芽孢杆菌为CGMCC1.3358；所述凝结芽孢杆菌为CGMCC1.3220。进一步优选地，所述预防反刍动物草酸中毒的复合菌剂，所述复合菌剂包括乳酸菌20-500亿cfu/g，枯草芽孢杆菌200-800亿cfu/g，凝结芽孢杆菌200-800亿cfu/g；更进一步优选地，所述预防反刍动物草酸中毒的复合菌剂，包括乳酸菌100-400亿cfu/g，枯草芽孢杆菌400-800亿cfu/g，凝结芽孢杆菌400-800亿cfu/g。又进一步优选地，括乳酸菌200-300亿cfu/g，枯草芽孢杆菌400-600亿cfu/g，凝结芽孢杆菌400-600亿cfu/g。更进一步优选地，所述乳酸菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的有效活菌数比例为1:2:2。又更进一步优选地，本专利技术所述的复合菌剂，有效菌总含量为200-700亿cfu/g；优选有效菌总含量为300-500亿cfu/g；例如200亿cfu/g、300亿cfu/g、400亿cfu/g、500亿cfu/g、600亿cfu/g、700亿cfu/g等。本专利技术所述复合菌剂，是将上述微生物制备成菌粉或混合菌粉(包括细菌菌粉、细菌芽孢)，再与载体混合均匀制得。本专利技术所述菌粉或混合菌粉可按现有常规方法制备。例如包括：将乳酸菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的原始菌种分别依次进行斜面培养、摇床培养、固态发酵或液态发酵(例如发酵罐培养后)，将得到的各发酵液或发酵产物分别浓缩干燥制成菌粉，再按比例混合制成混合菌粉；或将得到的各发酵液或发酵产物按比例混合再经过浓缩干燥制备成混合粉。进一步地，所述菌粉或混合菌粉(包括细菌菌粉、细菌芽孢)的制备方法，包括以下步骤：1)种子培养：将乳酸菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的原始菌种分别接种于种子培养基上，在39±1℃条件下培养36-48小时，分别制得乳酸菌菌种、枯草芽孢杆菌菌种、凝结芽孢杆菌菌种；2)种子扩大培养(即二级培养)：将上述步骤1)培养的乳酸菌菌种接种于种子扩大培养基中，在pH6.2～6.4、温度为39±2℃条件下，静置培养12～24小时；将上述步骤1)培养的枯草芽孢杆菌菌种、凝结芽孢杆菌菌种分别接种于液体培养基中，在pH6.5～7.0、温度为39±2℃条件下，140～160r/min摇床培养36～48小时；3)发酵罐培养(即三级培养)：将上述步骤2)培养的乳酸菌菌种接种于发酵培养基中(发酵罐)，在pH6.2～6.4、温度为43℃、不通风，间歇搅拌培养16～36小时得到乳酸菌发酵液；将上述步骤2)培养的枯草芽孢杆菌菌种、凝结芽孢杆菌菌种分别接种于培养基中(发酵罐)，在pH7.2～7.4罐压0.5kg、温度为39℃、通风量1:0.8～1.1条件下，培养48～56小时分别得枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的发酵液；4)将步骤3)中分别得到的各微生物的发酵液分别离心，获得菌体沉淀，混合赋形剂，干燥制成菌粉，再按比例混合制成混合菌粉；或将得到的各发酵液按比例混合再经过浓缩干燥、混合赋形剂，制备成混合菌粉。在上述细菌菌粉的制备方法中：步骤1)中，乳酸菌(副干酪乳杆菌、动物双歧杆菌)所用种子培养基为MRS液体培养基，具体配方如下：葡萄糖20g,蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母浸粉5g，无水乙酸钠5g，KH2PO42g，柠檬酸氢二铵2g，MgSO4·7H2O0.58g，MnSO4·H2O0.25g，吐温801ml，用蒸馏水定容至1000mL，调pH6.2～6.4,121℃灭菌15min。枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌所用种子培养基的配方如下：蛋白胨10g，牛肉膏5g、氯化钠5g，加水至1000mL；调节pH7.0-7.2。步骤2)中，乳酸菌种子扩大培养基配方如下：葡萄糖(水解糖)50g，玉米浆干粉50g，磷酸氢二铵2.5g，碳酸钙100g，用蒸馏水定容至1000mL。枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌所用种子扩大培养基配方如下：麸皮50g硫酸铵1.5g、KH2PO41.5g，加水至1000mL。步骤3)中，各菌种所述发酵罐培养基分别与种子扩大培养配方相同。步骤4)中，所述赋形剂为玉米淀粉或沸石粉；所述干燥是在≤70℃的条件下进行的，优选50～60℃。上述制备方法，每个步骤的培养均是在无菌条件下进行的。本专利技术还提供一种含有上述复合菌剂的脂类微胶囊剂。优选地，上述脂类微胶囊剂以重量份计包括上述复合菌剂1-10份，油脂10-50份。进一步优选地，上述脂类微胶囊剂以重量份计包括上述复合菌剂2-8份，油脂20-50份。优选地，所述脂类微胶囊剂粒度为10-830微米。优选地，所述油脂包括牛油、羊油、猪油、鸡油等动物油脂，或大豆油、菜籽油、棉籽油、花生油、棕榈油、氢化植物油等植物油脂中的一种或几种。进一步优选地，动物油脂与植物油脂的重量比例为5:1-1:5。所述进一步优选地，本专利技术所述的脂类微胶囊剂，有效菌总含量300-800亿cfu/g。本专利技术还提供上述脂类微胶囊剂的制备方法，包括按配比将上述复合菌剂与油脂在15-55℃混合，分散，形成脂类包被微胶囊，干燥，过筛(例如过20-40目筛)，即可。进一步地，还可将上述脂类微胶囊剂与赋形剂混合制成复合制剂。优选地，所述复合制剂中所述脂类微胶囊剂的重量含量为70％-90％。所述赋形剂可包括稻壳粉、甲壳素、玉米淀粉等。该复合制剂经真空包装后，在室温下保质期可以达到半年以上。经检测，半年后有效活菌数下降不超过102cfu/g。本专利技术还包括上述复合菌剂、脂类微胶囊剂、复合制剂在制备预防反刍动物草酸中毒的药物中的应用。本专利技术所述反刍动物优选为牛、羊。本专利技术所述复合菌剂主要由具有草酸降解能力的乳酸菌(副干酪乳杆菌、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预防反刍动物草酸中毒的复合菌剂，其特征在于，包括乳酸菌10‑500亿cfu/g，枯草芽孢杆菌100‑800亿cfu/g，凝结芽孢杆菌100‑800亿cfu/g；所述乳酸菌包括副干酪乳杆菌CGMCC 1.2468、动物双歧杆菌CGMCC 1.2226菌中的一种或两种；所述枯草芽孢杆菌为CGMCC 1.3358；凝结芽孢杆菌为CGMCC 1.3220。

【技术特征摘要】
1.一种预防反刍动物草酸中毒的复合菌剂，其特征在于，包括乳酸菌10-500亿cfu/g，枯草芽孢杆菌100-800亿cfu/g，凝结芽孢杆菌100-800亿cfu/g；所述乳酸菌包括副干酪乳杆菌CGMCC1.2468、动物双歧杆菌CGMCC1.2226菌中的一种或两种；所述枯草芽孢杆菌为CGMCC1.3358；凝结芽孢杆菌为CGMCC1.3220。2.根据权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂包括乳酸菌20-500亿cfu/g，枯草芽孢杆菌200-800亿cfu/g，凝结芽孢杆菌200-800亿cfu/g；优选地，所述复合菌剂包括乳酸菌100-400亿cfu/g，枯草芽孢杆菌400-800亿cfu/g，凝结芽孢杆菌400-800亿cfu/g；进一步优选地，所述复合菌剂包括乳酸菌200-300亿cfu/g，枯草芽孢杆菌400-600亿cfu/g，凝结芽孢杆菌400-600亿cfu/g；更进一步优选地，所述乳酸菌、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌的有效活菌数比例为1:2:2。3.根据权利要求1或2所述的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂中有效菌总含量为200-700亿cf...

【专利技术属性】
技术研发人员：王芳，
申请(专利权)人：中北大学，
类型：发明
国别省市：山西;14