本发明专利技术公开了一种生防菌株A4及其在作物病害防治方面的应用。假苍白杆菌Pseudochrobactrum A4，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号是：CGMCC NO.7175，保藏日期为2013年1月21日。该菌株可用于禾谷丝核菌、小麦赤霉、稻瘟病菌、尖孢镰刀菌和黄瓜灰霉病菌等作物病害的生物防治，对小麦、水稻、生菜和黄瓜病害有良好的防治效果。本发明专利技术具有广谱杀菌特性，在作物病害生防方面具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株新筛选到的PseudochrobactrumA4及其应用，属于生物
技术介绍
长期以来，植物病害的防治主要以化学防治为主，然而化学杀菌剂的长期使用不仅会导致植物病原菌对杀菌剂产生抗药性，同时农药的残留会污染环境、损害人体健康。生物防治作为环境友好型防治方法，被认为是农业生产中能够代替或者至少减少化学农药使用的一种补充手段(CompantS,DuffyB,NowakJ,ClementC,BarkaEA.Useofplantgrowth-promotingbacteriaforbiocontrolofplantdisease:principles,mechanismsofactionandfutureprospects[J].AppliedandEnvironmentalMicrobiology,2005,71(9):4951-4959.)，将在植物病害防治中发挥巨大的作用，同时，植物病害的生物防治无毒、无害、无污染，既符合人们对绿色食品的需求，也有利于农业的可持续发展，因而越来越多的人们逐渐将目光转向从自然界中筛选和开发高效的生防菌剂。但是，以往的研究多集中在利用常温或中温微生物进行作物病害的生物治理，对于低温环境的研究较少。在高山、高纬地区，尤其是我国北方地区，气候寒冷的条件下微生物存活率较低、生防能力较差。近年来，针对低温适生菌的研究越来越受到环境微生物学者的重视。低温微生物由于具有适宜在低温环境条件下生长的特性，越来越多地应用在环境污染治理、食品开发等方面。有研究表明在北极、南极和高山冻土地区的土壤中存在大量的低温适生的微生物。此外，在地下洞穴中也存在许多低温适生菌。这些低温适生的微生物为特殊条件下的植物病害生物防治提供了种质资源。已报道的低温生防菌主要有假单胞菌属(MishraPK,BishtSC,RuwariP,etal.Alleviationofcoldstressininoculatedwheat(TriticumaestivumL.)seedlingswithpsychrotolerantPseudomonadsfromNWHimalayas[J].Archivesofmicrobiology,2011,193(7):497-513.)、泛菌属(G.Selvakumar,S.Kundu,P.Joshi,S.Nazim,A.D.Gupta,P.K.Mishra,H.S.Gupta,Characterizationofacold-tolerantplantgrowth-promotingbacteriumPantoeadispersa1Aisolatedfromasub-alpinesoilintheNorthWesternIndianHimalayas,WorldJournalofMicrobiologyandBiotechnology,2007,24:955-960.)、芽孢杆菌属(刘芳,薛鹏琦,乔俊卿,伍辉军,孙健,高学文.西藏低温适生芽孢杆菌的分离鉴定及其抗菌和促生作用.中国生物防治,2010,26:453-460.)等。这些菌能在低温环境中发挥作物病害防治和作物促生的作用。因此，筛选低温环境条件下生防菌株将为建立适合低温环境作物病害的生物治理技术提供重要技术支撑。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种适宜于低温环境下可以很好地控制作物病害发生的生防菌株及其用途。该菌属属于Pseudochrobactrumsp.，保藏名称为PseudochrobactrumA4，保藏单位为：“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏日期2013年1月21日，保藏号CGMCCNo.7175。保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该菌株特征：菌体细胞呈短棒状，直径大于1μm，单个排列，革兰氏阳性，无荚膜，运动，在营养琼脂平板上菌落较大；其最适生长温度为20℃，在35℃的温度下生长缓慢甚至不生长；氧化酶接触阳性，能够分解淀粉，利用葡萄糖和半乳糖，利用硝酸盐、柠檬酸盐和丙二酸盐，其特点在于能够用于禾谷丝核菌、小麦赤霉、稻瘟病菌、尖孢镰刀菌和黄瓜灰霉病菌的生物防治，对小麦、水稻、生菜和黄瓜病害有良好的防治效果，并能够促进其苗期生长发育。具体内容如下：在本专利技术中，以筛选适宜于低温环境下作物病害拮抗菌为目的，从黑龙江溶洞洞穴中采集土壤，分离纯化得到细菌。根据体外拮抗活性测定，筛选出了一批对小麦病害具有抑制作用的细菌，本专利技术所涉及的生防菌株经鉴定为Pseudochrobactrumkiredjianiae。对该菌株进行抑菌活性测定，结果表明，该菌株及其发酵液对禾谷丝核菌、小麦赤霉、稻瘟病菌、尖孢镰刀菌和黄瓜灰霉病菌等病原菌有一定的拮抗效果。利用该生防菌株进行不同作物的防病促生实验，结果表明，该菌株可显著防治禾谷丝核菌和尖孢镰刀菌并促进作物的苗期生长，可作为生防菌剂用于作物病害防治。本专利技术的有益效果如下：针对高山、高纬地区，尤其是我国北方地区等这样特殊的低温环境，中温生防微生物存活率较低、生防能力较差，生防效果不理想，本专利技术创新性地提供了一种适合于低温气候条件并能够有效防治小麦和生菜病害同时可以促进作物生长的生防菌PseudochrobactrumkiredjianiaeA4。利用该菌株获得的生防菌剂对作物主要病原菌的防治效果稳定，适用性强，可显著提高作物发芽率和苗期株高、鲜重和干重，对禾谷丝核菌、小麦赤霉、稻瘟病菌、尖孢镰刀菌和黄瓜灰霉病菌的生长抑制效果分别为51.6％、48.9％、10.4％、41.8％和37.2％，该菌可作为生防菌剂使用，不仅可以减少化学农药的用量，减轻环境污染，同时还可以增加农民经济收入，并具有良好的生态效益和社会效益。附图说明图1为菌株A4在不同温度下的生长曲线；图2-A为小麦叶片中PPO的酶活；图2-B为小麦叶片中POD的酶活。具体实施方式为了更好地理解本专利技术，下面通过具体实施例对专利技术作进一步详述，但是本专利技术并不局限于此。实施例1生防菌株A4的分离、纯化和筛选(1)土壤微生物的分离、纯化和保存将从洞穴中采取的土壤样品各称取10g，加入到100mL无菌水中，再加入适量的玻璃珠震荡30min，静置30min后吸取上清液1mL加入到9mL无菌水中，进行梯度稀释至10-6浓度。将上述稀释液各吸取100μL分别均匀涂布到PDA、NA和高氏一号培养基上，冷却后倒置于13℃培养箱中培养。3-7天后挑取单菌落保存斜面上纯化待测，长期保存用甘油管(甘油含量为20％)置于-80℃中低温冷冻保存。(2)生防菌株A4的筛选采用平板对峙法检测低温菌的抗菌性，在营养琼脂平板上进行禾谷丝核菌、小麦赤霉、稻瘟病菌、尖孢镰刀菌和黄瓜灰霉病菌的拮抗试验。真菌在PDA培养基上生长并保存。通过低温菌A4拮抗病原真菌的生长与对照组病原真菌的生长之间的差异来确定低温菌A4的拮抗效果。菌落生长抑制率(％)＝[对照真菌菌落直径-A4抑制的真菌菌落直径]/对照真菌菌落直径×100。抑菌实验结果如表1所示，测定结果表明菌株A4对几种病原菌均有一定的抑菌效果，且菌株A4的发酵液抑制效果更好。表1菌株A4对病原菌的抑制效果处理禾谷丝核菌小麦赤霉稻瘟病菌尖孢镰刀菌黄瓜灰霉病菌A422.3±4本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于作物病害防治的假苍白杆菌A4，其特征在于该菌株为假苍白杆菌(Pseudochrobactrum sp.)，2013年1月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.7175，命名为假苍白杆菌Pseudochrobactrum A4。
【技术特征摘要】
1.一种用于作物病害防治的假苍白杆菌A4，其特征在于该菌株为假苍白杆菌(Pseudochrobactrumsp.)，2013年1月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNo.7175，命名为假苍白杆菌PseudochrobactrumA4。2.根据权利要求1所述的一种生防菌株A4，其特征在于，菌体细胞呈短杆棒，直径大于1μm，革兰氏阳性，运动，在营养琼脂平板上菌落呈现乳白色，不透明，表面光滑。3.根据权利要求1所述的一种生防菌株A4，其最适生长温度为20℃，超过35℃基本不生长。4.如权利要求1所述的假苍白杆菌A4，其作物防病特征在于，可作为广谱生防菌应用，尤其是...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘红，秦有才，付玉明，
申请(专利权)人：北京航空航天大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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