一种检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了含两个抗猪圆环病毒2型单克隆抗体、两个抗猪瘟病毒单克隆抗体和/或两个抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的检测试剂盒，该试剂盒可用于非诊断目的猪圆环病毒2型抗原、猪瘟病毒抗原和/或高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原同时检测中的应用，并且同时检测两种或三种病毒的试剂盒的检测灵敏度高于单独检测病毒的，避免了假阳性结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种检测试剂盒及其应用。
技术介绍
猪圆环病毒2型(Porcinecircovirus2type，PCV2)可引发一系列猪圆环病毒病包括断奶仔猪多系统衰竭综合征(PostweaningMultisystcmicWastingSyndrome，PMWS)、仔猪A2型先天震颤(A2CT)、猪繁殖障碍、猪皮炎肾炎综合征、增生性坏死性肺炎和呼吸道疾病综合征，特别是PMWS的主要病原。PMWS主要侵害6-8周龄的仔猪，发病率一般为10％-20％，病死率高达50％-100％，并能造成免疫抑制降低抗病力；成年猪一般为隐性感染，不表现任何症状，但可以传染给仔猪。这些疾病的广泛流行严重影响了养猪业的发展，给许多国家和地区带来了巨大的损失。猪瘟病毒(Classicalswinefevervirus，CSFV)又称经典猪瘟或古典猪瘟，家猪和野猪是猪瘟病毒唯一的自然宿主，可引发猪瘟。其中，猪瘟是一种急性、热性、高度接触性传染病，可表现为急性、慢性、非典型或母猪繁殖障碍的病程，被世界动物卫生组织OIE列为A类疫病，在我国也被列为I类动物传染病。高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HighlypathogenicPorcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,HP-PRRSV)引发的高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)于2006年在我国大规模爆发，之后在越南、老挝等国家爆发，以高热、高发病率、高死亡率、较低的低治愈率为主要临床特征，给养猪业造成了极其严重的打击。随着规模化猪场的增加，猪疫病的种类也不断增加，旧的疫病没有消灭，新的疫病不断出现，并且随着病毒株的变异使猪的疫病日益呈现复杂化和严重化趋势。PCV2、CSFV、HP-PRRSV均能不同程度的导致妊娠母猪的繁殖障碍，并且经常混合感染，引起母猪流产、胚胎死亡、胎儿畸形、胎儿木乃伊化及不孕等，在猪群中具有传播快、胚胎致死率高、流行范围广、传播途径多、病原体顽固等特点，每年给养猪业造成了巨大损失。因此，亟需研发能实现PCV2、CSFV、HP-PRRSV的检测方法。目前，检测这几种病毒的方法包括病毒分离鉴定，但操作过程繁琐、耗时过长；PCR或基因芯片检测，但需要专门的仪器和专业的操作人员，这些方法均不适合基层或现场快速检测。因而，亟需研制一种能简单、快速、准确、同时检测这几种病毒的方法。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种检测试剂盒，该试剂盒可简单、快速、灵敏度高并同时检测出至少两种病毒。本专利技术涉及一种检测试剂盒，其中，所述试剂盒包括有效量的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体PCV2-McAB1、PCV2-McAB2，以及用于检测猪圆环病毒2型抗原抗体反应的检测试剂；有效量的抗猪瘟病毒单克隆抗体CSFV-McAB3、CSFV-McAB4，以及用于检测猪瘟病毒抗原抗体反应的检测试剂；和/或有效量的抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体PRRSV-McAB5、PRRSV-McAB6，以及用于检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原抗体反应的检测试剂；其中，所述单克隆抗体PCV2-McAB1为抗猪圆环病毒2型单克隆抗体2F8或3G12，所述单克隆抗体PCV2-McAB2重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo.2和/或轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo.4；所述单克隆抗体PCV2-McAB1固定在支持介质上，所述单克隆抗体PCV2-McAB2溶解于反应液中；所述单克隆抗体CSFV-McAB3、CSFV-McAB4能同时与猪瘟病毒产生抗原抗体结合反应，所述单克隆抗体CSFV-McAB3固定在支持介质上，所述单克隆抗体CSFV-McAB4溶解于反应液中；所述单克隆抗体PRRSV-McAB5、PRRSV-McAB6能同时与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒产生抗原抗体结合反应，所述单克隆抗体PRRSV-McAB5固定在支持介质上，所述单克隆抗体PRRSV-McAB6溶解于反应液中。本专利技术还涉及一种试剂盒，其中，所述试剂盒包括有效量的所述单克隆抗体PCV2-McAB1、PCV2-McAB2，以及用于检测猪圆环病毒2型抗原抗体反应的检测试剂；有效量的所述单克隆抗体CSFV-McAB3、CSFV-McAB4，以及用于检测猪瘟病毒抗原抗体反应的检测试剂；和/或与有效量的所述单克隆抗体PRRSV-McAB5、PRRSV-McAB6，以及用于检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原抗体反应的检测试剂；其用于检测抗原抗体反应的检测试剂为胶体金。本专利技术还涉及一种试剂盒，其中，所述试剂盒包括有效量的所述单克隆抗体PCV2-McAB1、PCV2-McAB2，以及用于检测猪圆环病毒2型抗原抗体反应的检测试剂；有效量的所述单克隆抗体CSFV-McAB3、CSFV-McAB4，以及用于检测猪瘟病毒抗原抗体反应的检测试剂；和/或与有效量的所述单克隆抗体PRRSV-McAB5、PRRSV-McAB6，以及用于检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原抗体反应的检测试剂；其用于检测抗原抗体反应的检测试剂为酶-底物。本专利技术还涉及所述试剂盒在用于非诊断目的的猪圆环病毒2型抗原、猪瘟病毒抗原和/或高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原检测中的应用。本专利技术所提供的试剂盒可用于非诊断目的的猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和/或高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒同时检测中的应用，简单、快速并且灵敏度高。附图说明图1为单克隆抗体3H11的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定图，其中泳道M为蛋白Marker；泳道1、2均为单克隆抗体3H11，包括上端的重链和下端的轻链。图2为酶免疫层析检测试纸条的侧面示意图，图中：1-硝酸纤维素膜，2-酶标垫，3-底物垫，4-吸水垫，5-展开液垫，6-检测线，7-质控线，8-底物缓冲液槽，9-底物缓冲液，10-支撑物，11-检测样品；图2A为检测猪圆环病毒2型、猪瘟病毒或高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒时的检测试纸条的侧向示意图；图2B为检测猪圆环病毒2型、猪瘟病毒和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒时的检测试纸条的侧向示意图。具体实施方式本专利技术涉及一种检测试剂盒，其中，所述试剂盒包括有效量的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体PCV2-McAB1、PCV2-McAB2，以及用于检测猪圆环病毒2型抗原抗体反应的检测试剂；有效量的抗猪瘟病毒单克隆抗体CSFV-McAB3、CSFV-McAB4，以及用于检测猪瘟病毒抗原抗体反应的检测试剂；和/或有效量的抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒单克本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种试剂盒，所述试剂盒包括有效量的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体PCV2‑McAB1、PCV2‑McAB2，以及用于检测猪圆环病毒2型抗原抗体反应的检测试剂；有效量的抗猪瘟病毒单克隆抗体CSFV‑McAB3、CSFV‑McAB4，以及用于检测猪瘟病毒抗原抗体反应的检测试剂；和/或有效量的抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体PRRSV‑McAB5、PRRSV‑McAB6，以及用于检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原抗体反应的检测试剂；其中，所述单克隆抗体PCV2‑McAB1为抗猪圆环病毒2型单克隆抗体2F8或3G12，所述单克隆抗体PCV2‑McAB2重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.2和/或轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID No.4；所述单克隆抗体PCV2‑McAB1固定在支持介质上，所述单克隆抗体PCV2‑McAB2溶解于反应液中；所述单克隆抗体CSFV‑McAB3、CSFV‑McAB4能同时与猪瘟病毒产生抗原抗体结合反应，所述单克隆抗体CSFV‑McAB3固定在支持介质上，所述单克隆抗体CSFV‑McAB4溶解于反应液中；所述单克隆抗体PRRSV‑McAB5、PRRSV‑McAB6能同时与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒产生抗原抗体结合反应，所述单克隆抗体PRRSV‑McAB5固定在支持介质上，所述单克隆抗体PRRSV‑McAB6溶解于反应液中。...

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒，所述试剂盒包括有效量的抗猪圆环病毒2型单克隆抗体PCV2-McAB1、
PCV2-McAB2，以及用于检测猪圆环病毒2型抗原抗体反应的检测试剂；有效量的抗猪瘟病毒
单克隆抗体CSFV-McAB3、CSFV-McAB4，以及用于检测猪瘟病毒抗原抗体反应的检测试剂；
和/或有效量的抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体PRRSV-McAB5、PRRSV-
McAB6，以及用于检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原抗体反应的检测试剂；
其中，所述单克隆抗体PCV2-McAB1为抗猪圆环病毒2型单克隆抗体2F8或3G12，所述单
克隆抗体PCV2-McAB2重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo.2和/或轻链可变区的氨基酸
序列为SEQIDNo.4；所述单克隆抗体PCV2-McAB1固定在支持介质上，所述单克隆抗体
PCV2-McAB2溶解于反应液中；
所述单克隆抗体CSFV-McAB3、CSFV-McAB4能同时与猪瘟病毒产生抗原抗体结合反应，
所述单克隆抗体CSFV-McAB3固定在支持介质上，所述单克隆抗体CSFV-McAB4溶解于反应液
中；
所述单克隆抗体PRRSV-McAB5、PRRSV-McAB6能同时与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病
毒产生抗原抗体结合反应，所述单克隆抗体PRRSV-McAB5固定在支持介质上，所述单克隆抗
体PRRSV-McAB6溶解于反应液中。
2.根据权利要求1所述试剂盒，其中，所述单克隆抗体PCV2-McAB2可以为嵌合单克隆抗
体、改形单克隆抗体、猪源单克隆抗体。
3.根据权利要求1所述试剂盒，其中，所述单克隆抗体PCV2-McAB1、CSFV-McAB3、PRRSV-
McAB5的含量均为25-1000μg/ml，所述单克隆抗体PCV2-McAB2、CSFV-McAB4、PRRSV-McAB6的
含量均为50-2000μg/ml。
4.根据权利要求1所述试剂盒，其中，所述抗猪瘟病毒单克隆抗体CSFV-McAB3、CSFV-
McAB4分别选自下列抗猪瘟病毒单克隆抗体1B9、1D4、3G11、5B6、CSFV7、CSFV14、C7、C9、G9、
G10、4E8、4A4、C3、A1、2D1、3D5、3D7、3F8、4B2、AC9、CF8，且所述单克隆抗体CSFV-McAB3与
CSFV-McAB4不同；
所述抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体PRRSV-McAB5、PRRSV-McAB6分别
选自下列抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体3C3、N35、N36、N51、N4D2、N3H12、
1A2、1D9、1F6、2C7、3B9、3H2、4D2、4E2、2E9、3G2、4E3、B7D3、D5、D7、D10、E9、B5，且所述单克隆
抗体PRRSV-McAB5与PRRSV-McAB6不同。
5.根据权利要求1所述试剂盒，其中，所述单克隆抗体CSFV-McAB3为抗猪瘟病毒单克隆
抗体G10，所述单克隆抗体CSFV-McAB4为抗猪瘟病毒单克隆抗体4E8；所述单克隆抗体
PRRSV-McAB5为抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体B7D3，所述单克隆抗体
PRRSV-McAB6为抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体N4D2。
6.根据权利要求1所述试剂盒，其中，所述支持介质为滴定板、磁颗粒、乳胶颗粒、硝酸
纤维素膜中的任一种，所述用于检测抗原抗体反应的检测试剂可通过酶显色、胶体金、荧
光、化学发光中的任一种方法进行测定。
7.一种试剂盒，其中，所述试剂盒包括有效量的所述单克隆抗体PCV2-McAB1、PCV2-
McAB2，以及用于检测猪圆环病毒2型抗原抗体反应的检测试剂；有效量的抗猪瘟病毒单克
隆抗体CSFV-McAB3、CSFV-McAB4，以及用于检测猪瘟病毒抗原抗体反应的检测试剂；和/或
有效量的抗高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体PRRSV-McAB5、PRRSV-McAB6，以
及用于检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原抗体反应的检测试剂；
其中，所述试剂盒包括胶体金检测试纸条，所述胶体金检测试纸条包括底板，所述底板
具有第一端和第二端，并且沿所述第一端向第二端的方向依次有滤纸、样品垫、金标垫、硝
酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜与金标垫接触或与样品垫、金标垫接触使得抗原<...

【专利技术属性】
技术研发人员：田克恭，韩水仲，
申请(专利权)人：洛阳普莱柯万泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41