抗菌肽融合细胞因子CAMPILs共表达生物制剂的制备和应用制造技术

本发明专利技术公开了抗菌肽融合细胞因子CAMPILs共表达生物制剂的制备和应用。本发明专利技术所提供的抗菌肽融合细胞因子CAMPILs为如下A1)、A2)或A3)：A1)氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质；A2)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。实验证明，本发明专利技术的CAMPILs可以促进淋巴细胞、红细胞和白细胞的增殖，抑制致病微生物的生长，促进非特异性抗体(IgG、IgG1、IgG2a)及疾病特异抗体的分泌，提高动物的免疫能力与存活率。

Preparation and application of antibacterial peptide fusion cytokine CAMPILs co expression biological preparation

The present invention discloses the preparation and application of antibacterial peptide fusion cytokine CAMPILs co expression biological agent. Antibacterial peptide fusion cytokines CAMPILs A1 are provided by the invention), A2) or A3):A1) protein amino acid sequence is sequence 1 in a sequence table; A2) the sequence of the amino acid sequence in a sequence table 1 shown by one or several amino acid substitution and deletion and / or and add the protein with the same function; A3) in A1) or A2) fusion protein N terminal or / and C connection at the end of the label. Experiments show that the invention can promote CAMPILs cells, red blood cells and white blood cell proliferation, inhibit the growth of pathogenic microorganisms, promote non-specific antibody (IgG, IgG1, IgG2a) and disease specific antibody secretion, improve animal immunity and survival rate.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
中，抗菌肽融合细胞因子CAMPILs共表达生物制剂的制备和应用。
技术介绍
养殖业(畜牧业和水产)为大农业的重要组成部份，是我国农业现代化和农村经济发展、社会稳定的重要根基之一，欧美先进国家养殖业均十分发达，都在大农业中占50％以上的比重。它为人类提供肉、奶、蛋、皮毛等高档食品及重要轻纺原料，畜产品是人们优质蛋白质、矿物质、维生素等营养物质的主要来源，其安全性直接关系到人类的身体健康。由于近年来畜产品引起的中毒、疾病传染等恶性事件不断发生，如欧洲的疯牛病、口蹄疫、亚洲的禽流感等，对畜牧生产和食品加工业造成了重大影响。动物疫病已成为影响畜产品安全、人类身体健康和社会稳定及广大农牧民增收致富的重要因素。在我国养殖业中，重要的动物传染性疾病多达30多种；我国现在不仅旧病未消灭，而且新病不断涌现，动物传染病的平均发病率和死亡率高达15－20％和8－10％左右，每年给我国的养殖业造成至少400多亿元的直接经济损失。现代人类正面临病原微生物感染难于控制的严峻挑战。因此高效防治传染性疾病和促进动物健康生长是保障我国养殖业提高经济效益和可持续发展的核心所在，也是保护人民食品卫生和生命健康迫切需要解决的重大科技难题；更是我国畜牧业面对世界范围的大市场，突破“绿色壁垒”，参与国际市场竞争，树立新形象的必然选择。养殖业目前是我国农业和农村经济发展的主要支柱，2014年我国生猪出栏量达到7亿多头，猪肉产量达5670多万吨；四川的养殖业产值占农业总值的54％左右，对农民收入和农村发展影响重大。作为养殖业最重要基础之一的饲料工业也获得了巨大的进步，目前我国2014年猪用配合饲料产量达到8456万吨，浓缩料3000余万吨，添加剂预混合饲料近1000万吨。成为世界第二大生产国，四川饲料工业发展迅速，全省饲料总产量2013年工业饲料总产量达到1067.90万吨，其中猪饲料达到656.62万吨，占61.49％；禽料312.16万吨，占29.23％；水产饲料79.64万吨，占7.46％。现在限制我国养殖业进一步发展和提高经济效益的主要问题是动物疾病的控制、动物产品质量提高和优质廉价饲料的开发生产。我国出口动物产品因检疫和药残质量较低，出口所占比例很低，如猪肉为23万多吨，仅占国际贸易量的4％左右。尤其是四川动物饲料的豆粕等蛋白质原料的90％和玉米等能量饲料原料的70％均依赖外部供给，这就严重制约了我省的畜牧业生产发展和经济效益的提高。因此，如何利用高新生物技术开发高效特色生物饲料，充分利用本地饲料资源，减少饲料中抗生类素添加剂的使用，克服动物产品的药残危害，保障绿色有机动物食品的生产，保护人民群众生命健康安全，已成为当代亟需解决的重大科技和社会经济难题。目前中国畜禽养殖业随着集约化程度提高，畜禽养殖规模和养殖密度日益扩大，迫于控制30多种传染性病原感染传播扩散的压力，尤其是禽流感和呼吸繁殖综合症等烈性病相继循环爆发，使抗生素等药物添加剂在饲料的滥用情况非常严重，畜禽疾病和抗生素饲料添加剂的公害问题已经成为制约我国畜禽养殖业发展水平和经济效益提高的瓶颈。饲料抗生素添加剂的滥用不仅提高饲养成本，也导致病原微生物的耐药性和致病力明显增强，并且畜禽机体因药物毒副作用而削弱健康水平，免疫抗病力显著下降。如此恶性循环，畜禽各种烈性传染疾病频繁发生，难于控制和治疗。而另一方面，药物残留及日益严重的畜禽产品食品安全问题，不仅直接威胁着人类自身的健康，也阻碍了养殖业的发展。动物饲料添加抗生素，长期或不适当使用不仅将诱导病菌出现抗药性，而且在动物产品出现药物残留，造成严重的食品安全隐患，损害人类健康以及招致治疗抗生素的药物失效。欧盟、美国等发达地区06年开始全面限制抗生素作为饲料添加剂。我国也将严格限制饲料添加抗生素。现代养殖业急需开发取代传统抗生素的无残留、无抗性诱导、安全无污染的新型生物饲料及其添加剂。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何提高动物的免疫能力。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了蛋白质在制备提高动物免疫能力产品中的应用；所述蛋白质是一种抗菌肽-融合细胞因子，其名称为CAMPILs，是如下A1)、A2)或A3)：A1)氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质；A2)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了与CAMPILs相关的生物材料在制备提高动物免疫能力产品中的应用；所述生物材料为下述B1)至B10)中的任一种：B1)编码CAMPILs的核酸分子；B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体；B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；B9)含有B1)所述核酸分子的转基因细胞系；B10)含有B2)所述表达盒的转基因细胞系。上述应用中，B1)所述核酸分子可为如下1)或2)或3)所示的核酸分子：1)编码序列是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子；2)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码CAMPILs的cDNA分子或基因组DNA分子；3)在严格条件下与1)限定的核苷酸序列杂交，且编码CAMPILs的cDNA分子或基因组DNA分子。其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。其中，序列2编码序列1所示的CAMPILs。本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本专利技术的编码CAMPILs的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本专利技术分离得到的CAMPILs的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码CAMPILs且具有CAMPILs功能，均是衍生于本专利技术的核苷酸序列并且等同于本专利技术的序列。这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本专利技术的编码序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。上述应用中，所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min；或，0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。上述应用中，B2)所述的含有编码CAMPILs的核酸分子的表达盒(CAMPILs基因表达盒)，是指能够在宿主细胞中表达CAMPILs的DNA，该DNA不但可包括启动CAMPILs基因转录的启动子，还可包括终止CAMPILs基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
蛋白质在制备提高动物免疫能力产品中的应用；所述蛋白质为如下A1)、A2)或A3)：A1)氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质；A2)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。

【技术特征摘要】
1.蛋白质在制备提高动物免疫能力产品中的应用；所述蛋白质为如下A1)、A2)或A3)：A1)氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质；A2)将序列表中序列1所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；A3)在A1)或A2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。2.与权利要求1所述蛋白质相关的生物材料在制备提高动物免疫能力产品中的应用；所述生物材料为下述B1)至B10)中的任一种：B1)编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子；B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体；B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；B9)含有B1)所述核酸分子的转基因细胞系；B10)含有B2)所述表达盒的转基因细胞系。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：B1)所述核酸分子为如下1)或2)或3)所示的核酸分子：1)编码序列是序列表中序列2的cDNA分子或DNA分子；2)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1所述蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子；3)在严格条件下与1)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1所述蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子。4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于：所述重组微生物为将含有编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子的表达盒导入酵母中得到的重组微生物。5.下述C1-C...

【专利技术属性】
技术研发人员：高荣，万小平，陈骞，王泽洲，胡立博，黎凌，陈建林，吕学斌，李江凌，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51