一种甜柿黄酮的制备方法技术

本发明专利技术公开了甜柿黄酮及其制备方法，具体包括提取、富集和精制三个步骤。甜柿叶粉碎，经60~85%乙醇溶液提取，提取液过滤，滤液浓缩得浸膏；浸膏加水搅拌混悬，用碱调节至碱性（pH=9.5~11）后，过滤，用乙酸乙酯萃取，水液再用酸调节至酸性（pH=3~5），再用乙酸乙酯萃取，浓缩，得甜柿黄酮粗品；取甜柿黄酮，加水溶解，通过MCI GEL（75~150μm），先用水洗脱，再用40~60%乙醇洗脱，收集该部分洗脱液，浓缩，干燥，得甜柿黄酮精品。本发明专利技术以甜柿叶为原料深加食用黄酮，纯度高，操作简便，适用于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药及食品
，具体涉及一种从甜柿叶制备甜柿黄酮及其制备方法。
技术介绍
甜柿(DiospyrosKaki)叶富含黄酮类P族维生素，具有软化血管、增加血管通透性、活血化瘀等功效，是制备药物及保健食品的重要原料，还因其具有显著抗菌及抗氧化活性而广泛应用于食品添加剂中。目前柿叶黄酮的制备主要有萃取法、吸附法。两者均只能针对部分杂质的去除，所得总黄酮含量不高。本专利技术采用两种方法结合，利用黄酮酚酸结构性质，在碱性条件下呈离子状态，不能被乙酸乙酯萃取而去除中性、碱性物质，再在酸性条件下由乙酸乙酯萃取得到总黄酮粗品；总黄酮粗品经过MCIGEL树脂吸附，用水洗脱除去大极性有机酸后，再用50%乙醇洗脱下中等极性的黄酮，浓缩干燥得到甜柿黄酮精品。该方法简便易操作，所得总黄酮含量高，应用于医药、保健食品及食品添加剂行业具有巨大经济前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种甜柿黄酮的制备方法。本专利技术通过如下方法实现：所述的甜柿黄酮制备方法是以甜柿叶为原料，经提取、富集、精制得到，具体包括：A、提取：取甜柿叶，粉碎，加入4~7倍量（V/W）60~85%乙醇溶液，加热回流提取2~5次，每次1~3小时，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；B、富集：取柿叶浸膏，加入3~6倍水（V/W），搅拌混悬，加入3%~7%%浸膏量的活性炭，搅拌，静置1~4小时，过滤，滤液用20%氢氧化钠溶液调节至碱性（pH=9.5~11），再用三分之一水液体积量的乙酸乙酯萃取三次，水层用10~20%盐酸溶液调节至酸性（pH=3~4），再用三分之一水液体积量的乙酸乙酯萃取三次，合并此次乙酸乙酯萃取液，浓缩，得甜柿叶黄酮粗品。C、精制：取甜柿叶黄酮粗品，加15~30倍水溶解，用MCIGEL树脂（75~150um）吸附，先用2~5倍柱体积水洗脱，再用3~6倍柱体积40%~60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得甜柿黄酮精品。本专利技术的有益效果在于：本专利技术以甜柿叶为原料制备天然来源黄酮应用于药品、食品等领域，操作简便；制备过程中首先用活性炭吸附去除大部分叶绿素等脂溶性成分，再利用黄酮酚酸性性质，在碱性条件下呈离子态，不能被乙酸乙酯萃取，从而除去碱性及中性成分，再利用其在酸性条件下呈游离态可以被乙酸乙酯萃取，得到粗品黄酮；粗品黄酮通过大孔吸附树脂去除有机酸、单糖等大极性成分，最后用50%乙醇洗脱下黄酮成分，从而选择性获得甜柿叶中的高含量黄酮（研究表明甜柿叶中大极性及小极性黄酮非常微量）。该工艺所得天然黄酮可以满足医药、保健品、食品及化妆品行业原料的需求，具有良好的市场前景和竞争力。具体实施方式为使本领域技术人员详细了解本专利技术的生产工艺和技术效果，下面以具体的生产实例来进一步介绍本专利技术的应用和技术效果，以下实施例为对本专利技术的说明而不是限定。本专利技术所述的方法是以甜柿叶为原料，经提取、富集、精制步骤得到，具体包括：A、提取：取甜柿叶，粉碎，加入4~7倍量（V/W）60~85%乙醇溶液，加热回流提取2~5次，每次1~3小时，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；B、富集：取柿叶浸膏，加入3~6倍水（V/W），搅拌混悬，加入3%~7%浸膏量的活性炭，搅拌，静置1~4小时，过滤，滤液用20%氢氧化钠溶液调节至碱性（pH=9.5~11），再用三分之一水液体积量的乙酸乙酯萃取三次，水层用10~20%盐酸溶液调节至酸性（pH=3~4），再用三分之一水液体积量的乙酸乙酯萃取三次，合并此次乙酸乙酯萃取液，浓缩，得甜柿叶黄酮粗品。C、精制：取甜柿叶黄酮粗品，加15~30倍水溶解，用MCIGEL树脂（75~150um）吸附，先用2~5倍柱体积水洗脱，再用3~6倍柱体积40%~60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得甜柿黄酮精品。本专利技术的方法制备的甜柿黄酮精品含总黄酮不少于75%，且其含山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷不少于10%、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷不少于5%、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷20%。实施例1：取甜柿叶50kg，粉碎成粗粉，加入75%乙醇溶液250L，加热回流提取2次，每次2小时，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏11.2公斤；浸膏中加入67L水，搅拌混悬，加入3.4公斤活性炭，搅拌，静置2小时，过滤，滤液用20%氢氧化钠溶液调节至碱性（pH=10），再用乙酸乙酯萃取三次，每次23L（回收乙酸乙酯，残渣弃去）；水层用15%盐酸溶液调节至酸性（pH=3.5），再用乙酸乙酯萃取三次（每次23L），合并乙酸乙酯萃取液，浓缩，得甜柿叶黄酮粗品2.22kg。取甜柿叶黄酮粗品，加44L水，使溶解，用MCIGEL树脂（75~150μm）吸附（20L），先用42L水洗脱（3倍柱体积），再用50%乙醇70L洗脱（5倍柱体积），收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得甜柿黄酮精品1.78kg。甜柿黄酮含量测定：（1）紫外法测定（UV）测定波长：254nm对照品溶液制备精密称取芦丁对照品适量，加75%乙醇配制成50ug/ml的溶液。供试品溶液制备精密称取本品适量，加75%乙醇配制成50ug/ml的溶液。测定：分别取对照品溶液和供试品溶液测定，即得。结果：本品含黄酮以芦丁计为83.32%。（2）高效液相法测定（HPLC）色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.4%磷酸溶液为流动相A，甲醇为流动性B；按下表中的规定进行梯度洗脱；流速每分钟为1.2ml；检测波长为265nm；柱温30℃。时间程序见下表对照品溶液的制备精密称取山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷适量，加甲醇制成每1ml含45μg、20μg、50μg的混合溶液，即得。供试品溶液制备取本品粉末25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声处理使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取5ml置于50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。测定：分别取对照品溶液和供试品溶液各10ul注入色谱仪，测定即得。结果：本品含山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-半乳糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷分别为13.24%、7.12%、24.55%。实施例2：取甜柿叶60kg，粉碎成粗粉，加入85%乙醇溶液280L，加热回流提取5次，每次3小时，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏13.4公斤；浸膏中加入75L水，搅拌混悬，加入4.1公斤活性炭，搅拌，静置2小时，过滤，滤液用20%氢氧化钠溶液调节至碱性（pH=11），再用乙酸乙酯萃取三次，每次35L（回收乙酸乙酯，残渣弃去）；水层用20%盐酸溶液调节至酸性（pH=4），再用乙酸乙酯萃取三次（每次26L），合并乙酸乙酯萃取液，浓缩，得甜柿叶黄酮粗品2.85kg。取甜柿叶黄酮粗品，加50L水，使溶解，用MCIGEL树脂（75~150μm）吸附（20L），先用60L水洗脱（5倍柱体积），再用60%乙醇84L洗脱（6倍柱体积），收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得甜柿黄酮精品1.67kg。甜柿黄酮含量测定：（1）紫外法测定（UV）测定波长：254nm对照品溶液制备精密称取芦丁对照品适量，加75%乙醇配制成50ug/ml的溶液。供试品溶液制备精密本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甜柿黄酮的制备方法，其特征在于以甜柿叶为原料，经提取、富集、精制步骤得到，具体包括：A、提取：取甜柿叶，粉碎，加入4~7倍量（V/W）60~85%乙醇溶液，加热回流提取2~5次，每次1~3小时，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；B、富集：取柿叶浸膏，加入3~6倍水（V/W），搅拌混悬，加入3%~7%浸膏量的活性炭，搅拌，静置1~4小时，过滤，滤液用20%氢氧化钠溶液调节至碱性（pH=9.5~11），再用三分之一水液体积量的乙酸乙酯萃取三次，水层用10~20%盐酸溶液调节至酸性（pH=3~4），再用三分之一水液体积量的乙酸乙酯萃取三次，合并此次乙酸乙酯萃取液，浓缩，得甜柿叶黄酮粗品;C、精制：取甜柿叶黄酮粗品，加15~30倍水溶解，用MCI GEL树脂（75~150μm）吸附，先用2~5倍柱体积水洗脱，再用3~6倍柱体积40%~60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得甜柿黄酮精品。

【技术特征摘要】
1.一种甜柿黄酮的制备方法，其特征在于以甜柿叶为原料，经提取、富集、精制步骤得到，具体包括：A、提取：取甜柿叶，粉碎，加入4~7倍量（V/W）60~85%乙醇溶液，加热回流提取2~5次，每次1~3小时，提取液过滤，滤液浓缩，得浸膏；B、富集：取柿叶浸膏，加入3~6倍水（V/W），搅拌混悬，加入3%~7%浸膏量的活性炭，搅拌，静置1~4小时，过滤，滤液用20%氢氧化钠溶液调节至碱性（pH=9.5~11），再用三分之一水液体积量的乙酸乙酯萃取三次，水层用10~20%盐酸溶液调节至酸性（pH=3~4），再用三分...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅为云，周志宏，刘录，陈继坤，黄靳翔，高汪荣，
申请(专利权)人：云南中医学院，石林绿汀甜柿产品开发有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53