一种不同血管段活性差异对葛根素血管舒张的方法技术

一种不同血管段活性差异对葛根素血管舒张的方法，SD大鼠，常规方法制备离体血管环标本，分为内皮完整组和内皮组两大组，其中每组都设有远心段、中段和近心段三组。用离体血管灌流大鼠胸主动脉环，血管基础张力定为9.8×10-3N(1g)，测定各组血管环张力及葛根素pEC50。内皮完整组分别加入L-NAME与葛根素（浴槽终浓度为10-4mol•L-1）共同孵育，测定血管环张力变化，并计算pEC50。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种不同血管段活性差异对葛根素血管舒张的方法，具体地说是一种不同血管段活性差异对葛根素血管舒张的方法。
技术介绍
目前公知的葛根素（Puerarin，Pue）具有扩血管、降血压、抗心肌缺血等作用。以往研究表明葛根素扩血管机制存在争议，可能与实验条件和动物种属不同有关。
技术实现思路
诊断标准:1.研究对象：A.实验动物：SD大鼠36只，体重250～300g，雌雄兼用，由青龙山动物中心提供。药品：重酒石酸去甲肾上腺素（NoradrenalineBitartrate，NA）购自天津金耀氨基酸有限公司，批号：0803192；苯肾上腺素（Phe），L-硝基精氨酸（L-NAME）购自Fluka，批号：1115878、40705093；氯化乙酰胆碱（Ach）购自AlfaAesar公司，批号：10132497；葛根素，由南京师范大学袁生教授实验室提供；溶于50%丙二醇进行实验。试剂：K-H液：NaCl118.0mM，KCl4.7mM，NaHCO325.0mM，KH2PO41.2mM，MgSO41.2mM，CaCl22.5mM，glucose11.0mM。均为普通国产分析纯。仪器：MD2000生物信号采集系统购自南京医科大学。B.实验方法；不同种属动物胸主动脉环制备：20%乌拉坦（给药计量1g/kg）麻醉，给药量为0.6ml/100g。取正常大鼠胸主动脉，置于预冷以100%O2饱和的K-H液中，去除血管周围结缔组织，制备成3～4mm的血管环，并悬挂于盛有预先以95%CO2混合气体的K-H液的5ml浴皿中，下段用钢丝钩固定住，上段与张力换能器相连，用MD2000生物信号采集系统记录张力Emax。浴皿中持续通入气体，保持（37±0.5）的恒温，给予不同前负荷，15min换1次缓冲液，平衡60min，加入NA（浴槽终浓度10-6mol·L-1）预收缩2次，用K-H液洗脱至基线后进行下列实验。去内皮组以机械法去除内皮。血管内皮活性的检验：用Phe（浴槽终浓度10-6mol·L-1）处理动脉环使其收缩至平台，加入Ach（浴槽终浓度10-5mol·L-1）动脉环舒张至平台，检验内皮完整性，舒张活性＞70%为内皮完整；舒张活性＜20%则认为内皮去除。葛根素对苯肾上腺素引起的收缩的影响：随机选取大鼠胸主动脉环，分为去内皮组、内皮完整组、溶剂对照及正常对照组，葛根素用Phe（浴槽终浓度10-6mol·L-1）处理动脉环使其收缩至平台，加入葛根素（浴槽终浓度10-7～10-4mol·L-1）动脉环舒张至平台，记算舒张百分数。胸主动脉环的区域差异性：将大鼠的胸主动脉从近心段开始剪成6段，编号1～6，取1、3、6分为作为近心段、中段和远心段，进行实验。分为去内皮组和内皮完整组。两组动脉环分别经预处理后，使溶液中累加苯肾上腺素的浓度依次（10-9～10-5mol·L-1），测定Phe引起大鼠胸主动脉条收缩的改变。后用K-H液洗3次，待主动脉条张力恢复正常并平衡45min后，加入，孵育20min后重复以上过程；或用L-NAME（浴槽终浓度10μmol·L-1）和葛根素（引起最大舒张百分数的浓度）共同孵育20min后，重复以上实验。2.结果:葛根素在10-7～10-4mol•L-1范围内对腹主动脉具有剂量依赖性的舒血管效应，在10-4mol•L-1达到（61.2±3.7）%的最大舒张；去内皮后其舒血管效应可降低（34.6±6.1）%，比较差异有统计学意义（P<0.05）；远心段去内皮及内皮完整血管环Emax均较近心段和中段比较差异有统计学意义（P<0.01）；内皮完整远心段组中，葛根素与L-硝基精氨酸（L-NAME）共同孵育后，Emax显著下降（P<0.05）；而近心段和中段组中，L-NAME与葛根素共同孵育组血管舒张的受抑制程度与葛根素组比较差异无统计学意义（P>0.05）。各组pEC50比较差异均无统计学意义（P>0.05）。技术方案：20%乌拉坦（给药计量1g/kg）麻醉，给药量为0.6ml/100g。取正常大鼠胸主动脉，置于预冷以100%O2饱和的K-H液中，去除血管周围结缔组织，制备成3～4mm的血管环，并悬挂于盛有预先以95%CO2混合气体的K-H液的5ml浴皿中，下段用钢丝钩固定住，上段与张力换能器相连，用MD2000生物信号采集系统记录张力Emax。浴皿中持续通入气体，保持（37±0.5）的恒温，给予不同前负荷，15min换1次缓冲液，平衡60min，加入NA（浴槽终浓度10-6mol·L-1）预收缩2次，用K-H液洗脱至基线后进行下列实验。去内皮组以机械法去除内皮。血管内皮活性的检验：用Phe（浴槽终浓度10-6mol·L-1）处理动脉环使其收缩至平台，加入Ach（浴槽终浓度10-5mol·L-1）动脉环舒张至平台，检验内皮完整性，舒张活性＞70%为内皮完整；舒张活性＜20%则认为内皮去除。随机选取大鼠胸主动脉环，分为去内皮组、内皮完整组、溶剂对照及正常对照组，葛根素用Phe（浴槽终浓度10-6mol·L-1）处理动脉环使其收缩至平台，加入葛根素（浴槽终浓度10-7～10-4mol·L-1）动脉环舒张至平台，记算舒张百分数。胸主动脉环的区域差异性：将大鼠的胸主动脉从近心段开始剪成6段，编号1～6，取1、3、6分为作为近心段、中段和远心段，进行实验。分为去内皮组和内皮完整组。两组动脉环分别经预处理后，使溶液中累加苯肾上腺素的浓度依次（10-9～10-5mol·L-1），测定Phe引起大鼠胸主动脉条收缩的改变。后用K-H液洗3次，待主动脉条张力恢复正常并平衡45min后，加入，孵育20min后重复以上过程；或用L-NAME（浴槽终浓度10μmol·L-1）和葛根素（引起最大舒张百分数的浓度）共同孵育20min后，重复以上实验。专利技术有益效果：葛根素具有内皮依赖性的舒血管效应，但不同血管段中舒张活性存在差异，该作用与NO系统有关。最佳实施方式：进行干预测试。创新之处：本项新型专利技术专利涉及一种不同血管段活性差异对葛根素血管舒张的方法，葛根素不同种属的动物血管环作用也可能有差异。本实验在设计时同时选择了家兔胸主动脉做样本，因为家兔胸主动脉是国内外实验研究中常用的样本，但是实验过程中发现在家兔胸主动脉体外血管环实验中，高浓度乙酰胆碱诱导血管收缩且呈浓度依赖性。这种收缩作用在L-NAME孵育后增强。研究发现家兔胸主动脉环L-NAME孵育后乙酰胆碱诱导的血管收缩作用可能与白三烯C4和D4的合成有关。而后在大鼠胸主动脉条实验中发现，乙酰胆碱能诱导吲哚美辛孵育后用苯肾上腺素预收缩的血管条产生收缩作用，这种收缩作用能够被选择性的半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂阻断，且仅半胱氨酰白三烯1能诱导血管收缩作用。提示家兔胸主动脉环乙酰胆碱诱导的收缩作用与NO合成和释放有关，可能与白三烯类物质合成和释放有关。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种不同血管段活性差异对葛根素血管舒张的方法，SD大鼠，常规方法制备离体血管环标本，分为内皮完整组和内皮组两大组，其中每组都设有远心段、中段和近心段三组;用离体血管灌流大鼠胸主动脉环，血管基础张力定为9.8×10‑3 N(1 g)，测定各组血管环张力及葛根素pEC50;内皮完整组分别加入L‑NAME与葛根素（浴槽终浓度为10‑4 mol•L‑1）共同孵育，测定血管环张力变化，并计算pEC50。

【技术特征摘要】
1.一种不同血管段活性差异对葛根素血管舒张的方法，SD大鼠，常规方法制备离体血管环标本，分为内皮完整组和内皮组两大组，其中每组都设有远心段、中段和近心段三组;用离体血管灌流大鼠胸主动脉环，血管基础...

【专利技术属性】
技术研发人员：县世国，
申请(专利权)人：县世国，
类型：发明
国别省市：甘肃;62