有核红血球的分选方法技术

本发明专利技术提供一种能够可靠地从母血分离源自胎儿的有核红血球的有核红血球的分选方法。本发明专利技术的有核红血球的分选方法具有：候选细胞选择工序，根据细胞的形状选择有核红血球的候选细胞；白血球选择工序，设定包含候选细胞的搜索范围，选择搜索范围内的白血球；有核红血球确定工序，通过候选细胞与白血球之间的血红蛋白的分光特性的比较，确定候选细胞为有核红血球；及分选工序，通过有核红血球确定工序之后的有核红血球中包含的等位基因与在候选细胞选择工序中未被选择的白血球或在白血球选择工序中被选择的白血球中包含的等位基因的比较，将有核红血球分选为源自母体的有核红血球或者源自胎儿的有核红血球。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种有核红血球的分选方法，尤其涉及利用细胞的形状信息、光学信息及基因信息，确定妊娠母体的血液中的源自胎儿的有核红血球的有核红血球的分选方法。
技术介绍
作为产前诊断，一直以来进行通过羊膜穿刺术来查看羊水中的胎儿细胞的染色体的羊水检查。然而，该方法中，作为重大问题被指出存在流产的可能性。另一方面，最近得知胎儿细胞在妊娠母体(以下，还简称为“母体”)的血液中移动，该胎儿细胞与血液一同在母体中循环。因此，若能够利用母血以良好的再现性可靠地分析母血中的胎儿细胞的染色体的DNA(脱氧核糖核酸：deoxyribonucleicacid)，则能够实现流产可能性较低的安全的产前诊断。然而，存在于母体的血液中的胎儿细胞(有核红血球)在母血数mL(1mL＝10-6m3)中仅存在1个左右。可靠地获取如此极少的胎儿细胞(有核红血球)对利用母血进行的产前诊断而言是非常重大的课题。对这种课题，下述专利文献1中，记载有对有核红血球进行浓缩的方法，例如利用密度梯度离心分离去除血浆成分及母亲的红血球成分的技术。并且，非专利文献1、非专利文献2中，记载有利用如下技术获取母血中的作为胎儿细胞的有核红血球的内容，即，利用对白血球表面的蛋白质特异地免疫反应的抗体，通过磁力分离母亲的白血球的技术(MACS法：Magneticactivatedcellsorting)、利用对胎儿血红蛋白的γ链特异地免疫反应的抗体与荧光色素分离胎儿的有核红血球的技术(FACS法：Fluorescenceactivatedcellsorting)等。这些方法是有助于增加血液中的源自胎儿的有核红血球的浓度来提高获取目标细胞的概率的技术。然而，源自胎儿的有核红血球的周围仍然存在源自母体的血液细胞，因此无法可靠地在短时间内获取到源自胎儿的有核红血球。并且，公开有利用光学信息识别细胞种类来获取所需要的细胞的技术。例如，专利文献2中记载有如下方法，即，使老鼠胎儿血红蛋白抗体与涂布于载波片上的包含源自胎儿的有核红血球的血液反应，接着，使其与生物素共轭山羊抗老鼠抗体反应，添加ALP(AlkalinePhosphatase)共轭链霉亲和素，并添加载体蓝色基质，通过该方法从包含源自母体的有核红血球的母体细胞分离源自胎儿的有核红血球。专利文献3中记载有利用血红蛋白的最大吸収波长附近的415nm的波长的光来识别血细胞种类的装置。专利文献4中记载有进行利用生物组织的光学性质的生物信息分析的内容，并记载有利用氧化血红蛋白及还原血红蛋白的光吸收之差来检测组织的供氧状态的装置。专利文献5中记载有以将血液涂布于载波片，并根据形态识别胎儿细胞，分别仅采集胎儿细胞为目的的有核细胞搜索自动化装置。专利文献6中记载有用于分析样品内的生物化学物质、微生物、细胞等的生物化学检查装置。以往技术文献专利文献专利文献1：国际公开WO2012/023298号公报专利文献2：日本特表2002-514304号公报专利文献3：日本特开昭58-115346号公报专利文献4：日本特开2014-14485号公报专利文献5：日本特开2004-248619号公报专利文献6：日本特开2004-361158号公报非专利文献非专利文献1：Y.L.Zhenget.al.“Prenataldiagnosisfrommaternalblood:simultaneousimmunophenotypingandFISHoffetalnucleatederythrocytesisolatedbynegativemagneticcellsorting”JMed.Genet.1993Dec；30(12):1051-1056非专利文献2：Y.L.Zhenget.al.“Flowsortingoffetalerythroblastsusingintracytoplasmicanti-fetalhaemoglobin:preliminaryobservationsonmaternalsamples”PrenatDiagn.1995Oct；15(10):897-905专利技术的概要专利技术要解决的技术课题专利文献2～5中记载的专利技术作为能够分离有核红血球的技术而有效，但是专利文献2中，由于血红蛋白存在于细胞质，因此被细胞膜与外部隔开，无从得知源自胎儿的有核红血球是否以高效产生免疫反应。专利文献3中，在溶液中分离红血球与白血球，但未能充分进行分离，产生红血球与白血球的混入。专利文献4及专利文献5为利用细胞的形状、光学信息来分离细胞的技术，但并未记载分离源自母体及源自胎儿的源自不同个体的有核红血球的内容。因此，仍然存在可靠地分离源自胎儿的有核红血球的课题。并且，除了将有核红血球分离为源自胎儿的有核红血球的情况以外，有时还选择白血球作为有核红血球的候选细胞，因此需要从候选细胞分离红血球与白血球。本专利技术是鉴于这种情况而完成的，其目的在于提供一种能够可靠地从母血分离源自胎儿的有核红血球的有核红血球的分选方法。用于解决技术课题的手段为了实现所述目的，本专利技术提供一种分选方法，其具有：候选细胞选择工序，根据细胞的形状选择有核红血球的候选细胞；白血球选择工序，设定包含候选细胞的搜索范围，选择搜索范围内的白血球；有核红血球确定工序，通过候选细胞与白血球之间的血红蛋白的分光特性的比较，确定候选细胞为有核红血球；及分选工序，通过有核红血球确定工序之后的有核红血球中包含的等位基因与在候选细胞选择工序中未被选择的白血球或在白血球选择工序中被选择的白血球中包含的等位基因的比较，将有核红血球分选为源自母体的有核红血球或者源自胎儿的有核红血球。根据本专利技术的有核红血球的分选方法，通过选择有核红血球的候选细胞，将包含该有核红血球的候选细胞的范围设定为搜索范围，并搜索该搜索范围内的白血球，进行候选细胞与白血球的比较，由此能够进行候选细胞是否为有核红血球的判断。以往，作为候选细胞，无法防止白血球的混入时，有时候选细胞全部为源自白血球的细胞。此时，确认基因信息，若确认到不存在有核红血球尤其是源自胎儿的有核红血球，则不得不再次从候选细胞的分选重新进行，低效且花费时间。根据上述有核红血球的分选方法，通过有核红血球确定工序确定候选细胞为有核红血球，候选细胞中没有源自白血球的细胞的混入，因此能够更快且以更低的成本更可靠地在下一工序中确定源自胎儿的有核红血球。并且，分选工序中，比较有核红血球确定工序之后的有核红血球与分选工序之前的工序中已知的白血球之间的等位基因。白血球为源自母体的血液成分，因此能够将具有与白血球不同的等位基因的有核红血球分选为源自胎儿的有核红血球，并将具有与白血球大致相同的等位基因的有核红血球分选为源自母体的有核红血球。为了实现所述目的，本专利技术提供一种有核红血球的分选方法，其具有：候选细胞选择工序，根据细胞的形状选择有核红血球的候选细胞；白血球选择工序，设定包含候选细胞的搜索范围，选择搜索范围内的白血球；有核红血球确定工序，通过候选细胞与白血球之间的血红蛋白的分光特性的比较，确定候选细胞为有核红血球；及分选工序，通过确认是否存在有核红血球确定工序之后的有核红血球中包含的Y染色体，将有核红血球分选为源自母体的有核红血球或者源自胎儿的有核红血球。根据本专利技术的有核红血球的分选方法，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种有核红血球的分选方法，其具有：候选细胞选择工序，根据细胞的形状选择有核红血球的候选细胞；白血球选择工序，设定包含所述候选细胞的搜索范围，选择所述搜索范围内的白血球；有核红血球确定工序，通过所述候选细胞与所述白血球之间的血红蛋白的分光特性的比较，确定所述候选细胞为有核红血球；及分选工序，通过所述有核红血球确定工序之后的有核红血球中包含的等位基因与在所述候选细胞选择工序中未被选择的白血球或在所述白血球选择工序中被选择的白血球中包含的等位基因的比较，将所述有核红血球分选为源自母体的有核红血球或者源自胎儿的有核红血球。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.05 JP 2014-1593461.一种有核红血球的分选方法，其具有：候选细胞选择工序，根据细胞的形状选择有核红血球的候选细胞；白血球选择工序，设定包含所述候选细胞的搜索范围，选择所述搜索范围内的白血球；有核红血球确定工序，通过所述候选细胞与所述白血球之间的血红蛋白的分光特性的比较，确定所述候选细胞为有核红血球；及分选工序，通过所述有核红血球确定工序之后的有核红血球中包含的等位基因与在所述候选细胞选择工序中未被选择的白血球或在所述白血球选择工序中被选择的白血球中包含的等位基因的比较，将所述有核红血球分选为源自母体的有核红血球或者源自胎儿的有核红血球。2.一种有核红血球的分选方法，其具有：候选细胞选择工序，根据细胞的形状选择有核红血球的候选细胞；白血球选择工序，设定包含所述候选细胞的搜索范围，选择所述搜索范围内的白血球；有核红血球确定工序，通过所述候选细胞与所述白血球之间的血红蛋白的分光特性的比较，确定所述候选细胞为有核红血球；及分选工序，通过确认所述有核红血球确定工序之后的有核红血球中包含的Y染色体是否存在，将所述有核红血球分选为源自母体的有核红血球或者源自胎儿的有核红血球。3.根据权利要求1或2所述的有核红血球的分选方法，其中，所述搜索范围为从所述候选细胞根...

【专利技术属性】
技术研发人员：石井靖幸，松原兼太，福井真一郎，
申请(专利权)人：富士胶片株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP