一种猪链球菌2型XD株及应用制造技术

本发明专利技术涉及动物疫苗制备技术领域，公开了一种猪链球菌2型XD株及应用。所述的猪链球菌2型为猪链球菌2型（Streptococcus suis serotype 2）XD株，保藏编号为：CCTCC NO：M2016573，该猪链球菌2型XD株为自然弱毒菌株，与大多数猪链球菌2型流行菌株毒力基因表型一致，对猪无致病力、免疫原性好等特点，同时提供了SS2‑XD株的稀释剂，能够提升动物机体免疫能力，更能有效预防猪链球菌2型疾病的发生。通过大量临床试验证据表明，本发明专利技术的活疫苗对控制猪链球菌病起到积极作用，具有早期预防，诱导黏膜免疫、细胞免疫等特点。对临床上经常发生猪链球菌病的预防具有明显优势。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于疫苗制备
，具体为一种猪链球菌2型XD株及应用。
技术介绍
猪链球菌2型(Streptococcussuisserotype2，S.suis2)是一种重要的人畜共患病病原体，可以引起猪发生脑膜炎、败血症、关节炎等症状，病死率高达40％，如与猪呼吸与繁殖综合征并发，死亡率更高，即使病后能够存活的猪，其生长缓慢，料肉比增加，给养猪业带来极大的经济损失，故该菌对全球的养猪生产是一个潜在的威胁。猪链球菌2型可以通过伤口、消化道感染人，1998年和2005年分别在我国江苏和四川发生猪链球菌病的暴发，并且均发生人感染死亡的病例，引起人们的高度关注。目前针对猪链球菌病，尚无适用人群的疫苗，所以预防猪发生猪链球菌病，不仅仅是对猪的保护，更是对人的一种保障。目前对于猪链球菌病的防控主要依赖于猪场的综合管理、菌苗的免疫、药物预防等。而现在由于大量耐药菌株的出现，药物治疗及药物预防的效果急剧下降。所以疫苗免疫是猪链球菌病防控的关键，目前市场上猪链球菌病疫苗包括灭活单苗和灭活多价苗，灭活疫苗是将细菌通过甲醛灭活处理获得的全菌体死疫苗，灭活疫苗优点是生产方便、稳定、易保存；但是灭活苗存在较多的缺陷：1)灭活疫苗接种后在动物体内不能繁殖，因此免疫剂量较大，而且一般要加入免疫佐剂来增强其免疫效果；2)灭活疫苗保护期也相对较短，往往1次免疫不能产生较强的免疫保护效果，仅仅是“初始化”免疫系统，必须进行第二次加强免疫才能产生较强的免疫保护；3)灭活疫苗需要多次免疫、免疫剂量大并且免疫部位易出现损伤。然而，减毒活疫苗的优点是成本低，接种剂量少，且免疫保护期长，同时，活疫苗可有效刺激机体产生良好的体液免疫和细胞免疫，具有很广阔的应用前景。开发弱毒疫苗是控制该疾病的有效策略之一，但目前弱毒疫苗研发方面暂无突破，因此开发一种弱毒疫苗具有积极意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种猪链球菌2型XD株，该菌株具有致病性低、免疫原性好等特点，所述菌株已于2016年10月18日送至中国典型培养物保藏中心保藏，分类命名：猪链球菌2型(Streptococcussuisserotype2)XD株，保藏编号为：CCTCCNO：M2016573，地址：中国武汉武汉大学。本专利技术的另一个目的在于提供一种适用于猪链球菌2型XD株的冻干保护剂。本专利技术另一个目的在于提供了一种适用于猪链球菌2型XD株疫苗稀释液佐剂。本专利技术还有一个目的在于提供了一种猪链球菌2型XD株在制备疫苗中的应用。为了达到上述目的，本专利技术采取以下技术措施：一种猪链球菌2型XD株(本专利技术或称为SS2-XD株)，是申请人从湖北、湖南、四川、浙江、江苏、广东等省市100多株临床分离毒株中经过筛选得到，所述菌株已于2016年10月18日送至中国典型培养物保藏中心保藏，分类命名：猪链球菌2型(Streptococcussuisserotype2)XD株，保藏编号：CCTCCNO：M2016573，地址：中国武汉武汉大学。猪链球菌2型XD株生物学特性鉴定如下：猪链球菌2型XD株形态学特性：对营养需求较高，在基础琼脂平皿上生长较差，37℃温箱培养20小时以上可见针尖大小菌落。在TSA平皿(含5％新生牛血清)上生长良好，37℃温箱培养12小时即见针尖大小菌落。SS2-XD株形成的菌落呈灰色、半透明、湿润，透光45°可观察菌落现浅蓝色荧光。在绵羊鲜血琼脂平板上形成的菌落周围可见β溶血环。SS2-XD株接种缓冲肉汤培养基与TSB培养基(含5％新生牛血清)中培养6至8小时可见明显一致混浊，偶见沉淀于瓶底。新鲜培养物玻片固定后进行革兰氏染色，镜检结果为革兰氏阳性，个体呈圆球状或卵圆形，多见短链或长链排列，少见单个或双个排列(图1)。一种适用于猪链球菌2型XD株的冻干保护剂，每100ml冻干保护剂中包括：YEASTEXTRACT0.2～2g，谷氨酸钠0.1～1g、赖氨酸0.1～1g、山梨醇0.5～5g、蔗糖2～10g、TSB0.1～2g、水解明胶1～5g，其余为去离子水。以上所述方案中，优选的：每100ml冻干保护剂中包括：YEASTEXTRACT1g，谷氨酸钠0.5g、赖氨酸0.5g、山梨醇0.5g、蔗糖4g、TSB1g、水解明胶2g，其余为去离子水。一种适用于猪链球菌2型XD株疫苗稀释液佐剂，每1L疫苗稀释液佐剂包括：左旋咪唑5～30g，β-葡聚糖0.01～0.1L，Summit-PolyLiquid0.1～0.4L，其余为去离子水。以上所述方案中，优选的，每1L稀释液佐剂中，包括β-葡聚糖0.05L，左旋咪唑含量为10g，Summit-PolyLiquid0.15L，其余为去离子水。一种猪链球菌2型XD株在制备疫苗中的应用，包括利用该菌株作为主要成分制备成单苗；或该菌株作为有效成分之一与其他抗原制备成联苗。本专利技术涉及细菌活疫苗及其适用于该疫苗的专用稀释液佐剂，尤其向猪提供宽泛、安全和有效保护免遭猪链球菌所感染。本专利技术涉及包含细菌(例如，减毒活细菌)的免疫原或疫苗组合物。这些细菌可以在组合物中是灭活的，但是可能更有利的是活菌。本专利技术还涉及用于制备和/或配制这类组合物的方法；例如，合适的可兽用或可药用载体、赋形剂、稀释剂或媒介物和/或佐剂和/或稳定剂混合。针对哺乳动物作为目标物种的组合物剂量体积，例如，基于细菌抗原的猪用组合物的剂量体积，通常在约0.4至约4.0ml之间。最佳免疫剂量为2.0ml/头份(5.0×108CFU/头份)。可以在终末免疫后约4周通过用猪链球菌2型强毒菌株攻击动物如猪类动物，来检验疫苗的效力。可以通过IM或SC注射、喷雾、鼻内、眼内、气管内和/或经口方式攻击动物。可以在攻击之前和之后采集来自血清、关节、肺/或脑的样品对其猪链球菌特异性抗体和带毒量的存在进行分析。本领域技术人员应当理解，本文的公开内容通过示例方式提供并且本专利技术不限于此。从本文中的公开内容和本领域知识，在不进行任何过多实验的情况下，技术人员可以确定施用次数、施用途径和用于每种注射方案的剂量。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：1.SS2-XD株是自然弱毒株，分离于健康猪的肺组织，对多种实验动物均无致病力，且对仔猪不造成病理损伤。2.SS2-XD株活疫苗能快速有效持续刺激机体产生抗体，使机体应答同时产生细胞免疫和体液免疫，通过大量临床试验证据表明本专利技术的活疫苗对控制猪链球菌病起到积极作用，具有早期预防，诱导黏膜免疫、细胞免疫等特点。对临床上经常发生链球菌病的预防具有明显优势。3.与灭活疫苗相比，接种剂量少、免疫后吸收更完全，在接种部位几乎不会引起炎症反应，不会对机体造成影响。4.与灭活疫苗相比，生产成本更低。附图说明图1为SS2-XD株革兰氏染色镜检图片。400×镜检，SS2-XD株新鲜培养菌液革兰氏染色结果呈阳性；个体呈圆球状或卵圆形，多见短链或长链排列，少见单个或双个排列。图2为SS2-XD株gdh与cps2J基因PCR鉴定图；其中M：为DL2000plusmarker；2和4：为SS2-XD株；3和5为：参考菌株A7；1与6：阴性对照H2O。图3为培养基的pH值随时间变化的规律示意图。图4为生长曲线(OD600nm值)。图5为生长曲线(活菌数CFU)。图6为免疫后仔猪平均抗体消长规律。具本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪链球菌2型，其特征在于，所述的猪链球菌2型为猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)XD株，保藏编号为：CCTCC NO：M2016573。

【技术特征摘要】
1.一种猪链球菌2型，其特征在于，所述的猪链球菌2型为猪链球菌2型(Streptococcussuisserotype2)XD株，保藏编号为：CCTCCNO：M2016573。2.一种适用于权利要求1所述的猪链球菌2型的冻干保护剂，每100ml冻干保护剂中包括：YEASTEXTRACT0.2～2g，谷氨酸钠0.1～1g、赖氨酸0.1～1g、山梨醇0.5～5g、蔗糖2～10g、TSB0.1～2g、水解明胶1～5g，其余为去离子水。3.根据权利要求2所述的冻干保护剂，其特征在于：每100g冻干保护剂中包括：YEASTEXTRACT1g，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐高原，陈波，周明光，陈章表，金建云，
申请(专利权)人：武汉科前生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42