一种与旁路途径相关的CFH抗体制造技术

本发明专利技术公开了一种与旁路途径相关的CFH抗体，所述抗体为全人源的CFH单克隆抗体TRN1005，该抗体能够特异性的结合抗原CFH。本发明专利技术提供了包含所述抗体的药物及其在增生、炎症或免疫相关的疾病或病症中的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞免疫领域，涉及一种与旁路途径相关的CFH抗体，具体的涉及一种CFH全人源的单克隆抗体TRN1005。
技术介绍
补体系统是抵抗微生物感染的先天免疫的重要成分，含有多种血浆和膜结合型的蛋白质。补体广泛参与机体抗微生物防御反应以及免疫调节，也可介导免疫病理的损伤性反应，是体内具有重要生物学意义的效应系统和效应放大系统。补体因子H是一种重要的补体调节物质，它决定补体C3b的命运，不论是在血管内或在细胞表面，控制C3转化酶的生成和稳定性。此外它还具有补体调控以外的功能，可以作为黏附蛋白，成为细胞整合素受体CR3(CD11b/CD18)的配体，显示趋化活性。另外，某些癌细胞通过表达补体因子H从而逃逸补体介导的细胞杀伤。补体因子H(CFH)分子量150kD，由20个SCRs结构域(短的一致重复片段)组成，而每个SCR由大约60个氨基酸组成，形成球状结构，含有四个保守的半胱氨酸残基(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)，在Ⅰ～Ⅲ和Ⅱ～Ⅳ间形成二硫键。其存在多个与配体如C3b、肝素/糖氨聚糖相互作用的结构域：CFH至少有3个与C3b结合的部位，位于SCR1-4，5-8，20；3个与肝素结合的部位，位于SCR7，5-12，20(ZipfelPF，2001,27(3):191-199)；提示了这个血浆蛋白功能的复杂性。CFH是一个调节蛋白，它能够通过阻止补体介导的细胞裂解的旁路激活途径保护宿主避免遭受攻击和损毁。CFH可以通过几种机制阻止补体C3b沉积在细胞表面。C3b沉积能够启动细胞溶膜攻击复合体的形成来介导细胞溶解。所以，CFH阻止C3b沉积，保护细胞不被溶解。肿瘤细胞利用CFH的这种保护作用来逃避补体系统的攻击。最近的研究表明补体旁路在几种动物疾病模型的发病机理中起着重要的作用。I/R后肾脏内的补体激活基本仅受旁路途径的介导(Thurman)，同时旁路途径在关节炎的进展中起着关键作用。尤其令人吃惊的是，已表明缺失旁路途径的小鼠在狼疮肾炎MRL/lpr模型中不会患肾炎(Watanabe)，并且不会引起抗磷脂介导的胎儿丢失(Girardi)。PCT公开的公布文本WO01/47963描述了来自外寄生水蛭的多肽，它在体外抑制补体激活的旁路途径，并且它对通过经典途径的补体激活基本没有影响。已表明这些肽结合D因子，但是，未说明这些多肽在体内应用。随着基因工程技术的发展，基因工程抗体的研制为人们提供了解决问题的新思路。已经有研究完成了人源抗CFH抗体片段Fab和scFv的表达，只是这些小分子抗体还无法完全替代自体抗体在体内综合作用，包括抗体依赖的细胞毒性作用和抗体介导的细胞裂解作用等，因此完整的全人源抗CFH抗体的生产成为了进一步研究的目标。
技术实现思路
本专利技术的目的之一，提供一种与旁路途径CFH相关的全人源的单克隆抗体。本专利技术的目的之二，提供一种治疗增生、炎症或免疫相关的疾病或病症的药物组合物和手段。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了一种全人源小分子单克隆抗体TRN1005，所述抗体包括轻链CDR1-3和重链CDR1-3氨基酸序列；所述轻链CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:6所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。进一步，所述抗体轻链的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。进一步，所述抗体轻链的氨基酸序列如SEQIDNO：5所示。进一步，所述抗体分子选自具有全长重链和轻链的完整抗体分子或其片段。本专利技术的抗体分子可包括具有全长重链和轻链的完全抗体分子或其结合片段并且可以是但不限于Fab、经修饰的Fab、Fab'、经修饰的Fab'、F(ab')2、Fv、单结构域抗体(例如VH或VL或VHH)、scFv、二价、三价或四价抗体、双特异性-scFv、双抗体、三抗体、四抗体和以上任何抗体的表位结合片段。本专利技术提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸编码上面所述的抗体的重链和/或轻链。本专利技术提供了一种克隆或表达载体，所述克隆或表达载体包含一种或多种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列编码上述所述的抗体的重链和/或轻链。本专利技术的多核苷酸序列可包括例如通过化学处理产生的合成DNA、cDNA、基因组DNA或其任何组合。本专利技术还提供了包含一种或多种克隆或表达载体的宿主细胞，所述克隆或表达载体包含一种或多种编码本专利技术所述单克隆抗体的多核苷酸序列。本专利技术公开的抗体和片段从宿主细胞以良好水平表达。因此，抗体和/或结合片段的性质适合用于商业规模的表达。本专利技术提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含上面所述的单克隆抗体和药学上可接受的载体。本专利技术提供了上面所述的单克隆抗体或药物组合物的用途，其用于制备治疗增生、炎症或免疫相关的疾病或病症的药物。本专利技术提供了上面所述的单克隆抗体或药物组合物的用途，其用于制备抑制增生、炎症或免疫相关的疾病或病症的CFH活性的药物。在本专利技术中，抗体分子可以是药学或诊断组合物中的唯一活性成分。本专利技术的优点和有益效果：本专利技术提供了一种全新的全人源的CFH抗体，该抗体具有特异性强、亲和力、稳定性好、无免疫原性、完全人源性蛋白结构的特点。本专利技术提供了一种治疗增生、炎症或免疫相关的疾病或病症的药物组合物，所述药物组合物满足了相关疾病的治疗和预防的需求，尤其对补体H因子引起的疾病或病症的预防和治疗具有显著的功效。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1是SDS-PAGE鉴定表达纯化后的TRN1005抗体图；图2是抗体TRN1005结合位点验证试验图；图3是利用BiaCore检测TRN1005抗体的亲和活性图。具体的实施方式本专利技术利用单细胞RT-PCR与抗体筛选平台直接从有抗体的病人体内单个B细胞分离出来高亲和力人抗CFH抗体，并构建了该抗体的表达载体，表达了高纯度的全人源抗体蛋白。制备具CFH抗原结合活性的全人源化抗体，以满足研究需求，并为相关病症的治疗与预防大量提供这类抑制剂。本专利技术中，术语“抗体”包括保持与抗原特异性结合的任何同种型的抗体或免疫球蛋白、抗体片段，包括但不限于Fab、Fv、scFv和Fd片段、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体(scAb)、单结构域抗体(dAb)、单结构域重链抗体、单结构域轻链抗体、双特异性抗体、多特异性抗体，和包含抗体和非抗体蛋白的抗原结合(在本文中也被称为抗原结合)部分的融合蛋白。抗体可例如用放射性同位素、产生可检测产物的酶、荧光蛋白等可检测地标记。抗体可进一步缀合至其它部分，诸如特异性结合对的成员，例如生物素(生物素-抗生物素蛋白特异性结合对的成员)等。抗体还可结合至固体支撑物，包括(但不限于)聚苯乙烯板或珠粒等。所述术语还涵盖Fab'、Fv、F(ab')2和或保持与抗原特异性结合的其它抗体片段，和单克隆抗体。如本文所用，单克隆抗体是由一组相同的细胞产生的抗体，其全部是由单细胞通过重复的细胞复制而产生。也就是说，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与旁路途径CFH相关的全人源单克隆抗体TRN1005，其特征在于，所述抗体包括轻链CDR1‑3和重链CDR1‑3氨基酸序列；所述轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

【技术特征摘要】
1.一种与旁路途径CFH相关的全人源单克隆抗体TRN1005，其特征在于，所述抗体包括轻链CDR1-3和重链CDR1-3氨基酸序列；所述轻链CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示；所述轻链CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示；所述轻链CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示；所述重链CDR1的氨基酸序列如SEQIDNO:6所示；所述重链CDR2的氨基酸序列如SEQIDNO:7所示；所述重链CDR3的氨基酸序列如SEQIDNO:8所示。2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述抗体轻链的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。3.根据权利要求2所述的抗体，其特征在于，所述抗体轻链的氨基酸序列如SEQIDNO：5所示。4.根据权利要求1-3任一项所述的抗体，其特征在于，所述抗体分子选自具有全长重链和轻链的完整抗体分子或...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖化新，王月明，袁晓辉，昝利鹏，刘彤，吴昌文，张远旭，
申请(专利权)人：广州泰诺迪生物科技有限公司，珠海泰诺麦博生物技术有限公司，暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44