一种黄金甲组织培养的培养基及方法技术

本发明专利技术涉及组织培养技术领域，特别涉及一种黄金甲组织培养的培养基及方法。该培养基包括初代培养基、第一继代培养基、第二继代培养基和生根培养基。采用本发明专利技术提供的培养基配方可显著提高黄金甲的繁殖系数，缩短繁殖周期，提高成活率，为黄金甲的产业化生产提供了更加有效的途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及组织培养
，特别涉及一种黄金甲组织培养的培养基及方法。
技术介绍
黄金甲为卫矛科卫矛属北海道黄杨(Euonymusjaponicuscv.\CuZhi\)的变异品种，其叶片两边金黄，中间翠绿，因此得名。黄金甲株型紧凑，色泽鲜艳，并继承了北海道黄杨的耐寒抗性好的特点，是北方缺乏的彩色不落叶植物。黄金甲直立性强、萌蘖能力强、移栽成活率高，容易养护，可培养为绿篱、圆球、绿墙等各种造型使用，是具有很大市场潜力的园林树种。目前，黄金甲主要靠嫁接进行繁殖，费时费力，而且繁殖系数较低，成活率较低，远不能满足国内对种苗的需求。组织培养技术是在无菌的条件下将活器官、组织或细胞置于培养基内，并放在适宜的环境中，进行连续培养而成的细胞、组织或个体。这种技术已广泛应用于农业和生物、医药的研究。近年来，组织培养技术逐渐应用到园林树种的繁殖方面，并开始代替传统的叶插、分株等繁殖方法。但针对黄金甲的组织培养技术还未有报道，目前只有关于北海道黄杨的组织培养技术的报道。周鑫于2004年在《北海道黄杨组织培养育苗的研究》一文中报道了一种适合北海道黄杨的组培技术，具体为：外殖体灭菌采用0.1％升汞加吐温-80灭菌8～10min，无菌水冲洗6～8次；促进休眠芽萌发的培养基以MS为基本培养基，细胞分裂素可以用BA或KT，浓度为1.0mg/L，生长素可以用NAA或IBA，浓度为0.1mg/L；扩大繁殖培养基以MS为基本培养基，细胞分裂素用BA或KT，浓度0.1mg/L，生物素NAA或IBA，浓度在0.5～1.0mg/L。专利号为CN102293150A的专利公开了一种金叶黄杨的组织培养方法，包括：将小芽基部切成1cm长接种于小芽诱导培养基MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L上，培养1个月后切下带芽愈伤组织放入增殖培养基MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L进行培养，将丛生芽放入壮苗培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L上进行培养，待长至2～3cm转接入生根培养基。但上述两种组织培养方法并不适合黄金甲的培养，采用上述两种方法进行黄金甲的组织培养，其繁殖系数和成活率较低。因此需要研发一种适合黄金甲的组培快繁技术。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种黄金甲组织培养的培养基及方法。采用本专利技术提供的培养基配方可显著提高黄金甲的繁殖系数，缩短繁殖周期，提高成活率，为黄金甲的产业化生产提供了更加有效的途径。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种黄金甲组织培养的培养基，包括初代培养基、第一继代培养基、第二继代培养基和生根培养基；初代培养基为：含有0.05～0.2mg/LKT、0.06～0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、12～18mL/L大蒜汁和8～11mL/L椰汁的WPM培养基，pH值为5.9；第一继代培养基为：含有0.5～2mg/LKT、0.01～0.1mg/LTDZ、0.02～0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、50mL～150mL/L番茄汁和15mL～25mL/L香蕉汁的WPM培养基，pH值为5.9；第二继代培养基为：含有0.1～0.7mg/LKT、0.05～0.2mg/LGA3、0.04～0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂的WPM培养基，pH值为5.9；生根培养基为：含有5～7g/L琼脂和15～25g/L蔗糖的WPM培养基，pH值为5.9。采用本专利技术提供的培养基配方可显著提高黄金甲的繁殖系数，缩短繁殖周期，提高成活率，为黄金甲的产业化生产提供了更加有效的途径。优选地，初代培养基为：含有0.1mg/LKT、0.1mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、15mL/L大蒜汁和10mL/L椰汁的WPM培养基；第一继代培养基为：含有0.5mg/LKT、0.01mg/LTDZ、0.02mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、100mL/L番茄汁和20mL/L香蕉汁的WPM培养基；第二继代培养基为：含有0.3mg/LKT、0.05mg/LGA3、0.04mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂的WPM培养基；生根培养基为：含有7g/L琼脂和20g/L蔗糖的WPM培养基。本专利技术中采用的大蒜汁、椰汁、番茄汁和香蕉汁采用过滤除菌的方式进行除菌，既保持了天然添加物的生物活性，又能够有效除菌。本专利技术还提供了一种黄金甲的组织培养方法，包括如下步骤：将黄金甲外植体接种到初代培养基进行初代培养，得到芽眼开始萌动的外植体；将芽眼开始萌动的外植体转接到第一继代培养基进行第一次继代培养，得到芽眼分化完成的外植体；将芽眼分化完成的外植体转接到第二继代培养基进行第二次继代培养，得到丛生芽；将丛生芽转接到生根培养基进行生根培养，得到组培苗；初代培养基为：含有0.05～0.2mg/LKT、0.06～0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、12～18mL/L大蒜汁和8～11mL/L椰汁的WPM培养基，pH值为5.9；第一继代培养基为：含有0.5～2mg/LKT、0.01～0.1mg/LTDZ、0.02～0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、50mL～150mL/L番茄汁和15mL～25mL/L香蕉汁的WPM培养基，pH值为5.9；第二继代培养基为：含有0.1～0.7mg/LKT、0.05～0.2mg/LGA3、0.04～0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂的WPM培养基，pH值为5.9；生根培养基为：含有5～7g/L琼脂和15～25g/L蔗糖的WPM培养基，pH值为5.9。本专利技术解决了传统的繁殖方法中存在的繁殖系数低、成活率低的问题，利用组培技术进行黄金甲的快繁，既保持黄金甲的优良性状，又大大提高其繁殖系数，缩短繁殖周期，为黄金甲的产业化生产提供了更加有效的途径。同时，本专利技术首次对黄金甲的取材及消毒方法进行了改进，降低了初代接种的污染率。在本专利技术提供的实施例中，将黄金甲外植体接种到初代培养基进行初代培养之前还包括：采取黄金甲的带芽一年生健康枝条，去掉叶片保留叶柄，进行消毒处理，然后切成有一对芽或一个顶芽的长0.5～1.0cm小段。作为优选，黄金甲的带芽一年生健康枝条的采取时间为每年5～6月。在本专利技术提供的实施例中，消毒处理具体为：将去掉叶片的黄金甲枝条用水和NaClO溶液清洗，然后用酒精和氯化汞溶液消毒，再用水清洗。作为优选，NaClO溶液的质量百分浓度0.1％；酒精的体积百分浓度为75％，酒精消毒的时间为20s；氯化汞溶液的质量百分浓度为0.1％，氯化汞溶液的消毒时间为5min。作为优选，黄金甲组织培养的光照周期为8～12h/d，光照强度为2500～3500lx，培养温度为24～26℃，相对湿度为45％～50％。在本专利技术提供的实施例中，黄金甲组织培养的光照时间12h/d，光照强度3500lx，培养温度为25℃，相对湿度48％，每3d用紫外灯灭菌30min。在本专利技术提供的实施例中，得到组培苗后还包括炼苗的步骤。在本专利技术提供的实施例中，炼苗为：将组培苗打本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种黄金甲组织培养的培养基，其特征在于，包括初代培养基、第一继代培养基、第二继代培养基和生根培养基；所述初代培养基为：含有0.05～0.2mg/L KT、0.06～0.2mg/L NAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、12～18mL/L大蒜汁和8～11mL/L椰汁的WPM培养基，pH值为5.9；所述第一继代培养基为：含有0.5～2mg/L KT、0.01～0.1mg/L TDZ、0.02～0.2mg/L NAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、50mL～150mL/L番茄汁和15mL～25mL/L香蕉汁的WPM培养基，pH值为5.9；所述第二继代培养基为：含有0.1～0.7mg/L KT、0.05～0.2mg/L GA3、0.04～0.2mg/L NAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂的WPM培养基，pH值为5.9；所述生根培养基为：含有5～7g/L琼脂和15～25g/L蔗糖的WPM培养基，pH值为5.9。

【技术特征摘要】
1.一种黄金甲组织培养的培养基，其特征在于，包括初代培养基、第一继代培养基、第二继代培养基和生根培养基；所述初代培养基为：含有0.05～0.2mg/LKT、0.06～0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、12～18mL/L大蒜汁和8～11mL/L椰汁的WPM培养基，pH值为5.9；所述第一继代培养基为：含有0.5～2mg/LKT、0.01～0.1mg/LTDZ、0.02～0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、50mL～150mL/L番茄汁和15mL～25mL/L香蕉汁的WPM培养基，pH值为5.9；所述第二继代培养基为：含有0.1～0.7mg/LKT、0.05～0.2mg/LGA3、0.04～0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂的WPM培养基，pH值为5.9；所述生根培养基为：含有5～7g/L琼脂和15～25g/L蔗糖的WPM培养基，pH值为5.9。2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述初代培养基为：含有0.1mg/LKT、0.1mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、15mL/L大蒜汁和10mL/L椰汁的WPM培养基；所述第一继代培养基为：含有0.5mg/LKT、0.01mg/LTDZ、0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、100mL/L番茄汁和20mL/L香蕉汁的WPM培养基；所述第二继代培养基为：含有0.3mg/LKT、0.05mg/LGA3、0.04mg/LNAA、30g/L蔗糖、7g/L琼脂的WPM培养基；所述生根培养基为：含有7g/L琼脂和20g/L蔗糖的WPM培养基。3.一种黄金甲的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：将黄金甲外植体接种到初代培养基进行初代培养，得到芽眼开始萌动的外植体；将芽眼开始萌动的外植体转接到第一继代培养基进行第一次继代培养，得到芽眼分化完成的外植体；将芽眼分化完成的外植体转接到第二继代培养基进行第二次继代培养，得到丛生芽；将丛生芽转接到生根培养基进行生根培养，得到组培苗；所述初代培养基为：含有0.05～0.2mg/LKT、0.06～0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖、7...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丹，张茂，何甜甜，郭冠男，孟伟芳，
申请(专利权)人：河南红枫种苗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41