升麻葛根汤组合物指纹图谱的建立方法及指纹图谱技术

本发明专利技术公开了升麻葛根汤组合物的质量控制方法，属于中药分析领域。本发明专利技术方法采用高效液相色谱法建立指纹图谱，色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流速0.9ml/min～1.1ml/min；柱温：25℃～35℃；检测仪器采用紫外检测器，检测波长210nm～250nm；理论塔板数以葛根素峰计不低于4000；参照物溶液为大豆苷的甲醇溶液；流动相为乙腈‑0.1％磷酸溶液为系统，按如下顺序进行梯度洗脱：本发明专利技术的指纹图谱全面反映出升麻葛根汤的质量信息，从而能够达到更加全面、有效地控制升麻葛根汤制剂产品质量的目的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于重要分析领域，具体涉及升麻葛根汤组合物的指纹图谱。
技术介绍
升麻葛根汤组合物由升麻、葛根、白芍、炙甘草四味中药组成，具有辛凉解肌，透疹解毒的功效；现代临床除治疗麻疹外，亦用于治疗疱疹，水痘，急性痢疾、肝炎等病症，另外本方作为小儿的沿用方，对感冒高热发冷的老人、小儿疗效甚佳。为了更全面、有效的控制本中药组合物的质量控制水平，和国际接轨，让临床用药安全及疗效更加有所保证，需要对本中药组合物采用更为先进的质量控制手段。由于中药及其复方制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，但现行的显微鉴别、理化鉴别和含量测定等方法都不足以解决这一问题。中药指纹图谱是指某些中药材或中药剖剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学，成分的种类与数量进而对药品质量进行整体描述和评价。所以，中药指纹图谱已经成为目前国际上较为先进的中药质量控制手段。美国食品药品管理局(FDA)植物药产品工业指南、WHO草药评价指南中均指出，如果草药制剂的活性成分不能鉴别，可以通过指纹图谱(fingerprintspectrum)证明产品质量的一致。欧共体在草药质量指南注释中也指出，草药及其制剂是以整体作为有效物质，因此，草药的质量稳定性仅靠测定己知的有效成分是不够的，应该通过指纹图谱显示其所含的各种成分。印度草药典、英国草药典、德国药用植物协会、加拿大药用及芳香植物协会等，也接受用指纹图谱来保证有效成分未明的草药产品质量的一致性。目前国家药品监督管理局对中药注射剂己要求具有相关的指纹图谱，对提高中药注射剂的质量起到了关键作用，但对其他剂型的中药尚没有强制性要求。中药指纹图谱包括中药化学指纹图谱、蛋白指纹图谱、DNA指纹图谱及生物效应指纹图谱等。通常说的指纹图谱是指化学指纹图谱，是中药材、中药提取物或中成药经适当处理后，采用一定分析手段，得到的能够标示该中药主要化学成分特性的色谱或光谱。中药化学指纹图谱可以分为中药光谱指纹图谱，如红外光谱(IR)、紫外光谱(UV)、X射线衍射图谱等；色谱指纹图谱，如薄层色谱(TLC)、气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳图谱(CE)等；波谱指纹图谱，如质谱(MS)、核磁共振波谱(NMR)等；DNA指纹图图谱；以及采用多种现代分析仪器联用得到的多维多息特征谱(characteristicfingerprintofmuhrdimensionandmuhrdata)，如HPLC/MS、HPLC/Ms/MS、GC/MS、CE/MS等。中药指纹图谱研究方法虽然较多，但色谱学方法应是主流方法，尤其是TLC，HPLC和GC色谱技术，已经成为大家所公认的三种常规的分析手段，是目前研究中药指纹图谱应优先考虑的方法。中药指纹图谱有两个作用：一是通过指纹图谱的特征性，能有效鉴别中药材的真伪或产地：二是通过指纹图谱主要特征峰的面积或比例的制定，能有效控制产品的质量，确保产品质量的相对一致。中药指纹图谱的制作和应用常包括：(1)采集具有代表性的中药样品，采取适当的方法制备供试品溶液，并选用适当的标准标准品(参照物)，进行分析方法的优选；(2)根据确定的分析方法，对一定批次的中药样品进干了分离分析，将所得的多批次数据进行处理，得到标准指纹图谱；(3)将样品按照与标准指纹图谱制作相同的方法进行样品处理、分离分析后，将所得的指纹图谱与标准指纹图谱进行相似度比较，一般相以度达到80％以上即可视为该样品为合格。相似度的计算和评价方法通常采用相关系数与相合系数或夹角余弦法。我国中南大学、浙江大学等单位提据以上方法，编制了相应的计算机软件用于完成相假度评价，其中以国家药典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”应用较多。因此采用指纹图谱技术全面反映组合物的整体特征，并进一步与其活性相关联，对于完善目前的质量控制方法，保证临床用药的安全有效是十分必要的。目前，关于升麻葛根汤组合物的指纹图谱的研究尚未有文献公开报道更没有建立升麻葛根汤的指纹图谱，从质量控制方面，有关升麻葛根汤组合物的标准指纹图谱亦没有报道。
技术实现思路
因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中的没有关于升麻葛根汤组合物的指纹图谱以及建立升麻葛根汤组合物的指纹图谱的文献报道的缺陷，从而提供一种升麻葛根汤组合物指纹图谱的建立方法及指纹图谱。为此，本专利技术提供如下技术方案：升麻葛根汤组合物的指纹图谱的建立方法包括采用高效液相色谱法建立升麻葛根汤组合物指纹图谱，色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流速0.9ml/min～1.1ml/min；柱温：25℃～35℃；检测仪器采用紫外检测器，指纹图谱的检测波长210nm～250nm；理论塔板数以葛根素峰计不低于4000；参照物溶液为大豆苷的甲醇溶液；流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液为系统，按如下顺序进行梯度洗脱：所述升麻葛根汤组合物是通过如下两种方法制备得到：(1)分别称取升麻2g、葛根3g、白芍2g、炙甘草2g饮片，剪切成约2mm～8mm左右的粗颗粒，置于2L煎药砂锅中，加300ml水，浸泡30分钟，加盖煎煮，于220V的电压下加热至沸腾10分钟，于170V电压下保持微沸至药液约100ml，滤除药渣，即得第一升麻葛根汤组合物；或(2)按照重量份计称取如下饮片升麻666.7g，葛根1000g，白芍666.7g，炙甘草666.7g，切制成粒度2mm～8mm的粗颗粒，加水12倍量水，煎煮30min，滤过，然后将滤液减压浓缩至稠膏，加麦芽糊精，干燥，混匀，加硬脂酸镁，干压颗粒，制成1000g，即得第二升麻葛根汤组合物。所述指纹图谱包括21个共有峰：1号峰相对保留时间RRT为8.944，2号峰相对保留时间RRT为14.111，3号峰相对保留时间RRT为20.583，4号峰相对保留时间RRT为24.036，5号峰相对保留时间RRT为27.333，6号峰相对保留时间RRT为32.806，7号峰相对保留时间RRT为37.305，8号峰相对保留时间RRT为40.061，9号峰相对保留时间RRT为42.859，10号峰相对保留时间RRT为45.699，11号峰相对保留时间RRT为54.817，S峰相对保留时间RRT为61.159，13号峰相对保留时间RRT为67.543，14号峰相对保留时间RRT为70.776，15号峰相对保留时间RRT为73.526，16号峰相对保留时间RRT为80.076，17号峰相对保留时间RRT为83.260，18号峰相对保留时间RRT为86.766，19号峰相对保留时间RRT为91.200，20号峰相对保留时间RRT为98.200，21号峰相对保留时间RRT为111.034，其中，12号S峰是参照物的色谱峰。用于高效液相色谱测定的供试品溶液采用水作为溶剂，参照物溶液采用甲醇作溶剂。参照物溶液的制备过程为：取大豆苷对照品适量，加甲醇配制成1ml甲醇含大豆苷200μg的参照物溶液。供试品溶液的制备过程为：取第一升麻葛根汤组合物5ml，离心，取上清液，即得；或取第二升麻葛根汤组合物1.5g，置50ml容量瓶中，加本文档来自技高网...

【技术保护点】
升麻葛根汤组合物的指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括采用高效液相色谱法建立升麻葛根汤组合物指纹图谱，色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流速0.9ml/min～1.1ml/min；柱温：25℃～35℃；检测仪器采用紫外检测器，指纹图谱的检测波长210nm～250nm；理论塔板数以葛根素峰计不低于4000；参照物溶液为大豆苷的甲醇溶液；流动相为乙腈‑0.1％磷酸溶液为系统，按如下顺序进行梯度洗脱：

【技术特征摘要】
1.升麻葛根汤组合物的指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括采用高效液相色谱法建立升麻葛根汤组合物指纹图谱，色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流速0.9ml/min～1.1ml/min；柱温：25℃～35℃；检测仪器采用紫外检测器，指纹图谱的检测波长210nm～250nm；理论塔板数以葛根素峰计不低于4000；参照物溶液为大豆苷的甲醇溶液；流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液为系统，按如下顺序进行梯度洗脱：2.根据权利要求1所述的指纹图谱的建立方法，所述升麻葛根汤组合物是通过如下两种方法制备得到：(1)分别称取升麻2g、葛根3g、白芍2g、炙甘草2g饮片，剪切成约2mm～8mm左右的粗颗粒，置于2L煎药砂锅中，加300ml水，浸泡30分钟，加盖煎煮，于220V的电压下加热至沸腾10分钟，于170V电压下保持微沸至药液约100ml，滤除药渣，即得第一升麻葛根汤组合物；或(2)按照重量份计称取如下饮片升麻666.7g，葛根1000g，白芍666.7g，炙甘草666.7g，切制成粒度2mm～8mm的粗颗粒，加水12倍量水，煎煮30min，滤过，然后将滤液减压浓缩至稠膏，加麦芽糊精，干燥，混匀，加硬脂酸镁，干压颗粒，制成1000g，即得第二升麻葛根汤组合物。3.根据权利要求2所述的指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述指纹图谱包括21个共有峰：1号峰相对保留时间RRT为8.944，2号峰相对保留时间RRT为14.111，3号峰相对保留时间RRT为20.583，4号峰相对保留时间RRT为24.036，5号峰相对保留时间RRT为27.333，6号峰相对保留时间RRT为32.806，7号峰相对保留时间RRT为37.305，8号峰相对保留时间RRT为40.061，9号峰相对保留时间RRT为42.859，10号峰相对保留时间RRT为45.699，11号峰相对保留时间RRT为54.817，S峰相对保留时间RRT为61.159，13号峰相对保留时间RRT为67.543，14号峰相对保留时间RRT为70.776，15号峰相对保留时间RRT为73.526，16号峰相对保留时间RRT为80.076，17号峰相对保留时间RRT为83.260，18号峰相对保留时间RRT为86.766，19号峰相对保留时间RRT为91.200，20号峰相对保留时间RRT为98.200，21号峰相对保留时间RRT为111.034，其中，12号S峰是参照物的色谱峰。4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈世彬，覃旭，陈周全，刘志刚，谭沛，马鹏岗，姚少姿，刘志东，
申请(专利权)人：华润三九医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44