确定的组合基因修饰的T细胞产品制造技术

本文描述的本发明专利技术的方面涉及制备包括用于人治疗的嵌合抗原受体的基因修饰的T细胞的方法。在一些供选择的方案中，该方法使用从混合的T细胞群，如外周血或单采血液成分术来源的单核细胞，选择和/或分离CD4+和/或CD8+T细胞。一旦选择/分离，则激活、基因修饰和增殖CD4+和/或CD8+T细胞，优选在分隔或分离的培养物中，在一种或多种细胞因子存在下，所述细胞因子支持细胞的存活、移入和/或增殖，以及优选促进或诱导细胞表面受体如CD62L、CD28和/或CD27的保留。本文还包括通过向有需要的受试者施用一种或多种类型的基因工程T细胞或包括如本文描述制备的基因工程T细胞的组合物治疗、抑制、减轻或消除癌症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求2014年4月10日提交的美国临时专利申请号61/977,751、2014年4月30日提交的美国临时专利申请号61/986,479、2014年10月2日提交的美国临时专利申请号62/058,973、2014年12月5日提交的美国临时专利申请号62/088,363、2014年12月9日提交的美国临时专利申请号62/089,730和2014年12月11日提交的美国临时专利申请号62/090845的优先权的权益。上述申请的全部公开内容特别地通过引用全文并入。序列表的引用本申请连同电子格式的序列表一起提交。序列表提供为2015年3月23日创建的大小为2.92kb的命名为SCRI-090WO_SEQUENCE_LISTING.TXT的文件。电子格式的序列表的信息通过引用全文并入本文。
本专利技术的方面涉及制备含有嵌合抗原受体的基因修饰的T细胞的方法。公开的方法涉及从混合的T细胞群选择和/或分离CD4+和/或CD8+T细胞，然后使所述CD4+和/或CD8+T细胞在一种或多种细胞因子的存在下，在分离的培养物中激活、基因修饰和增殖，所述细胞因子维持细胞的存活、移入和/或增殖以及促进细胞表面受体如CD62L、CD28和/或CD27的保留。
技术介绍
同种异体的造血干细胞移植(HSCT)后，急性成淋巴细胞性白血病(ALL)复发可以发生。因此，许多人相信这样的方法是无效的。人T淋巴细胞的过继转移具有有效治疗许多晚期癌症还有恶性肿瘤的潜力，所述人T淋巴细胞通过基因转移被工程化以表达对存在于肿瘤细胞或恶性B细胞表面上的分子特异性的嵌合抗原受体(CAR)。然而，为了有效并长期持久地治疗，在转移至患者后，施用的包括嵌合抗原受体的T细胞希望地具有高存活率和增殖率。用于治疗的T细胞也希望地适于移入。尽管在本领域具有极大的成就，仍然存在对另外的有效的细胞治疗的需求。
技术实现思路
本文描述的本专利技术的方面包括制备含有用于人治疗的嵌合抗原受体的基因修饰的T细胞的方法。供选择的方案包括使用从混合的T细胞群中选择、富集和/或分离表达CD4+和/或CD8+的T细胞的方法，所述T细胞如源自胸腺细胞的T细胞或源自工程化的前体的T细胞，所述工程化的前体希望地是iPS细胞。一旦选择、富集和/或分离，则使表达CD4+和/或CD8+的T细胞激活、基因修饰并增殖，优选地在分隔的、富集的或分离的培养物中，在一种或多种细胞因子存在下进行激活、基因修饰并增殖，所述细胞因子能被外源地提供给T细胞，例如为除了可以由细胞产生或存在于培养基中的任何细胞因子之外的细胞因子，并且支持、促进、诱导或有助于细胞的存活、移入和/或增殖，以及优选地支持、促进、诱导或有助于保留细胞表面受体，如CD62L、CD28和/或CD27。本文也包括通过将一种或多种类型的基因工程化T细胞或包括如本文描述的基因工程化T细胞的组合物施用于有需要的受试者治疗、抑制、改善或清除癌症的方法。本文描述的本专利技术的某些方面涉及制备具有嵌合抗原受体的基因修饰的T细胞的方法。所述的某些方法，这些方法通过以下步骤来实践：从混合的T细胞群分隔、分离或富集表达CD8+的T细胞群和/或表达CD4+的T细胞群以产生分隔的、分离的或富集的T细胞群，所述T细胞是如源自胸腺细胞的T细胞或源自工程化前体的T细胞，所述工程化前体希望地是iPS细胞；刺激这些分隔的、富集的或分离的T细胞群以产生刺激的表达CD8+的T细胞群和/或表达CD4+的T细胞群；用载体转导刺激的表达CD8+的T细胞群和/或表达CD4+的T细胞群以产生转导的表达CD8+的T细胞群和/或表达CD4+的T细胞群，其中载体编码嵌合抗原受体和标记序列，其中所述标记序列编码细胞表面选择性标记；使转导的表达CD8+的T细胞群和/或表达CD4+的T细胞群与至少一种细胞因子接触，以产生转导的细胞因子刺激的表达CD8+的T细胞群和/或表达CD4+的T细胞群，所述细胞因子能被外源地提供给T细胞，例如为除了可以由细胞产生或存在于培养基中的任何细胞因子以外的细胞因子；通过选择标记序列富集转导的、细胞因子刺激的、表达CD8+的T细胞群和/或表达CD4+的T细胞群，以产生分隔的、富集的或分离的转导的、细胞因子刺激的、表达CD8+的T细胞群和/或表达CD4+的T细胞群；以及增殖分隔的、富集的或分离的、转导的、细胞因子刺激的、表达CD8+的T细胞和/或表达CD4+的T细胞群至少两天，以获得具有嵌合抗体的所述基因修饰的T细胞。在一些供选择的方案中，可以增殖表达CD8+的T细胞和/或表达CD4+的T细胞至少或等于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天或由任意两个前述的时间点限定的时间范围内的任意时间，以获得具有嵌合抗原受体的所述基因修饰的T细胞。在一些供选择的方案中，通过亲和性选择具有存在于CD8和/或CD4上的表位的T细胞，进行从混合的T细胞群分隔或富集CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群。在一些供选择的方案中，通过流式细胞术进行从混合的T细胞群分隔或富集CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群。在一些供选择的方案中，通过免疫磁性选择进行从混合的T细胞群分隔或富集CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群。在一些供选择的方案中，基因修饰的CD8+T细胞和/或CD4+T细胞包括促进、诱导、有助于或提高移入适合性(engraftmentfitness)的至少一种受体。在一些供选择的方案中，至少一种受体是CD45RA、CD45RO、CCR7、CD25、CD127、CD57、CD137、CD27、CD28和/或CD62L。在一些供选择的方案中，至少一种受体是CD27、CD28和/或CD62L。在一些供选择的方案中，通过使CD8+和/或CD4+T细胞与抗体结合支持物如珠或颗粒接触，进行刺激分离的T细胞群。在一些供选择的方案中，抗体结合支持物包括抗TCR、抗CD2、抗CD3、抗CD4和/或抗CD28抗体。在一些供选择的方案中，抗体结合支持物包括抗CD3和/或抗CD28抗体。在一些供选择的方案中，载体进一步包括编码前导序列的第一序列、编码配体结合域的第二序列、编码信号传导域的第三序列和编码选择性标记的第四序列。在一些供选择的方案中，载体进一步包括编码间隔区的序列。在一些供选择的方案中，间隔区包括IgG4铰链。在一些供选择的方案中，载体是病毒载体。在一些供选择的方案中，病毒载体源自猿猴病毒40、腺病毒、腺伴随病毒(AAV)、慢病毒或反转录病毒。在一些供选择的方案中，病毒载体是重组腺病毒、腺伴随病毒、慢病毒或反转录病毒载体。在一些供选择的方案中，病毒载体是慢病毒载体。在一些供选择的方案中，标记序列编码截短的表皮生长因子受体(EGFRt)。在一些供选择的方案中，至少一种细胞因子包括GM-CSF、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18、IL-2和/或IL-21。在一些供选择的方案中，至少一种细胞因子包括IL7、IL-15和/或IL-21，细胞因子的量可以提供为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.3ng/mL、0.4ng/mL、0.5ng/本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备具有嵌合抗原受体的基因修饰的T细胞的方法，包括：从混合的T细胞群分隔或富集表达CD8+的T细胞群和/或表达CD4+的T细胞群，以产生分隔的或富集的T细胞群，所述T细胞是如源自胸腺细胞的T细胞或源自工程化前体的T细胞，所述工程化前体希望地是iPS细胞；刺激所述分隔的或富集的T细胞群，以产生刺激的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群；用载体转导所述刺激的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群，以产生转导的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群，其中所述载体编码嵌合抗原受体和标记序列，其中所述标记序列编码细胞表面选择性标记；使所述转导的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群与至少一种细胞因子接触，如接触1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天或由任意两个前述的时间段限定的范围内的一段时间，以产生转导的、细胞因子刺激的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群，所述细胞因子可以被外源地提供给T细胞，例如为除了可以由细胞产生或存在于培养基中的任何细胞因子以外的细胞因子；通过选择所述标记序列富集所述转导的、细胞因子刺激的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群，以产生富集的、转导的、细胞因子刺激的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群；以及增殖所述富集的、转导的、细胞因子刺激的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群至少1天，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天或由任意两个前述的时间段限定的范围内的一段时间，以获得具有嵌合抗原受体的所述基因修饰的T细胞。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.10 US 61/977,751;2014.04.30 US 61/986,479;1.一种制备具有嵌合抗原受体的基因修饰的T细胞的方法，包括：从混合的T细胞群分隔或富集表达CD8+的T细胞群和/或表达CD4+的T细胞群，以产生分隔的或富集的T细胞群，所述T细胞是如源自胸腺细胞的T细胞或源自工程化前体的T细胞，所述工程化前体希望地是iPS细胞；刺激所述分隔的或富集的T细胞群，以产生刺激的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群；用载体转导所述刺激的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群，以产生转导的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群，其中所述载体编码嵌合抗原受体和标记序列，其中所述标记序列编码细胞表面选择性标记；使所述转导的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群与至少一种细胞因子接触，如接触1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天或由任意两个前述的时间段限定的范围内的一段时间，以产生转导的、细胞因子刺激的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群，所述细胞因子可以被外源地提供给T细胞，例如为除了可以由细胞产生或存在于培养基中的任何细胞因子以外的细胞因子；通过选择所述标记序列富集所述转导的、细胞因子刺激的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群，以产生富集的、转导的、细胞因子刺激的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群；以及增殖所述富集的、转导的、细胞因子刺激的CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群至少1天，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天或由任意两个前述的时间段限定的范围内的一段时间，以获得具有嵌合抗原受体的所述基因修饰的T细胞。2.权利要求1所述的方法，其中，通过亲和性选择具有存在于CD8和/或CD4上的表位的T细胞，进行从混合的T细胞群分隔或富集CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群。3.权利要求1或2所述的方法，其中，通过流式细胞术进行从混合的T细胞群分隔或富集CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群。4.权利要求1或2所述的方法，其中通过免疫磁性选择进行从混合的T细胞群分隔或富集CD8+T细胞群和/或CD4+T细胞群。5.权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述基因修饰的CD8+T细胞和/或CD4+T细胞包括促进、诱导、有助于或提高移入适合性的至少一种受体。6.权利要求5所述的方法，其中，所述至少一种受体是CD45RA、CD45RO、CCR7、CD25、CD127、CD57、CD137、CD27、CD28和/或CD62L。7.权利要求5或6所述的方法，其中，所述至少一种受体是CD27、CD28和/或CD62L。8.权利要求1-7中任一项所述的方法，其中，通过使CD8+T细胞和/或CD4+T细胞与抗体结合支持物如珠或颗粒接触进行刺激分离的T细胞群。9.权利要求8所述的方法，其中，所述抗体结合支持物包括抗TCR、抗CD2、抗CD3、抗CD4和/或抗CD28抗体。10.权利要求8或9所述的方法，其中，所述抗体结合支持物包括抗CD3和/或抗CD28抗体。11.权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述载体进一步包括编码前导序列的第一序列、编码配体结合域的第二序列、编码信号传导域的第三序列和编码选择性标记的第四序列。12.权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，所述载体进一步包括编码间隔区的序列。13.权利要求12所述的方法，其中，所述间隔区包括IgG4铰链。14.权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，所述载体是病毒载体。15.权利要求14所述的方法，其中，所述病毒载体源自猿猴病毒40、腺病毒、腺伴随病毒(AAV)、慢病毒或反转录病毒。16.权利要求14或15所述的方法，其中，所述病毒载体是重组腺病毒、腺伴随病毒、慢病毒或反转录病毒载体。17.权利要求14-16中任一项所述的方法，其中，所述病毒载体是慢病毒载体。18.权利要求1-17中任一项所述的方法，其中，所述标记序列编码截短的表皮生长因子受体(EGFRt)。19.权利要求1-18中任一项所述的方法，其中，所述至少一种细胞因子包括GM-CSF、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18、IL-2和/或IL-21。20.权利要求1-19中任一项所述的方法，其中，所述至少一种细胞因子包括IL7、IL-15和/或IL-21，细胞因子的量可以提供为0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.3ng/mL、0.4ng/mL、0.5ng/mL、0.6ng/mL、0.7ng/mL、0.8ng/mL、0.9ng/mL或1.0ng/mL或由任意两个前述的量限定的范围内的量和/或10U/mL、20U/mL、30U/mL、40U/mL、50U/mL、60U/mL、70U/mL、80U/mL、90U/mL或100U/mL或由任意两个前述的量限定的范围内的量。21.权利要求1-19中任一项所述的方法，其中，所述至少一种细胞因子包括IL-2、IL-15和/或IL-21，其中，细胞因子的量提供为0.5ng/mL和/或50U/mL。22.权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述接触进行1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天或由任意两个这些值限定的范围内的一段时间。23.权利要求1-20或22中任一项所述的方法，其中，用分离的、纯化的、富集的或分隔的CD4+细胞，在CD8+细胞不存在、实质上贫化或所述CD4+细胞富集超过CD8+细胞的情况下进行所述方法。24.权利要求1-19、21或22中任一项所述的方法，其中，用分离的、纯化的、富集的或分隔的CD8+细胞，在CD4+细胞不存在、实质上贫化或所述CD8+细胞富集超过CD4+细胞的情况下进行所述方法。25.权利要求1-20、22或23中任一项所述的方法，其中，所述表达CD4+的T细胞增殖至少1天，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天或由任意两个前述的时间段限定的范围内的一段时间。26.权利要求1-19、21、22或24中任一项所述的方法，其中，所述CD8+T细胞增殖至少1天，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天或由任意两个前述的时间段限定的范围内的一段时间。27.权利要求8-26中任一项所述的方法，其中，所述方法进一步包括移除抗体结合支持物如珠或颗粒。28.权利要求1-27中任一项所述的方法，其中，所述嵌合抗原受体的配体结合域包括抗体或其结合部分。29.权利要求1-28中任一项所述的方法，其中，所述嵌合抗原受体的配体结合域包括单链可变区片段(scFv)或其结合部分。30.权利要求1-29中任一项所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔·C·延森，
申请(专利权)人：西雅图儿童医院DBA西雅图儿童研究所，
类型：发明
国别省市：美国;US