MND启动子嵌合抗原受体制造技术

提供载体组合物，其包含与嵌合抗原受体(CAR)可操作地连接的启动子，所述启动子是骨髓增生性肉瘤病毒增强子负调控区缺失的dl587rev引物结合位点取代的(MND)启动子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请基于35U.S.C.§119(e)要求于2014年4月25日提交的美国临时申请第61/984,561号的权益，将其通过引用整体并入本文。关于序列表的声明与本申请相关的序列表以文本格式提供，代替纸拷贝，并且在此通过引用并入说明书。含有序列表的文本文件的名称是BLBD_027_01WO_ST25.txt。文本文件是27KB，创建于2015年4月24日，并且经EFS-Web以电子方式与说明书文件同时提交。背景
本专利技术涉及用于治疗癌症或肿瘤的改善的组合物和方法。更具体地，本专利技术涉及包含嵌合抗原受体(CAR)的改善的载体，用所述载体进行遗传修饰以表达这些CAR的免疫效应细胞，以及利用这些组合物有效治疗多种癌症或肿瘤。相关领域的描述癌症是遍及全世界的重要健康问题。基于来自2008-2010的比例，今天出生的男性和女性中的40.76％将在其一生中的某一时间被诊断患有某种形式的癌症。20.37％的男性将在其50岁生日至70岁生日患上癌症，对于女性，相比而言比例为15.30％。在2010年1月1日，在美国有大约13,027,914名活着的男性和女性有癌症史--6,078,974名男性和6,948,940名女性。据估计，在2013年，在美国有1,660,290名男性和女性(854,790名男性和805,500女性)将被诊断患有癌症，并且有580,350名男性和女性将死于所有部位的癌症。Howlader等，2013。尽管在癌症的检测、预防和治疗中已经取得了进步，但是普遍成功的治疗策略尚未实现。对不同形式的癌症治疗的应答是混合的。由于毒副作用，治疗癌症的常规方法(包括化疗和放疗)具有有限的实用性。用治疗性抗体进行的免疫疗法也提供了有限的成功，部分原因是不良的药代动力学特性、抗体被血清蛋白酶快速清除和肾小球的滤过、以及有限渗入肿瘤部位和肿瘤细胞上靶抗原的表达水平。由于CART细胞在体内的不良扩增、输注之后细胞的快速消失、以及令人失望的临床活性，试图使用表达嵌合抗原受体(CAR)的遗传修饰的细胞，也具有有限的成功。因此，本领域对用于治疗癌症的在临床上更有效的组合物和方法仍有需求。简要概述本专利技术大体提供用于产生治疗性T细胞的改善的载体组合物。在不同的实施方案中，提供包含与嵌合抗原受体(CAR)可操作地连接的启动子的多核苷酸，所述启动子是骨髓增生性肉瘤病毒增强子负调控区缺失的dl587rev引物结合位点取代的(MND)启动子。在具体实施方案中，CAR包含胞外结构域、跨膜结构域、一个或多个胞内共刺激信号转导结构域以及CD3ζ初级信号转导结构域，所述胞外结构域与选自下述的抗原结合：α叶酸受体、5T4、αvβ6整合素、BCMA、B7-H3、B7-H6、CAIX、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD70、CD79a、CD79b、CD123、CD138、CD171、CEA、CSPG4、EGFR、包括ErbB2(HER2)的EGFR家族、EGFRvIII、EGP2、EGP40、EPCAM、EphA2、EpCAM、FAP、胎儿型AchR、FRα、GD2、GD3、’磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)、HLA-A1+MAGE1、HLA-A2+MAGE1、HLA-A3+MAGE1、HLA-A1+NY-ESO-1、HLA-A2+NY-ESO-1、HLA-A3+NY-ESO-1、IL-11Rα、IL-13Rα2、λ、Lewis-Y、κ、间皮素、Muc1、Muc16、NCAM、NKG2D配体、NY-ESO-1、PRAME、PSCA、PSMA、ROR1、SSX、生存素、TAG72、TEM以及VEGFR2；所述跨膜结构域来源于选自下述的多肽：CD8α，CD4、CD28、CD45、PD1和CD152；所述一个或多个胞内共刺激信号转导结构域选自：CD28、CD54(ICAM)、CD134(OX40)、CD137(41BB)、CD152(CTLA4)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)和CD278(ICOS)。在一些实施方案中，胞外结构域包含与抗原结合的抗体或者抗原结合片段。在具体实施方案中，与κ轻链多肽结合的抗体或抗原结合片段选自：骆驼Ig、IgNAR、Fab片段、Fab’片段、F(ab)’2片段、F(ab)’3片段、Fv、单链Fv抗体(“scFv”)、双-scFv、(scFv)2、微型抗体、双链抗体(diabody)、三链抗体(triabody)、四链抗体(tetrabody)、二硫键稳定性Fv蛋白(“dsFv”)以及单域抗体(sdAb、纳米抗体)。在另外实施方案中，与κ轻链多肽结合的抗体或抗原结合片段为scFv。在某些实施方案中，抗体为人抗体、鼠抗体或人源化抗体。在具体实施方案中，跨膜结构域来源于CD8α。在具体实施方案中，一个或多个共刺激信号转导结构域选自：CD28、CD134和CD137。在一些实施方案中，CAR包含选自CD28、CD134和CD137的两个或者更多个共刺激信号转导结构域。在一些实施方案中，一个或者多个共刺激信号转导结构域为CD28。在具体实施方案中，一个或多个共刺激信号转导结构域为CD134。在某些实施方案中，一个或多个共刺激信号转导结构域为CD137。在具体实施方案中，CAR还包含铰链区多肽。在其它实施方案中，铰链区多肽包含PD1、CD152或CD8α的铰链区。在其它实施方案中，铰链区多肽包含PD1的铰链区。在其它实施方案中，铰链区多肽包含CD152的铰链区。在其它实施方案中，铰链区多肽包含CD8α的铰链区。在一些实施方案中，CAR还包含间隔区。在另外实施方案中，间隔区多肽包含IgG1的CH2和CH3区域。在某些实施方案中，CAR还包含信号肽。在具体实施方案中，信号肽包含IgG1重链信号多肽、CD8α信号多肽或者人GM-CSF受体α信号肽。在一些实施方案中，多核苷酸编码如SEQIDNO：2至3中任一项所述的CAR。在不同的实施方案中，提供载体，所述载体包含编码如在任一前述实施方案中或者任一本文别处考虑的实施方案所考虑的CAR的多核苷酸。在其它实施方案中，载体为表达载体。在另外实施方案中，载体为病毒载体。在具体实施方案中，载体为逆转录病毒载体。在具体实施方案中，载体为慢病毒载体。在另外实施方案中，慢病毒载体选自基本上由下述病毒组成的组：人类免疫缺陷病毒(HIV)；维斯纳-梅迪病毒(VMV)(visna-maedivirus(VMV)virus)；山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)；马传染性贫血病毒(EIAV)；猫免疫缺陷病毒(FIV)；牛免疫缺陷病毒(BIV)；以及猴免疫缺陷病毒(SIV)。在某些实施方案中，CAR还包含左端(5’)逆转录病毒LTR、Psi(Ψ)包装信号、中央多嘌呤段(centralpolypurinetract)/DNA瓣(DNAFlap)(cPPT/FLAP)、逆转录病毒输出元件；与权利要求1至19中任一项所述的CAR可操作地连接的MND启动子；以及右端(3’)逆转录病毒LTR。在另外实施方案中，CAR还包含异源聚腺苷酸化序列。在另外实施方案中，聚腺苷酸化序列为牛生长激素聚腺苷酸化序列或者兔β-球蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
多核苷酸，其包含与嵌合抗原受体(CAR)可操作地连接的启动子，所述启动子是骨髓增生性肉瘤病毒增强子负调控区缺失的dl587rev引物结合位点取代的(MND)启动子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.25 US 61/984,5611.多核苷酸，其包含与嵌合抗原受体(CAR)可操作地连接的启动子，所述启动子是骨髓增生性肉瘤病毒增强子负调控区缺失的dl587rev引物结合位点取代的(MND)启动子。2.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述CAR包含：a)胞外结构域，所述胞外结构域与选自以下的抗原结合：α叶酸受体、5T4、αvβ6整合素、BCMA、B7-H3、B7-H6、CAIX、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD70、CD79a、CD79b、CD123、CD138、CD171、CEA、CSPG4、EGFR、包括ErbB2(HER2)的EGFR家族、EGFRvIII、EGP2、EGP40、EPCAM、EphA2、EpCAM、FAP、胎儿型AchR、FRα、GD2、GD3、’磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)、HLA-A1+MAGE1、HLA-A2+MAGE1、HLA-A3+MAGE1、HLA-A1+NY-ESO-1、HLA-A2+NY-ESO-1、HLA-A3+NY-ESO-1、IL-11Rα、IL-13Rα2、λ、Lewis-Y、κ、间皮素、Muc1、Muc16、NCAM、NKG2D配体、NY-ESO-1、PRAME、PSCA、PSMA、ROR1、SSX、生存素、TAG72、TEM以及VEGFR2；b)跨膜结构域，所述跨膜结构域来源于选自以下的多肽：CD8α、CD4、CD28、CD45、PD1和CD152；c)一个或多个胞内共刺激信号转导结构域，其选自：CD28、CD54(ICAM)、CD134(OX40)、CD137(41BB)、CD152(CTLA4)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)和CD278(ICOS)；以及d)CD3ζ初级信号转导结构域。3.如权利要求2所述的多核苷酸，其中所述胞外结构域包含与所述抗原结合的抗体或者抗原结合片段。4.如权利要求2所述的多核苷酸，其中与κ轻链多肽结合的抗体或者抗原结合片段选自：骆驼Ig、IgNAR、Fab片段、Fab’片段、F(ab)’2片段、F(ab)’3片段、Fv、单链Fv抗体(“scFv”)、双-scFv、(scFv)2、微型抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体、二硫键稳定性Fv蛋白(“dsFv”)以及单域抗体(sdAb，纳米抗体)。5.如权利要求3所述的多核苷酸，其中与κ轻链多肽结合的抗体或抗原结合片段为scFv。6.如权利要求2至4中任一项所述的多核苷酸，其中所述抗体为人抗体、鼠抗体或者人源化抗体。7.如权利要求1至6中任一项所述的多核苷酸，其中所述跨膜结构域来源于CD8α。8.如权利要求1至7中任一项所述的多核苷酸，其中所述一个或多个共刺激信号转导结构域选自：CD28、CD134和CD137。9.如权利要求1至8中任一项所述的多核苷酸，其中所述CAR包含选自CD28、CD134和CD137的两个或更多个共刺激信号转导结构域。10.如权利要求1至8中任一项所述的多核苷酸，其中所述一个或多个共刺激信号转导结构域为CD28。11.如权利要求1至8中任一项所述的多核苷酸，其中所述一个或多个共刺激信号转导结构域为CD134。12.如权利要求1至8中任一项所述的多核苷酸，其中所述一个或多个共刺激信号转导结构域为CD137。13.如权利要求1至12中任一项所述的多核苷酸，其还包含铰链区多肽。14.如权利要求13所述的多核苷酸，其中所述铰链区多肽包含CD8α的铰链区。15.如权利要求1-12中任一项所述的多核苷酸，其还包含间隔区。16.如权利要求15所述的多核苷酸，其中所述间隔区的多肽包含IgG1的CH2区和CH3区。17.如权利要求1至16中任一项所述的多核苷酸，其还包含信号肽。18.如权利要求17所述的多核苷酸，其中所述信号肽包含IgG1重链信号多肽、CD8α信号多肽或者人GM-CSF受体α信号肽。19.如权利要求1所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码如SEQIDNO：2-3中任一项所示的CAR。20.载体，其包含权利要求1至19中任一项所述的多核苷酸。21.如权利要求20所述的载体，其中所述载体为表达载体。22.如权利要求20所述的载体，其中所述载体为病毒载体。23.如权利要求20所述的载体，其中所述载体为逆转录病毒载体。24.如权利要求20所述的载体，其中所述载体为慢病毒载体。25.如权利要求24所述的载体，其中所述慢病毒载体选自基本上由下述组成的组：人类免疫缺陷病毒(HIV)、维斯纳-梅迪病毒(VMV)、山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)、马传染性贫血病毒(EIAV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)、牛免疫缺陷病毒(BIV)和猴免疫缺陷病毒(SIV)。26.如权利要求20至25中任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：理查德·摩根，凯文·弗里德曼，柳秉昱，
申请(专利权)人：蓝鸟生物公司，
类型：发明
国别省市：美国;US