结合LGR5的人源化抗体制造技术

本文公开了用于治疗癌症的人源化抗‑LGR5抗体。本文公开的抗体可以结合LGR5而不破坏LGR5‑RSPO1结合或信号转导，以及可以破坏独立于RSPO1的通过Wnt的LGR5信号转导。还公开了忍受LGR5(例如不破坏LGR5‑RSPO结合或信号转导)的重链和轻链多肽序列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请本申请要求于2014年11月18日提交的美国临时申请第62/081497号和于2014年4月4日提交的美国临时申请第61/975589号的权益，将其内容通过引用整体并入本文。专利
本专利技术总体上涉及癌症生物学领域。更具体地，实施方案涉及针对LGR5的人源化抗体以及此类抗体的用途。若干实施方案涉及针对LGR5的单克隆抗体、人源化抗体或全人抗体，杂交瘤或表达此类抗体的其它细胞系，编码此类抗体的核酸和包含编码此类抗体的核酸的载体，以及用此类抗体阻断癌症干细胞(CSC)生长的方法。序列表的引用将本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表以标题为BIONO10WO_SEQLISTING的文件提供，其创建于2015年4月2日，大小约40Kb。将电子格式的序列表中的信息通过引用整体并入本文。专利技术背景含有富亮氨酸重复的G-蛋白偶联受体5(LGR5)也被称为GPR49/HG38/FEX，其属于与糖蛋白激素受体结构上类似的含有富亮氨酸重复的G-蛋白偶联受体(LGR)/受体蛋白的G-蛋白偶联受体(GPR)蛋白家族。LGR被分为三个亚组：(1)糖蛋白激素受体，其包括促甲状腺激素(TSH)受体、促卵泡激素(FSH)受体和促黄体生成激素(LH)受体；(2)松弛素受体LGR7和LGR8；以及(3)LGR4、LGR5和LGR6。LGR5在包括肠、骨骼肌、胎盘、脑和脊髓的数种组织中表达。专利技术概述本文提供的组合物、方法和试剂盒的一些实施方案，包括结合LGR5的人源化单克隆抗体或人单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQIDNO:23或其保守变异的重链CDR1。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQIDNO:2或其保守变异的重链CDR2。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQIDNO:3或其保守变异的重链CDR3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQIDNO:4或其保守变异的轻链CDR1。在一些实施方案中，抗体包含具有氨基酸LTS或其保守变异的轻链CDR2。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQIDNO:33或其保守变异的轻链CDR3。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQIDNO:19或48的重链可变结构域。在一些实施方案中，抗体包含含有SEQIDNO:21或49的轻链可变结构域。在一些实施方案中，抗体结合LGR5(SEQIDNO:47)的氨基酸T175、E176、Q180、R183、S186、A187、Q189、D247、E248、T251、R254、S257、N258、K260内的表位。在一些实施方案中，抗体结合LGR5(SEQIDNO:47)的富亮氨酸重复6-9内的表位。在一些实施方案中，抗体结合LGR5的凸面上的表位。在一些实施方案中，抗体不结合RSPO-LGR5结合的位点。在一些实施方案中，抗体不破坏LGR5-RSPO结合。在一些实施方案中，抗体不破坏LGR5-RSPO信号转导。在一些实施方案中，RSPO选自RSPO1、RSPO2、RSPO3和RSPO4。在一些实施方案中，抗体不破坏诸如LGR5-RSPO-RNF43、LGR5-RSPO-ZNRF3、LGR5-RSPO-LRP6、LGR5-NORRIN-RNF43、LGR5-NORRIN-ZNRF3、LGR5-NORRIN-LRP6的复合物的形成。在一些实施方案中，抗体破坏通过Wnt/β-连环蛋白通路的LGR5信号转导。在一些实施方案中，抗体诱导肿瘤中分化标志物的表达。在一些实施方案中，抗体能够诱导肿瘤中的细胞分化。在一些实施方案中，抗体抑制肿瘤的生长。在一些实施方案中，抗体降低了肿瘤中癌症干细胞(CSC)的频率。本文提供的组合物、方法和试剂盒的一些实施方案，包括分离的多核苷酸分子，所述分离的多核苷酸分子包含编码任一前述抗体的多核苷酸。本文提供的组合物、方法和试剂盒的一些实施方案，包括含有任一前述多核苷酸的载体。本文提供的组合物、方法和试剂盒的一些实施方案，包括含有任一前述载体的宿主细胞。本文提供的组合物、方法和试剂盒的一些实施方案，包括产生抗体的方法，所述方法包括培养任一前述宿主细胞以便产生抗体。本文提供的组合物、方法和试剂盒的一些实施方案，包括含有任一前述抗体和药学可接受载体的药物组合物。本文提供的组合物、方法和试剂盒的一些实施方案，包括治疗患有癌症的对象的方法，所述方法包括向对象施用任一前述抗体。一些实施方案还包括将化疗剂与抗体联合施用。在一些实施方案中，化疗剂选自：亚叶酸、氟尿嘧啶、伊立替康、吉西他滨和Abraxane。在一些实施方案中，将亚叶酸、氟尿嘧啶和伊立替康与抗体联合施用至对象。在一些实施方案中，在治疗之后，相比于未用抗体治疗的对象的存活可能性，所述治疗将对象的存活可能性增加了至少3个月。在一些实施方案中，将对象的存活可能性增加了至少6个月。在一些实施方案中，将对象的存活可能性增加了至少12个月。在一些实施方案中，相比于未用抗体治疗的对象中的癌症复发风险，所述治疗降低了对象中的癌症复发风险。在一些实施方案中，相比于未用抗体治疗的对象的外周血中的肿瘤细胞水平，所述治疗降低了对象的外周血中的肿瘤细胞水平。在一些实施方案中，癌症选自：结肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、乳腺癌和肺癌。在一些实施方案中，癌症选自：包含APC突变的结肠癌、包含KRAS突变的结肠癌、转移性结肠直肠癌、转移性胰腺癌、三阴性乳腺癌和小细胞肺癌。在一些实施方案中，对象是哺乳动物。在一些实施方案中，对象是人。本文提供的组合物、方法和试剂盒的一些实施方案，包括用于降低发展癌症的风险、预防癌症的复发或预防易患癌症的对象中癌症的方法，所述方法包括向所述对象施用任一前述抗体。本文提供的组合物、方法和试剂盒的一些实施方案，包括增加患癌症的对象的存活可能性的方法，其包括向对象施用任一前述抗体。在一些实施方案中，在治疗之后，相比于未用抗体治疗的对象的存活可能性，对象的存活可能性增加至少3个月。在一些实施方案中，对象的存活可能性增加至少6个月。在一些实施方案中，对象的存活可能性增加至少12个月。本文提供的组合物、方法和试剂盒的一些实施方案，包括降低对象中的癌症复发风险的方法，所述方法包括向所述对象施用任一前述抗体。本文提供的组合物、方法和试剂盒的一些实施方案包括，降低对象的外周血中癌症的肿瘤细胞水平的方法，所述方法包括向所述对象施用任一前述抗体。一些实施方案还包括将化疗剂与抗体联合施用。在一些实施方案中，化疗剂选自：亚叶酸、氟尿嘧啶、伊立替康、吉西他滨和Abraxane。在一些实施方案中，将亚叶酸、氟尿嘧啶和伊立替康与抗体联合施用至所述对象。在一些实施方案中，通过预测性临床测试、遗传分析或家族史分析确定易患癌症的对象。在一些实施方案中，癌症选自：结肠癌、结肠直肠癌、胰腺癌、乳腺癌和肺癌。在一些实施方案中，癌症选自包含APC突变的结肠癌、包含KRAS突变的结肠癌、转移性结肠直肠癌、转移性胰腺癌、三阴性乳腺癌和小细胞肺癌。在一些实施方案中，对象是哺乳动物。在一些实施方案中，对象是人。本文提供的组合物、方法和试剂盒的一些实施方案，包括选择患有肿瘤的对象进行治疗的方法，所述方法包括：(a)向对象施用化疗剂；(b)鉴定肿瘤中LGR5多肽或编码LGR5核酸的增加水平；以及(c)向肿瘤中LGR5多肽或编本文档来自技高网...

【技术保护点】
结合LGR5的人源化单克隆抗体或人单克隆抗体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.04 US 61/975,589;2014.11.18 US 62/081,4971.结合LGR5的人源化单克隆抗体或人单克隆抗体。2.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含具有氨基酸GYSFTAYW(SEQIDNO:23)或其保守变异的重链CDR1。3.如权利要求1或2所述的抗体，其中所述抗体包含具有氨基酸ILPGSDST(SEQIDNO:2)或其保守变异的重链CDR2。4.如权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有氨基酸ARSGYYGSSQY(SEQIDNO:3)或其保守变异的重链CDR3。5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有氨基酸ESVDSYGNSF(SEQIDNO:4)或其保守变异的轻链CDR1。6.如权利要求1-5中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有氨基酸LTS或其保守变异的轻链CDR2。7.如权利要求1-6中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含具有氨基酸QQNAEDPRT(SEQIDNO:33)或其保守变异的轻链CDR3。8.如权利要求1-7中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQIDNO:19或48的重链可变结构域。9.如权利要求1-8中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有SEQIDNO:21或49的轻链可变结构域。10.如权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合LGR5(SEQIDNO:47)的氨基酸T175、E176、Q180、R183、S186、A187、Q189、D247、E248、T251、R254、S257、N258、K260内的表位。11.如权利要求1-10中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合LGR5(SEQIDNO:47)的富亮氨酸重复6-9内的表位。12.如权利要求1-11中任一项所述的抗体，其中所述抗体结合LGR5凸面上的表位。13.如权利要求1-12中任一项所述的抗体，其中所述抗体不结合RSPO-LGR5结合的位点。14.如权利要求1-13中任一项所述的抗体，其中所述抗体不破坏LGR5-RSPO的结合。15.如权利要求1-14中任一项所述的抗体，其中所述抗体不破坏LGR5-RSPO信号转导。16.如权利要求13-15中任一项所述的抗体，其中所述RSPO选自RSPO1、RSPO2、RSPO3和RSPO4。17.如权利要求1-16中任一项所述的抗体，其中所述抗体破坏LGR5-RSPO-RNF43复合物的形成。18.如权利要求1-17中任一项所述的抗体，其中所述抗体破坏LGR5-RSPO-ZNRF3复合物的形成。19.如权利要求1-18中任一项所述的抗体，其中所述抗体破坏LGR5-RSPO-LRP6复合物的形成。20.如权利要求1-19中任一项所述的抗体，其中所述抗体破坏LGR5-NORRIN-RNF43复合物的形成。21.如权利要求1-20中任一项所述的抗体，其中所述抗体破坏LGR5-NORRIN-ZNRF3复合物的形成。22.如权利要求1-21中任一项所述的抗体，其中所述抗体破坏LGR5-NORRIN-LRP6复合物的形成。23.如权利要求1-22中任一项所述的抗体，其中所述抗体破坏通过Wnt/β-连环蛋白通路的LGR5信号转导。24.如权利要求1-23中任一项所述的抗体，其中所述抗体诱导肿瘤中分化标志物的表达。25.如权利要求1-24中任一项所述的抗体，其中所述抗体能够诱导肿瘤中的细胞进行分化。26.如权利要求1-25中任一项所述的抗体，其中所述抗体抑制肿瘤生长。27.如权利要求1-26中任一项所述的抗体，其中所述抗体降低肿瘤中癌症干细胞的频率。28.分离的多核苷酸分子，其包含编码权利要求1-27中任一项所述的抗体的多核苷酸。29.载体，其包含权利要求28所述的多核苷酸。30.宿主细胞，其包含权利要求29所述的载体。31.产生抗体的方法，其包括培养权利要求30所述的宿主细胞以便产生所述抗体。32.药物组合物，其包含权利要求1-27中任一项所述的抗体和药学可接受的载体。33.治疗患有癌症的对象的方法，其包括将权利要求1-27中任一项所述的抗体施用至所述对象。34.如权利要求33所述的方法，其还包括将化疗剂与所述抗体联合施用。35.如权利要求34所述的方法，其中所述化疗剂选自：亚叶酸、氟尿嘧啶、伊立替康、吉西他滨和Abraxane。36.如权利要求35所述的方法，其中将所述亚叶酸、氟尿嘧啶和伊立替康与所述抗体联合施用至所述对象。37.如权利要求33-36中任一项所述的方法，其中相比于未用所述抗体治疗的对象的存活可能性，在所述治疗之后，所述治疗将所述对象的存活可能性增加至少6个月。38.如权利要求37所述的方法，其中所述对象的存活可能性增加至少12个月。39.如权利要求33-38中任一项所述的方法，其中相比于未用所述抗体治疗的对象的癌症复发风险，所述治疗降低了所述对象的癌症复发风险。40.如权利要求33-39中任一项所述的方法，其中相比于未用所述抗体治疗的对象的外周血中的肿瘤细胞水平，所述治疗降低...

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯多佛·里耶斯，彼得·朱，克里斯汀·M·史密斯，柳德米拉·A·坎贝尔，法波·舒贾埃，约翰·托马斯·诺顿，
申请(专利权)人：生态学有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US