一种依诺肝素钠的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种依诺肝素钠的检测方法，它包括以下步骤：a、取依诺肝素钠样品，水解，得到水解溶液；b、取水解溶液，衍生化，得到待检溶液；c、采用高效液相色谱方法对待检溶液进行检测，检测得到葡萄糖胺与甘露糖胺的峰面积，计算得到葡萄糖胺与甘露糖胺的比例。本发明专利技术检测方法，通过检测葡萄糖胺与甘露糖胺的比例，不仅可以直观的反映出产品质量和/或其生产工艺的稳定性；而且，本发明专利技术检测方法简便，无需采用复杂的梯度洗脱程序，就可以实现对依诺肝素钠的准确检测，为监控依诺肝素钠的产品质量和/或其生产工艺的稳定性提供了一种简单易行的新方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种依诺肝素钠的检测方法。
技术介绍
依诺肝素钠，作为一种用于预防和治疗深静脉血栓或肺栓塞的抗凝血剂，其产品质量的好坏直接关系着患者的生命安全。在依诺肝素钠的生产过程中，如果企业的生产工艺不先进或控制水平不高，其产品的质量很可能会产生较大的波动；因此，为了监控依诺肝素钠的产品质量和/或其生产工艺的稳定性，同时，也为了尽可能降低因产品质量波动所带来的经济损失，有必要对生产出来的依诺肝素钠进行检测。然而，依诺肝素钠的现有检测方法：中国专利CN102323355A和CN104193849A，对依诺肝素钠进行检测时，需要同时检测10多个色谱峰来评价依诺肝素钠的产品质量，其检测结果无法直观的反映出产品质量和/或其生产工艺的稳定性，而且，它还需要采用程序复杂但分离效果好的梯度洗脱，也不简便。为了能够使检测方法的结果直观的反映产品质量和/或其生产工艺的稳定性，同时，也为了使检测方法更加简便，需要专利技术一种检测依诺肝素钠的新方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种依诺肝素钠的检测方法。本专利技术提供的一种依诺肝素钠的检测方法，它包括以下步骤：a、取依诺肝素钠样品，加入酸水溶液，于110℃～120℃下水解反应6～8小时后，除去酸，加入水，过滤，得到样品水解溶液；其中，依诺肝素钠样品与酸水溶液的重量体积比为1：0.5～2mg/mL，依诺肝素钠样品与水的重量体积比为1：80～100mg/μL；b、取样品水解溶液，加入氢氧化钠水溶液和衍生化试剂醇溶液，于70℃～80℃下反应60分钟～90分钟后，冷却，用盐酸调节至溶液呈中性，加入三氯甲烷，振荡，离心，取水相的上清液，作为待检溶液；其中，样品水解溶液与氢氧化钠水溶液的体积比为1：0.8～1.5；样品水解溶液与衍生化试剂醇溶液的体积比为1：0.8～1.5；c、采用高效液相色谱方法对待检溶液进行检测，检测条件如下：反相色谱柱：C18柱或C8柱，流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈，磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为70:30～95:5，检测波长：220nm～270nm；检测得到葡萄糖胺与甘露糖胺的峰面积，按照以下公式：计算得到葡萄糖胺与甘露糖胺的比例。进一步的，步骤a中，所述酸水溶液的浓度为1.5～2.5mol/L；优选的，所述酸水溶液的浓度为2mol/L。进一步的，步骤a中，所述的酸水溶液为三氟乙酸水溶液或氢氟酸。进一步的，步骤b中，所述氢氧化钠水溶液的浓度为0.2mol/L～0.5mol/L，所述衍生化试剂醇溶液的浓度为0.2mol/L～1mol/L；优选的，所述氢氧化钠水溶液的浓度为0.3mol/L，所述衍生化试剂醇溶液的浓度为0.5mol/L。进一步的，步骤b中，所述的衍生化试剂醇溶液为1-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮的醇溶液、2-氨基吡啶的醇溶液、乙基-4-氨基安息香酸盐的醇溶液、2-氨基苯甲酸的醇溶液或1,2-二氨基-4,5-亚甲基双氧苯的醇溶液；优选的，所述的衍生化试剂醇溶液为1-苯基-3甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液。进一步的，步骤c中，C18柱为AgilentEclipseXDB-C18色谱柱，长度为150mm，内径为4.6mm，填料的粒径为5μm。进一步的，步骤c中，磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为85:15。进一步的，步骤c中，磷酸盐缓冲液是按照以下方法配制而成：取0.05～0.2mol/L的磷酸氢二钠水溶液，用磷酸调节pH值为6.0～7.0，即得。进一步的，步骤c中，磷酸盐缓冲液是按照以下方法配制而成：取0.1mol/L的磷酸氢二钠水溶液，用磷酸调节pH值为6.7，即得。进一步的，步骤c中，检测波长为245nm；柱温为30℃；流速为1mL/min；进样体积为20μL。本专利技术检测方法，通过检测葡萄糖胺与甘露糖胺的比例，不仅可以直观的反映出产品质量和/或其生产工艺的稳定性；而且，本专利技术检测方法简便，无需采用复杂的梯度洗脱程序，就可以实现对依诺肝素钠的准确检测，为监控依诺肝素钠的产品质量和/或其生产工艺的稳定性提供了一种简单易行的新方法。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为本专利技术方法对依诺肝素钠样品、依诺肝素钠标准品、单糖标准品进行检测的HPLC图：GlcN表示葡萄糖胺；ManN表示甘露糖胺；GlcUA表示葡萄糖醛酸；GalN表示半乳糖胺；GalUA表示半乳糖醛酸。具体实施方式本专利技术具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。实施例1、本专利技术检测依诺肝素钠中葡萄糖胺与甘露糖胺比例的方法1、仪器与试剂ZORBAXEclipseXDB-C18柱(4.6×150mm,美国，Agilent公司)；高效液相色谱仪(Agilent-1260，美国Agilent公司)，配紫外检测器和数据分析软件；依诺肝素钠样品(成都百裕制药股份有限公司，110401批次)；依诺肝素钠标准品(EP，E0180000)；葡萄糖胺标准品、葡萄糖醛酸标准品、半乳糖胺标准品、半乳糖醛酸标准品、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)，均购自美国sigma公司；乙腈为HPLC级试剂；三氟乙酸、氢氟酸、氢氧化钠、盐酸、甲醇(AR试剂)。2、样品供试液制备2.1、加酸水解取依诺肝素钠样品、依诺肝素钠标准品各2mg，分别用2mol/L三氟乙酸水溶液2mL溶解，110℃沙浴恒温降解6h，氮吹仪吹干三氟乙酸，溶于200μL水中，0.22μm滤膜过滤，分别得到依诺肝素钠样品的水解溶液、依诺肝素钠标准品的水解溶液。2.2、柱前衍生分别取100μL上述所得的依诺肝素钠样品的水解溶液、依诺肝素钠标准品的水解溶液，加入100μL浓度为0.3mol/L氢氧化钠水溶液，混合均匀，再加入120μL浓度0.5mol/LPMP甲醇溶液，在70℃下反应60min。反应结束后，冷却，用0.3mol/L盐酸溶液中和，加入500μL氯仿，充分振荡、离心、弃去有机相，重复3次，取上清液，作为待检溶液。3、色谱检测条件色谱柱：AgilentEclipseXDB-C18色谱柱(4.6mm×本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种依诺肝素钠的检测方法，其特征在于：它包括以下步骤：a、取依诺肝素钠样品，加入酸水溶液，于110℃～120℃下水解反应6～8小时后，除去酸，加入水，过滤，得到样品水解溶液；其中，依诺肝素钠样品与酸水溶液的重量体积比为1：0.5～2mg/mL，依诺肝素钠样品与水的重量体积比为1：80～100mg/μL；b、取样品水解溶液，加入氢氧化钠水溶液和衍生化试剂醇溶液，于70℃～80℃下反应60分钟～90分钟后，冷却，用盐酸调节至溶液呈中性，加入三氯甲烷，振荡，离心，取水相的上清液，作为待检溶液；其中，样品水解溶液与氢氧化钠水溶液的体积比为1：0.8～1.5；样品水解溶液与衍生化试剂醇溶液的体积比为1：0.8～1.5；c、采用高效液相色谱方法对待检溶液进行检测，检测条件如下：反相色谱柱：C18柱或C8柱，流动相：磷酸盐缓冲液‑乙腈，磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为70:30～95:5，检测波长：220nm～270nm；检测得到葡萄糖胺与甘露糖胺的峰面积，按照以下公式：计算得到葡萄糖胺与甘露糖胺的比例。

【技术特征摘要】
1.一种依诺肝素钠的检测方法，其特征在于：它包括以下步骤：
a、取依诺肝素钠样品，加入酸水溶液，于110℃～120℃下水解反应6～8小时后，
除去酸，加入水，过滤，得到样品水解溶液；
其中，依诺肝素钠样品与酸水溶液的重量体积比为1：0.5～2mg/mL，依诺肝素钠样
品与水的重量体积比为1：80～100mg/μL；
b、取样品水解溶液，加入氢氧化钠水溶液和衍生化试剂醇溶液，于70℃～80℃下反
应60分钟～90分钟后，冷却，用盐酸调节至溶液呈中性，加入三氯甲烷，振荡，离心，
取水相的上清液，作为待检溶液；
其中，样品水解溶液与氢氧化钠水溶液的体积比为1：0.8～1.5；样品水解溶液与衍
生化试剂醇溶液的体积比为1：0.8～1.5；
c、采用高效液相色谱方法对待检溶液进行检测，检测条件如下：
反相色谱柱：C18柱或C8柱，
流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈，磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为70:30～95:5，
检测波长：220nm～270nm；
检测得到葡萄糖胺与甘露糖胺的峰面积，按照以下公式：
计算得到葡萄糖胺与甘露糖胺的比例。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤a中，所述酸水溶液的浓度
为1.5～2.5mol/L；优选的，所述酸水溶液的浓度为2mol/L。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤a中，所述的酸水溶液为三
氟乙酸水溶液或氢氟酸。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤b中，所述氢氧化钠水溶液
的浓度为0.2...

【专利技术属性】
技术研发人员：何捷，
申请(专利权)人：成都百裕制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51