凝固因子VII多肽制造技术

本发明专利技术涉及具有凝血剂活性的修饰的人凝固因子VII多肽，特别是与野生型FVIIa相比当活化时具有较高的蛋白水解活性和降低的抗凝血酶反应性(对由抗凝血酶所致失活的抗性增加)的变体。所述变体具有在成熟人FVII的位置T293处的某些置换，以及在L288、W201和/或K337处的特定置换。本发明专利技术还涉及所述因子VII多肽的药物组合物和医学用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有促凝血活性的凝固因子VII(因子VII)多肽。其还涉及包含这样的多肽的药物组合物、这样的多肽的治疗方法和用途。序列表SEQIDNO.1：野生型人凝固因子VII。SEQIDNO.2：人凝固因子VII的蛋白酶结构域。SEQIDNO.3：类人(黑猩猩)凝固因子VII的蛋白酶结构域。SEQIDNO.4：犬科(狗)凝固因子VII的蛋白酶结构域。SEQIDNO.5：猪科(猪)凝固因子VII的蛋白酶结构域。SEQIDNO.6：牛科(牛)凝固因子VII的蛋白酶结构域。SEQIDNO.7：鼠科(小鼠)凝固因子VII的蛋白酶结构域。SEQIDNO.8：鼠科(大鼠)凝固因子VII的蛋白酶结构域。SEQIDNO.9：兔科(兔)凝固因子VII的蛋白酶结构域。专利技术背景对血管的损伤活化止血系统，其涉及细胞和分子组分之间的复杂相互作用。最终引起出血停止的过程称为止血。止血的重要部分是在损伤部位处的血液凝固和凝块形成。凝血过程高度依赖几种蛋白质分子的功能。这些称为凝血因子。凝血因子中的一些是可以以失活酶原或酶促活性形式存在的蛋白酶。通过由另一种蛋白酶解活性凝血因子催化的多肽链的特异性切割，酶原形式可以转换为其酶促活性形式。因子VII是在肝中合成且作为单链糖蛋白分泌到血液内的维生素K依赖性血浆蛋白质。通过在单个位点处即在SEQIDNO:1的R152和I153之间的特异性蛋白酶解切割，因子VII酶原转换为活性形式(因子VIIa)，产生由单个二硫键连接的双链分子。因子VIIa中的两条多肽链被称为轻和重链，分别对应于SEQIDNO:1(野生型人凝血因子VII)的残基1-152和153-406。因子VII主要地作为酶原循环，但较少部分呈活化形式(因子VIIa)。血液凝固过程可以分成三个时期：初始、扩大和传播。初始和传播期促使凝血酶形成，所述凝血酶是在止血中具有许多重要功能的凝血因子。如果排列在血管内表面的内皮细胞的单层屏障发生受损，则凝血级联起始。这暴露出血液中的血小板将与之粘附的内皮下细胞和血管外基质蛋白质。如果这发生，则存在于内皮下细胞表面上的组织因子(TF)变得暴露于在血液中循环的因子VIIa。TF是膜结合蛋白质，并且充当因子VIIa的受体。因子VIIa是具有固有的低活性的酶，即丝氨酸蛋白酶。然而，当因子VIIa与TF结合时，它的活性极大增加。因子VIIa与TF相互作用也将因子VIIa定位于具有TF的细胞的磷脂表面上，并且将其最佳放置用于将因子X活化为Xa。当这发生时，因子Xa可以与因子Va组合，以在具有TF的细胞的表面上形成所谓的“凝血酶原酶”复合物。凝血酶原酶复合物随后通过切割凝血酶原而生成凝血酶。通过使TF暴露于循环的因子VIIa而活化且导致凝血酶的初始生成的途径称为TF途径。TF:因子VIIa复合物也催化因子IX至因子IXa的活化。随后活化因子IXa可以扩散至血小板表面，所述血小板粘附至损伤部位且已活化。这允许因子IXa与FVIIIa组合，以在活化血小板的表面上形成“tenase”复合物。由于其在将因子X活化为Xa中的显著功效，该复合物在传播期中起关键作用。有效的tenase催化的因子Xa活性的产生，进而又导致由凝血酶原酶复合物催化的凝血酶原至凝血酶的有效切割。如果在因子IX或因子VIII中存在任何缺陷，则它损害重要的tenase活性，并且降低凝血所需的凝血酶产生。最初由TF途径形成的凝血酶充当促凝信号，其鼓励血小板在损伤部位处的召募、活化和聚集。这导致松散的初级血小板塞的形成。然而，该初级血小板塞是不稳定的且需要强化以支持止血。塞的稳定涉及将血小板锚定且缠在纤维蛋白纤维网中。坚固且稳定的凝块的形成依赖于产生局部凝血酶活性的强爆发。因此，在血管损伤后导致凝血酶生成的过程中的缺陷可以导致出血障碍，例如A和B型血友病。具有A和B型血友病的人分别缺乏功能性因子VIIIa或因子IXa。在传播期中的凝血酶生成严重依赖tenase活性，即需要因子VIIIa和FIXa两者。因此，在具有A或B型血友病的人中，无法进行初级血小板塞的适当固结，且持续出血。替补疗法是用于A和B型血友病的传统治疗，并且涉及因子VIII或因子IX的静脉内给予。然而，在许多情况下，患者产生针对输注蛋白质的抗体(也称为抑制物)，这降低或取消治疗的功效。重组因子VIIa(Novoseven?)已被批准用于治疗具有抑制物的A或B型血友病患者，并且还用于终止出血发作或预防与创伤和/或手术相关的出血。重组因子VIIa也已被批准用于治疗具有先天性因子VII缺陷的患者。已提出重组FVIIa通过不依赖TF的机制运转。根据该模型，重组FVIIa由于其Gla结构域导向活化血液血小板的表面，在此处，它随后将因子X蛋白酶解活化为Xa，因此绕过功能性tenase复合物的需要。在不存在TF的情况下，FVIIa的低酶促活性以及Gla结构域对膜的低亲和力可以解释在具有血友病的人中实现止血所需的超生理学水平的循环的FVIIa的需要。重组因子VIIa具有2-3小时的体内功能性半衰期，其可能需要频繁给予以解决患者中的出血。进一步地，患者通常仅在出血已开始后接受因子VIIa疗法，而不是作为预防措施，这通常影响其一般生活质量。具有更长的体内功能性半衰期的重组因子VIIa变体将降低所需给予数目，支持更不频繁的给药且因此保留显著改善的因子VIIa疗法对患者和护理持有者(care-holder)的利益的承诺。WO02/22776公开了与野生型FVIIa相比具有提高的蛋白水解活性的因子VIIa变体。临床试验已经证实，在具有提高的蛋白水解活性的变体的功效方面，包含WO02/22776中公开的置换的因子VII多肽显示有利的临床结果(dePaula等(2012)JThrombHaemost,10:81-89)。WO2007/031559公开了对由抗凝血酶导致的抑制具有降低的易感性的因子VII变体。WO2009/126307公开了具有改变的促凝血活性的修饰的因子VII多肽。总体上，在患有凝血病的人中存在许多未满足的医学需求。重组因子VIIa促进凝块形成的使用强调了其作为治疗剂的日益增长的重要性。然而，重组因子VIIa疗法仍留下显著的未满足的医学需求，具有改进的药学性质(例如增加的体内功能性半寿期和提高的或更高的活性)的重组因子VIIa多肽将满足这些需求中的一些。专利技术简述本专利技术提供因子VII多肽，其经设计具有改进的药学性质。在一个广泛的方面，本专利技术涉及因子VII多肽，与人野生型因子VIIa本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含相对于人因子VII的氨基酸序列(SEQ ID NO: 1)的两个或更多个置换的因子VII多肽，其中T293被替换为Lys (K)、Arg (R)、Tyr (Y)或Phe (F)；和L288被替换为Phe (F)、Tyr (Y)、Asn (N)、Ala (A)或Trp W，和/或W201被替换为Arg (R)、Met (M)或Lys (K)，和/或K337被替换为Ala (A)或Gly (G)。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.15 EP 13188715.0;2014.02.12 EP 14154875.0;1.一种包含相对于人因子VII的氨基酸序列(SEQIDNO:1)的两个或更多个置换的
因子VII多肽，其中T293被替换为Lys(K)、Arg(R)、Tyr(Y)或Phe(F)；和L288被替换为
Phe(F)、Tyr(Y)、Asn(N)、Ala(A)或TrpW，和/或W201被替换为Arg(R)、Met(M)或Lys
(K)，和/或K337被替换为Ala(A)或Gly(G)。
2.权利要求1的因子VII多肽，其中T293被替换为Lys(K)、Arg(R)、Tyr(Y)或Phe
(F)，和L288被替换为Phe(F)、Tyr(Y)、Asn(N)、Ala(A)或Trp(W)。
3.权利要求1或2的因子VII多肽，其中T293被替换为Lys(K)，和L288被替换为Phe
(F)。
4.权利要求1或2的因子VII多肽，其中T293被替换为Lys(K)，和L288被替换为Tyr
(Y)。
5.权利要求1或2的因子VII多肽，其中T293被替换为Arg(R)，和L288被替换为Phe
(F)。
6.权利要求1或2的因子VII多肽，其中T293被替换为Arg(R)，和L288被替换为Tyr
(Y)。
7.权利要求1-6中任一项的因子VII多肽，其中K337被替换为Ala(A)。
8.权利要求1的因子VII多肽，其中T293被替换为Lys(K)、Arg(R)...

【专利技术属性】
技术研发人员：H奥斯特加亚尔德，PS甘德希，OH奥尔森，
申请(专利权)人：诺和诺德保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH