本发明专利技术公开了一种ALDH2基因c.1510位点多态性检测的引物和试剂盒，本发明专利技术设计的针对ALDH2基因位点特异的引物、探针及试剂盒，具有敏感性高、特异性好、反应快速且成本低的优势，适合于大规模临床开展；可以实现对ALDH2的快速、有效且准确的分型定性检测，为硝酸甘油治疗心绞痛的及时治疗、饮酒指导、相关癌症的发生提供参考。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种ALDH2基因c.1510位点多态性检测的引物和试剂盒。
技术介绍
心绞痛是由于冠状动脉粥样硬化狭窄导致冠状动脉供血不足产生，临床上使用舌下含服硝酸甘油治疗，硝酸甘油通过释放一氧化氮(NO)，NO与内皮舒张因子相同，激活鸟苷酸环化酶，使平滑肌和其他组织内的环鸟苷酸(CGMP)增多，导致肌球蛋白轻链去鳞酸化，调节平滑肌收缩状态，引起血管扩张从而缓解心绞痛。一般舌下含服硝酸甘油15分钟内见效，若不能缓解需及时入院治疗。实验发现乙醛脱氢酶2(aldehydedehydrogenase2，ALDH2)是硝酸甘油起效的关键因素，硝酸甘油的代谢需要ALDH2基因编码的酶，ALDH2基因具有遗传多态性，其中与亚洲人群最为密切的是ALDH2基因的c.1510位核苷酸存在G/A多态性。其遗传变异型使硝酸甘油代谢速率大大降低，野生型的酶活性是变异型酶活性的10倍。从而无法产生一氧化氮，难以发挥药效或药效降低。除此之外，ALDH2还是酒精代谢中的关键酶之一，饮酒后，酒精分别通过乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)代谢成二氧化碳和水排出体外。ALDH2基因突变型会使酒精代谢受阻，导致乙醛在体内的堆积。乙醛在人体血液的积累，会造成对细胞膜脂质的过氧化，发生酒精中毒、酒精依赖、肝病、食管癌、咽喉癌等发生率提高。因此，ALDH2基因上的SNP位点G>A的基因多态性对治疗心绞痛影响重大，通过对ALDH2基因上G>ASNP点基因型的检测来辅助临床诊断，为临床医生选择药物提供参考。同时对过度饮酒嗜酒的人有一定的指导意义，以减少疾病的发生风险。目前，检测基因位点多态性的技术手段有很多，但是大多数均停留在实验室水平，还不能真正应用的医疗机构的日常检测中，以下介绍目前存在的检测技术：(1)单链构象多态性技术(PCR-SSCP)利用点突变或SNP可以对短的DNA单链构象造成影响，从而导致电泳速度的不同来进行检测。特点是可以进行特定区域突变的筛查，但需要跑PAGE胶，较为繁琐，并有一定的漏检率。(2)高分辨率融解曲线分析(HRM)这是近两年发展起来的新技术，原理简便，不需要对反应条件和体系进行特别的优化，容易实现，可进行突变的筛查，但需要特定仪器和试剂的支持。并且只能对片段内突变点进行检测，不能确定检测突变点的具体位置，容易造成假阳性结果。(3)Taqman探针法(定量PCR)适合已知SNP位点、位点数量少、通量高的检测。但是探针合成费用价格昂贵，不能同时发现未知SNP位点，并且容易造成假阳性结果。(4)变性高效液相色谱(DHPLC)对于特定位点的突变检测，需要摸索各种条件，稳定性较差，影响因素太多，所以不容易做好。(5)限制性内切酶酶切法根据突变或SNP位点选择合适的内切酶对PCR产物进行酶切，然后电泳鉴定。该方法稳定可靠，但要注意酶切效率完全，而且不是所有的突变或SNP位点都有酶可以选择，容易造成污染。(6)芯片技术与传统的仪器检测方法相比具有高通量、微型化、自动化、防污染等特点，仅适用于全基因组SNP扫描，不适宜单个基因的SNP位点检测，精度低，价格昂贵。目前国内上海百傲科技有限公司的ALDH2基因多态性检测试剂盒采用的是基因芯片方法已获得认证。(7)位点特异性PCR引物(ARMS)利用PCR引物的3’端末位碱基必须与其模板DNA互补才能有效扩增的原理，设计等位基因特异性PCR扩增引物，在严格的条件下，只有在引物3’碱基与模板配对时才能出现PCR扩增带，从而检测出突变。利用Taqman探针在实时荧光定量PCR平台上实现对样品DNA中突变的检测，具有极高的特异性和敏感度。(8)直接测序法SNP分析的金标准，由于基因序列分析法检测的是易突变区的完整序列，因此可以检测未知突变位点。但测序实验操作较为复杂、实验周期较长、电泳容易造成实验室污染。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了解决上述问题，提供一种ALDH2基因c.1510位点多态性检测的引物和试剂盒。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种ALDH2基因c.1510位点多态性检测的引物，包括ALDH2-A-F，核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，ALDH2-G-F，核苷酸序列如SEQIDNO:2所示，ALDH2-R，核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。一种ALDH2基因c.1510位点多态性检测的试剂盒，包括上述的三种引物。优选：上述试剂盒还包括一组内标引物，HER2-F的核苷酸序列如SEQIDNO:5所示，HER2-R的核苷酸序列如SEQIDNO:6所示，HER2-FP的核苷酸序列如SEQIDNO:7所示。优选：上述试剂盒还包括，所述荧光PCR探针(ALDH2-FP，核苷酸序列如SEQIDNO:4所示)的5’端有荧光报告基团，3’端有荧光猝灭基团。优选：所述荧光报告基团和荧光猝灭基团搭配如下表：更优选：所述荧光PCR探针的5’端有荧光报告基团6-FAM或HEX，3’端有荧光猝灭基团BHQ1。优选：试剂盒还包括Mg2+、DNA聚合酶、dNTPs的荧光定量PCR反应缓冲液、ALDH2阳性质控品、阴性质控品、内标质控品。优选：所述阳性质控品为人ALDH2(A/G)型质粒，阴性质控品为纯化水，内标质控品HER2质粒。优选：PCR反应缓冲液包括：ALDH2PCR反应液12.5ul，ALDH2(A)引物探针混合液6.5ul，ALDH2(G)引物探针混合液6.5ul，待测样本DNA2ul，纯化水4.0ul，共配成25ul反应体系；其中ALDH2(A)引物探针混合液的组成为：ALDH2-A-F1.5ul(10P)，ALDH2-FP1.5ul(0.25P)，ALDH2-R1.5ul(10P)，HER2-F0.5ul(10P)，HER2-R0.5ul(10P)，HER2-FP1.0ul(0.25P)，ALDH2(G)引物探针混合液的组成为：ALDH2-G-F1.5ul，ALDH2-FP1.5ul，ALDH2-R1.5ul，HER2-F0.5ul，HER2-R0.5ul，HER2-FP1.0ul。优选:PCR反应条件如下表：专利技术原理：分钟本专利技术选取ALDH2的c.1510位点(G/A)SNP区域，设计特异性ARMS引物，然后利用对全血DNA进行ALDH2的SNP型别检测。等位基因特异性扩增(Allelesspecificamplification，ASA)-又称扩增阻碍突变系统(Amplificationrefr本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种ALDH2基因c.1510位点多态性检测的引物，其特征是：包括ALDH2‑A‑F，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，ALDH2‑G‑F，核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，ALDH2‑FP，核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
【技术特征摘要】
1.一种ALDH2基因c.1510位点多态性检测的引物，其特征是：包括ALDH2-A-F，核苷酸序
列如SEQIDNO:1所示，ALDH2-G-F，核苷酸序列如SEQIDNO:2所示，ALDH2-FP，核苷酸序列
如SEQIDNO:3所示。
2.一种ALDH2基因c.1510位点多态性检测的试剂盒，其特征是：包括权利要求1所述的
三条引物。
3.如权利要求2所示的试剂盒，其特征是：还包括一组内标引物，HER2-F，其核苷酸序列
如SEQIDNO:5所示，HER2-R，其核苷酸序列如SEQIDNO:6所示，HER2-FP，其核苷酸序列如
SEQIDNO:7所示。
4.如权利要求2所示的试剂盒，其特征是：还包括荧光PCR探针ALDH2-R，核苷酸序列如
SEQIDNO:4，所示所述荧光PCR探针的5’端有荧光报告基团，3’端有荧光猝灭基团。
5.如权利要求4所示的试剂盒，其特征是：所述荧光报告基团和荧光猝灭基团搭配如下
表：
6.如权利要求2所示的试剂盒，其特征是：试剂盒还包括Mg2+、DNA聚合酶、dNTPs的荧光
定量PCR反应缓...
【专利技术属性】
技术研发人员：王军，韩淑毅，张慧林，朱鹏冲，徐祎慧，王敏，张孝乾，刘沛，周婷，刘妍妍，
申请(专利权)人：汪运山，
类型：发明
国别省市：山东;37
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