一种高油酸油菜品种的培育方法技术

本发明专利技术属于油菜育种领域，具体涉及一种高油酸油菜品种的培育方法。本发明专利技术的特征在于：以油酸含量为65％或以下的甘蓝型油菜品系甲A177为母本与保藏号为CCTCC NO：P201604的油酸含量至少为78％的高油酸甘蓝型油菜品系甲H003为父本进行杂交，通过人工去雄，得到F1；种植F1，通过小孢子培养获得分离的DH系；对DH系群体的每一个株系苗期进行高油酸分子标记鉴定，确定每个株系的基因型；利用气相色谱仪测定每个单株的油酸含量，确认各初选系的油酸含量；在油酸含量大于75％的DH系中，选择全株角果数、每角果粒数、千粒重和单株产量性状优于油酸小于69％的亲本株系，得到油酸大于78％的高油酸油菜选系和品种。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于油菜育种
，具体涉及一种高油酸油菜品种的培育方法。本专利技术涉及利用小孢子培养、分子标记辅助选择和气相色谱法相结合选育优良高油酸油菜品系的方法。
技术介绍
油菜种子中脂肪酸组成直接决定菜籽油的食用品质和营养价值。油酸是一种十八碳单不饱和脂肪酸。普通油菜种子中油酸含量为17-65％，本专利技术中的高油酸油菜是指种子及菜籽油脂肪酸中油酸的比例大于75％的油菜品种及其衍生的菜籽油。高油酸食用油，包括高油酸菜籽油，在食用油和工业上有很高的应用价值。高油酸食用油的氧化稳定性高，在煎炸食物时，高油酸食用油高温不起烟，能够缩短煎炸时间，减少油吸收过量(Miller等,Geneticcontrolofhigholeicacidcontentinsunfloweroil.CropSciences,1987,27:923-926)。在日常饮食中，高油酸可降低血液中的低密度脂蛋白胆固醇的含量，从而有利于阻止动脉血管硬化(Chang等,Effectsoftheratioofpolyunsaturatedandmonounsaturatedfattyacidonratplasmaandliverlipidconcentration.Lipids,1998,33:481-487)。由于油酸的十八碳链长度与柴油组分相似，高油酸菜籽油可用于生产优质生物柴油，是重要的可再生性能源原料(Piazza等，Rapeseedoilforoleochemicaluses.EurJLipidSciTechnol,2001,103:405-454)。培育高油酸油菜是国内外油菜育种的主要目标之一。目前在中国还没有高油酸油菜品种通过审定。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种油菜高油酸品种的培育方法，该方法利用普通油酸含量(小于69％)的油菜品系或品种与高油酸(种子中油酸含量大于75％)油菜材料为亲本进行杂交，利用气相色谱分析和小孢子培养的辅助方法，通过杂交在上述材料的杂交后代中培育出高油酸油菜选系，即获得油酸含量大于78％的非转基因高油酸油菜材料和品种。本专利技术的技术方案如下所述：(1)以甘蓝型油菜品系甲A177为母本(2012年测定油酸含量65％)【该材料的种子已于2009年11月20日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCCNO：P200908；该生物材料已在专利号为ZL2009102734352，申请公布号为CN101824472A，即本申请人的专利文献中公开，本申请不需要重新提交生物材料保藏与公开】与高油酸含量甘蓝型油菜新资源甲H003为父本(2012年测定的油酸含量为80％。申请人将所述的父本命名为油菜高油酸种子甲H003，BrassicanapusL.甲H003,于2016年1月25日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCCNOP201604)杂交，通过人工去雄，得到F1；(2)种植上步所得的F1，取花蕾进行小孢子培养(小孢子培养培养方法参见：余凤群等，提高甘蓝型油菜小孢子胚状体成苗率的某些培养因素研究，作物学报，1997，23(2)：165-168)获得分离的双单倍体(简称DH系)群体；(3)利用高油酸分子标记(例如YQ-Fad2a-1)对DH系群体的每一个株系的幼苗进行标记分析，可以在苗期获得每个株系的油酸基因型(该分子标记的制备及其应用方法参见申请人，专利号为ZL2009102734352文献，申请公布号CN101824472A；申请公布日：2010.09.08)，通过分子标记分析可以减少花期及后续种子分析的工作量，提高鉴定的准确性；所用的分子标记引物(YQ-Fad2a-1，本专利技术中所称的分子标记和分子标记引物为同一对序列)如下：正向引物5'-CAGTTCACTCTCGGCAGC-3'，反向引物5'-GCAACTCCTTGGACAGCA-3'；(4)利用气相色谱仪测定每个株系种子的油酸含量(测定方法参照：杨燕宇等.无芥酸甘蓝型油菜十八碳不饱和脂肪酸含量的QTL定位.作物学报，(2011).37(8):1342-1350)，确认每个初选系的油酸含量；(5)种植种子中油酸含量大于75％的DH系，考察各个株系的全株角果数、每角果粒数、千粒重、单株产量4个性状；筛选得到全株角果数、每角果粒数、千粒重、单株产量4个性状的优于普通油酸(油酸含量小于69％)含量亲本的株系，获得种子油酸含量大于78％的高油酸油菜选系和品种。附图说明图1：利用分子标记引物(YQ-Fad2a-1)对高油酸FAD2基因在24个DH系材料中油酸基因型鉴定结果。附图标记说明：编号为2、3、4、5、9、10、11、12、13、15、16、17、18、21、24的样品，有扩展产物的DH系鉴定为高油酸(油酸含量大于75％)基因型，没有得到扩增产物的个体(编号为1、6、7、8、14、19、20、22、23样品)为普通低油酸含量(油酸含量小于69％)基因型。本专利技术的积极效果如下：(1)本专利技术利用油酸含量大于75％的甘蓝型油菜品系，通过与油酸含量小于69％的优良甘蓝型油菜品系或品种为亲本进行杂交，在小孢子培养获得的纯系中进行高油酸分子标记选择，可以提前分离出高油酸基因型，减少育种工作量；通过对种子脂肪酸的气相色谱分析并结合后代农艺性状鉴定，可以选育出油酸含量稳定大于78％的非转基因高油酸材料和品种。(2)本专利技术为选育优良高油酸油菜品种提供了一种简单、快速、有效的方法。利用该方法可进一步改良菜籽油的品质，提高菜籽油的市场价值，为高端食用油生产企业提供优质原料,通过降低生产成本，提高企业经济效益和市场竞争力。具体实施方式实施例1(1)配制普通油酸含量和高油酸含量的F1组合以甘蓝型油菜品系甲A177为母本(油酸含量65％)【该材料的种子已于2009年11月20日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCCNO：P200908；该生物材料已在专利号为ZL2009102734352，申请公布号为CN101824472A，本申请中甘蓝型油菜品系甲A177已在本申请人的专利文献中公开，本申请不需要重新提交生物材料保藏与公开)，与创造的高油酸含量甘蓝型油菜甲H003为父本(2012年测定的油酸含量为80％。申请人将所述的父本命名为油菜高油酸种子甲H003，BrassicanapusL.甲H003，于2016年1月25日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种油菜高油酸品种的培育方法，其特征在于，包括下列步骤：(1)以油酸含量为65％或以下的甘蓝型油菜品系甲A177为母本与保藏号为CCTCC NO：P201604的油酸含量至少为78％的高油酸甘蓝型油菜品系甲H003为父本进行杂交，通过人工去雄，得到F1；(2)种植上步所得F1，通过小孢子培养获得分离的双单倍体(DH系)群体；(3)对DH系群体的每一个株系在苗期进行高油酸分子标记鉴定，确定每个株系的基因型；分子标记引物对的序列如下所示：正向引物5'‑CAGTTCACTCTCGGCAGC‑3'，反向引物5'‑GCAACTCCTTGGACAGCA‑3'；(4)利用气相色谱仪测定每个单株的油酸含量，确认各初选系的油酸含量；(5)种植种子中油酸含量大于75％的DH系，考察各株系的全株角果数、每角果粒数、千粒重和单株产量4个性状；筛选得到全株角果数、每角果粒数、千粒重和单株产量4个性状等于或优于种子中油酸含量小于69％的亲本的株系，获得种子中油酸含量大于78％的高油酸油菜选系和品种。

【技术特征摘要】
1.一种油菜高油酸品种的培育方法，其特征在于，包括下列步骤：
(1)以油酸含量为65％或以下的甘蓝型油菜品系甲A177为母本与保藏号为CCTCCNO：
P201604的油酸含量至少为78％的高油酸甘蓝型油菜品系甲H003为父本进行杂交，通过人工
去雄，得到F1；
(2)种植上步所得F1，通过小孢子培养获得分离的双单倍体(DH系)群体；
(3)对DH系群体的每一个株系在苗期进行高油酸分子标记鉴定，确定每个株系的基因
型；
分子标记引物对的序列如下所示：
正向引物5'-CAGTTCAC...

【专利技术属性】
技术研发人员：周永明，蔡光勤，赵青，杨庆勇，范楚川，张椿雨，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42