一种T细胞受体活化剂多肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及药物领域，具体涉及具有促进促进T细胞受体的激活，治疗恶性肿瘤的多肽。其序列为全新的序列，它们可以抑制套细胞淋巴瘤Mino细胞增殖活力，也可以抑制人胰腺癌细胞ASPC‑1，MiapacaⅡ的增殖。在体内试验显示本发明专利技术多肽可以加强5‑氟尿嘧啶对荷瘤S180小鼠抗肿瘤作用，延长荷瘤小鼠的存活期；同时，单独使用本发明专利技术多肽也可提高荷瘤小鼠生存率。具有潜在的新药开发价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及T细胞受体活化剂多肽及其应用，具体涉及具有促进T细胞受体的激活，治疗恶性肿瘤的多肽。
技术介绍
T细胞受体(Tcellreceptor，TCR)，即T细胞抗原受体：是T细胞特异性识别和结合抗原肽-MHC分子的分子结构，通常与CD3分子呈复合物形式存在于T细胞表面。T细胞受体的主要功能是在识别特异抗原后激活T细胞。T细胞激活的过程属于跨膜信号传递，由众多的分子和生化反应共同完成。细胞内信号传递最常见的方式是由激酶和磷酸酶所主导的蛋白磷酸化和去磷酸化。CD3和ζ亚基的胞内区域有许多免疫受体酪氨酸激活基序（en:immuno-receptortyrosine-basedactivationmotifs，ITAM）。在T细胞受体被激活后，这些序列中的酪氨酸被Src激酶家族磷酸化，从而实现了信号的跨膜传递。2003年发表于《新英格兰医学杂志》的一项研究发现，肿瘤浸润T细胞数量与宫颈癌患者的总生存期及无进展生存期相关，证实了肿瘤特异性T细胞的存在，表明免疫系统是可以识别肿瘤并试图控制其生长的。因此，肿瘤细胞的免疫系统是通过特异性T细胞受体激活来实现。现阶段，多采用细胞因子和单克隆抗体激活T细胞受体，但都存在分子量大，引起免疫抵抗，从而中和抗体的作用。因此，专利技术人希望设计和制备分子量较小的T细胞受体活化剂多肽，克服大分子细胞因子和单克隆抗体的临床使用缺陷。目前，没有成熟开发的T细胞受体活化剂多肽问世，用于治疗恶性肿瘤。
技术实现思路
专利技术目的本专利技术提供全新的序列，该序列为T细胞受体活化剂，对恶性肿瘤具有很好的疗效。技术方案T细胞受体活化剂多肽，其特征在于其序列为SEQIDNO：1。T细胞受体活化剂多肽在治疗恶性肿瘤，如套细胞淋巴瘤和胰腺癌药物中的应用。有益效果利用固相合成法化学合成T细胞受体活化剂多肽，该多肽具有全新的序列，该多肽可促进T细胞受体的激活，治疗恶性肿瘤，如套细胞淋巴瘤和胰腺癌。我们发现的T细胞受体活化剂多肽可以抑制套细胞淋巴瘤Mino细胞增殖活力，也可以抑制人胰腺癌细胞ASPC-1，MiapacaⅡ的增殖。在体内试验显示本专利技术多肽可以加强5-氟尿嘧啶对荷瘤S180小鼠抗肿瘤作用，延长荷瘤小鼠的存活期；同时，单独使用本专利技术多肽也可提高荷瘤小鼠生存率。具有潜在的新药开发价值。具体实施方式实施例1T细胞受体活化剂多肽延长5-氟尿嘧啶对实体瘤S180小鼠的存活期的影响。取于昆明种小鼠腹腔传代S180后第8天的腹水瘤细胞液，无菌0.9%氯化钠注射液稀释，使浓度为2.5×107/mL，每只小鼠腹腔接种5×106/0.2mL。将实验动物随机分为8组，每组10只，即模型对照组（0.6mL/mouseDW）、5-氟尿嘧啶组（20mg/kg，腹腔注射）、T细胞受体活化剂多肽（上海生工合成）低、中、高（5、10、20mg/Kg，尾静脉注射）及其联合5-氟尿嘧啶组。接种第2天开始给药，1次/d，共14天。停药后观察至小鼠死亡，记录小鼠生存时间。观察小鼠精神状态、活动、饮食、毛发、粪便等一般状况以及小鼠的生存情况，并记录生存时间，并按下述公式计算生命延长率：生命延长率=（实验组平均生存天数/对照组平均生存天数-1）×100%。按公式Q=EAB/（EA+EB－EA×EB）计算联合用药Q值，判断联合用药疗效。（注：公式中EA为A药生命延长率，EB为B药生命延长率，EAB为两药合用生命延长率，Q=0.85-1.15，为两药合用作用相加，Q>1.15为两药合用作用增强，Q<0.85为两药合用作用拮抗。）结果显示，T细胞受体活化剂多肽对5-氟尿嘧啶的生命延长率为Q>1.13，可见T细胞受体活化剂多肽和5-氟尿嘧啶联用可以延长荷瘤S180小鼠的存活期，具有相加的作用。实施例2用肿瘤模型检测T细胞受体活化剂多肽的体内活力。建立套细胞淋巴瘤肿瘤模型，阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂，实验组多肽(上海生工合成)设3个剂量：5、10、20mg/Kg。21天后，观察小鼠存活数量，计算存活率。结果显示，T细胞受体活化剂多肽可有效地保护小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率达到79.1%。实施例3T细胞受体活化剂多肽对体外培养人套细胞淋巴瘤细胞的生长和存活IC50。采用MTT比色法。将对数生长的人套细胞淋巴瘤Mino细胞，以1.0×105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物T细胞受体活化剂多肽(上海生工合成)和阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h后，每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶标仪620nm处测定吸光度A值，按公式人套细胞淋巴瘤Mino细胞生长抑制率＝（1-实验组吸光值/对照组吸光值）×100％。计算出实验药物的IC50为7.97μM。实施例4T细胞受体活化剂多肽人胰腺癌细胞ASPC-1增殖的作用。采用MTT比色法。将对数生长的ASPC-1细胞，以1.0×105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物T细胞受体活化剂多肽和阳性对照药物长春新碱；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶标仪620nm处测定吸光度A值，按公式肿瘤细胞生长抑制率＝（1-实验组吸光值/对照组吸光值）×100％。计算出实验药物的IC50为14.43μM。当浓度为14.43μM时，对ASPC-1增殖抑制率为75.32%。实施例5T细胞受体活化剂多肽人胰腺癌细胞MiapacaⅡ增殖的作用。采用MTT比色法。将对数生长的MiapacaⅡ细胞，以1.0×105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物T细胞受体活化剂多肽和阳性对照药物长春新碱；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶标仪620nm处测定吸光度A值，按公式肿瘤细胞生长抑制率＝（1-实验组吸光值/对照组吸光值）×100％。计算出实验药物的IC50为6.54μM。当浓度为6.54μM时，对MiapacaⅡ增殖抑制率为79.31%。SEQUENCELISTING<110>苏州普罗达生物科技有限公司<120>一种T细胞受体活化剂多肽及其应用<130><160>1<170>PatentInversion3.3<210>1<211>29<212>PRT<213>人工序列<400>1SerGluValThrAlaValGluGlyAlaIleValGlnIleAsnCysThr151015TyrGlnThrSerAlaAlaAlaGlyPheTyrGlyLeuSer2025本文档来自技高网...

【技术保护点】
T细胞受体活化剂多肽，其特征在于其序列为SEQ ID NO：1。

【技术特征摘要】
1.T细胞受体活化剂多肽，其特征在于其序列为SEQIDNO：1。2.T细胞受体活化剂多肽在治疗恶性肿瘤的应用。3.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗瑞雪，
申请(专利权)人：苏州普罗达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32