一种用于流式细胞术检测动物细胞表型和比例的验证方法技术

本发明专利技术提供一种用于流式细胞术检测动物细胞表型和比例的验证方法，包括如下步骤：步骤一、准备待测细胞，调整到预定细胞浓度，分成多组备用；步骤二、取步骤一中的一组细胞作为空白对照组、另取多组根据流式细胞检测的需要分别进行抗体标记；步骤三、取步骤二中作为实验组的抗体标记后的细胞，按照预定浓度梯度进行稀释，形成抗体标记细胞的浓度梯度组；步骤四、按流式细胞检测的顺序进行上机检测；步骤五、取检测值结果拟合，若拟合曲线为线性曲线，说明此种细胞使用流式细胞检测方法得到的结果准确；若拟合曲线不是线性曲线则说明此种细胞不适宜使用流式细胞检测方法。本发明专利技术所提供的方法能够简便的验证一种细胞是否适合作用流式细胞仪做检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于流式细胞术检测动物细胞表型和比例的验证方法，属于细胞检测领域。
技术介绍
流式细胞检测方法一种在液流系统中，快速测定单个细胞或细胞器的生物学性质，并把特定的细胞或细胞器从群体中加以分类收集的技术。其特点是通过快速测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收来定量测定细胞DNA含量、细胞体积、蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原等许多重要参数。但是一种细胞使用流式细胞检测方法进行检测之后，所得到的结果是否准确，或者说，一种细胞是否适合使用流式细胞检测仪进行检测，目前并没有可靠的方法来验证。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种流式细胞的检测验证方法，以验证流式细胞检测的准确性。本专利技术采用了如下技术方案：一种用于流式细胞术检测动物细胞表型和比例的验证方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、准备待测细胞，调整到预定细胞浓度，分成多组备用；步骤二、取步骤一中的一组细胞作为空白对照组、另取多组根据流式细胞检测的需要分别进行抗体标记；步骤三、取步骤二中作为实验组的抗体标记后的细胞，按照预定浓度梯度进行稀释，形成抗体标记细胞的浓度梯度组；步骤四、按流式细胞检测的顺序进行上机检测；步骤五、取各浓度梯度组上机检测后的检测值和步骤三中的浓度梯度分别作为横轴和纵轴描点，拟合，若拟合曲线为线性曲线，则说明此种细胞使用流式细胞检测方法得到的结果是准确的；若拟合曲线不是线性曲线则说明此种细胞使用流式细胞检测方法所得到的结果是不准确的。进一步，本专利技术的一种用于流式细胞术检测动物细胞表型和比例的验证方法，还可以具有这样的特征:步骤二中，抗体标记方案包含空白对照管、单独抗体染色管、多重抗体染色管以及同型抗体染色管；进一步，本专利技术的用于流式细胞术检测动物细胞表型和比例的验证方法，还可以具有这样的特征：步骤五中，细胞特征表型的比例是否存在线性关系的判定，比例结果对于流式检测方法的适用性起到确认作用。专利技术的有益效果根据本专利技术的用于流式细胞术检测动物细胞表型和比例的验证方法，由于采用了首先对待检细胞制作浓度梯度，上机检测后进行曲线拟合，若存在线性关系，则说明此种细胞使用流式细胞检测的结果是准确的，若不存在线性关系，则说明此种细胞使用流式细胞检测的结果是不准确的，不适宜使用流式细胞仪进行检测。附图说明图1是具体实施方式中CIK细胞的梯度浓度细胞使用流式细胞仪检测的结果，其中，图1A是含有100％的已染细胞的流式检测结果图；图1B是含有50％的已染细胞的流式检测结果图；图1C是含有25％的已染细胞的流式检测结果图；图1D是含有12.5％的已染细胞的流式检测结果图。图2是梯度浓度细胞的拟合曲线。具体实施方式以下以CIK细胞为例来描述本专利技术的具体实施方式。本实施方式以检测CIK细胞表型来验证CIK细胞使用流式细胞仪检测的结果是否真实可靠。1.准备1.1待测细胞的准备取培养至适当状态的CIK细胞培养液5ml，以2000rpm，10min方式离心后，弃上清，留取沉淀。1.2分装将上述沉淀物以生理盐水重悬，并分装至离心管内，每支离心管中细胞悬液量为100μl；另备细胞悬液用于细胞稀释。2.染色2.1抗体标记将各离心管中按照下列方式进行编号和添加抗体标记：表1：各离心管的标记方式试管编号抗体标记方式1空白2FITCIsotypeIgG1ctr5μl；PEIsotypeIgG1ctr5μl3FITCanti-humanCD35μl4PEanti-humanCD565μl5FITCanti-humanCD35μl；PEanti-humanCD565μl2.2重悬添加抗体后，避光染色30min，取出离心管，以2000rpm，10min方式离心后，弃上清，沉淀中加入500μl生理盐水进行细胞重悬；之前准备的细胞稀释悬液以2000rpm，10min方式离心后，弃上清，沉淀中加入5倍体积的生理盐水进行重悬；2.3细胞浓度梯度设置将5号试管中的已染细胞按照以下方式，用含有未染色细胞的细胞稀释悬液，进行细胞梯度设置：表2：细胞梯度设置表试管编号已染细胞所占体积比例1-1-1100％1-0.5-150％1-0.25-125％1-0.125-112.5％3.检测3.1步骤将已设置好浓度梯度的细胞悬液以及1号-4号试管进行上机检测：1号试管用于调节电压；2号试管用于选取门；3号、4号试管用于调节补偿；经调节完毕后，检测梯度浓度细胞悬液；3.2结果流式细胞检测结果如图1所示：图1：梯度浓度细胞检测结果：其中，图1A：含有100％的已染细胞；图1B：含有50％的已染细胞；图1C：含有25％的已染细胞；图1D：含有12.5的已染细胞。3.3.结果分析以细胞浓度梯度为横轴，以CIK细胞检测值为纵轴描点；对各描点进行拟合。得到图2。图2中的结果表明，以流式细胞学方式检测CIK细胞表型，CIK细胞梯度浓度悬液的检测结果显示出广泛区间的线性关系，因此，以流式细胞学方法检测CIK细胞表型，该方法有效。另外，当标记三种颜色的荧光时，只需要再增加一种荧光的染色管即可，同样的，当需要标记更多种荧光时，也仅需要按照流式细胞的要求增加相应的荧光染色管，仍然适用于本专利技术所提供的方法。另外，本专利技术还可以起到这样的作用：比如：流式最常用的是单抗标记，但是单抗价格较贵，那么，在一些定量实验中，或者在实验室中缺乏单抗，但是又急需做实验时，可以先采用多抗，用本专利技术的方法做一验证，如果结果有效，那么就可以采用多抗来做流式。因此本专利技术所提供的方法应当成为在使用流式细胞仪检测细胞之前的必要验证环节。上述实施方式仅作为说明本专利技术的验证方法的举例，利用本专利技术的方法对任何细胞所进行的流式细胞仪适用性的验证，均应包括在本专利技术的保护范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于流式细胞术检测动物细胞表型和比例的验证方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、准备待测细胞，调整到预定细胞浓度，分成多组备用；步骤二、取步骤一中的一组细胞作为空白对照组、另取多组根据流式细胞检测的需要分别进行抗体标记；步骤三、取步骤二中作为实验组的抗体标记后的细胞，按照预定浓度梯度进行稀释，形成抗体标记细胞的浓度梯度组；步骤四、按流式细胞检测的顺序进行上机检测；步骤五、取各浓度梯度组上机检测后的检测值和步骤三中的浓度梯度分别作为横轴和纵轴描点，拟合，若拟合曲线为线性曲线，则说明此种细胞使用流式细胞检测方法得到的结果是准确的；若拟合曲线不是线性曲线则说明此种细胞使用流式细胞检测方法所得到的结果是不准确的。

【技术特征摘要】
1.一种用于流式细胞术检测动物细胞表型和比例的验证方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、准备待测细胞，调整到预定细胞浓度，分成多组备用；步骤二、取步骤一中的一组细胞作为空白对照组、另取多组根据流式细胞检测的需要分别进行抗体标记；步骤三、取步骤二中作为实验组的抗体标记后的细胞，按照预定浓度梯度进行稀释，形成抗体标记细胞的浓度梯度组；步骤四、按流式细胞检测的顺序进行上机检测；步骤五、取各浓度梯度组上机检测后的检测值和步骤三中的浓度梯度分别作为横轴和纵轴描点，拟合，若拟合曲线为线性曲线，则说...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓明，杨珺，卫培培，裴丹丹，金宜强，
申请(专利权)人：上海安集协康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31