一种珙桐高效诱导丛生芽的组培快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种珙桐高效诱导丛生芽的组培快繁方法，具体步骤为：1）选择生长健壮、无病虫害、性状优良、侧芽形成且未展叶时的珙桐枝条为母株，加入GA3溶液中进行浸泡，至珙桐侧芽生长到3cm以上；2）剪取侧芽，进行消毒，然后接种于Wpm+KT1.2mg·L‑1+NAA0.3mg·L‑1+6‑BA0.5 mg·L‑1+琼脂3.5g·L‑1+蔗糖20g·L‑1+AC0.2g·L‑1的培养基内；培养18‑22d后芽点萌发生长，形成丛生芽。采用本发明专利技术提供的珙桐丛生芽诱导技术，方法简便，诱导周期短，繁殖系数高，对此国家一级珍稀濒危植物保护具有一定的促进作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物组培繁殖技术，具体为一种珙桐高效诱导丛生芽的组培快繁方法。
技术介绍
珙桐为落叶乔木。可生长到15～25米高，叶子广卵形，边缘有锯齿。色花奇美，是1000万年前新生代第三纪留下的孑遗植物，在第四纪冰川时期，大部分地区的珙桐相继灭绝，只有在中国南方的一些地区幸存下来，成为了植物界今天的“活化石”，被誉为“中国的鸽子树”，又称“鸽子花树”、“水梨子”，野生种只生长在中国四川省和湖北省周边地区。珙桐已被列为国家一级重点保护野生植物，为中国特有的单属植物，属孑遗植物，也是全世界著名的观赏植物。目前，珙桐的繁殖技术主要以播种育苗为主，但此方式存在以下不足：成苗周期长，出苗时间为3-10年；出苗率低、不整齐、易变异，对保存母株的优良性状有一定影响；同时需大量人力、物力及土地资源，生产成本高；综上所述，寻找出苗快捷，生产成本低的珙桐组培快繁方式，推动产业化生产具有必要性。西南师范大学邹丽娟在《植物研究》发表的《濒危植物珙桐的组织培养与植株再生》公开了一种采用珙桐侧芽直接诱导丛生芽的快繁方法，但此方法存在外植体采集时间受限、诱导时间长的缺点，并且其增值率和增殖倍数都有一定的提升空间；四川农业大学夏晗发表的《珙桐初代培养研究》和湖北民族大学罗世荣发表的《珙桐芽体组织培养研究》中都提到以珙桐侧芽为外植体进行芽诱导，但是都仅仅只能促使单芽萌发，不能诱导丛生芽。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种珙桐高效诱导丛生芽的组培快繁方法，其操作简便，诱导速度快，增殖系数高。为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：一种珙桐高效诱导丛生芽的组培快繁方法，包括以下步骤：1)选择生长健壮、无病虫害、性状优良、侧芽形成且未展叶时的珙桐枝条为母株，加入GA3溶液中进行浸泡，至珙桐侧芽生长到3cm以上；2)剪取侧芽，进行消毒，然后接种于Wpm+KT1.2mg·L-1+NAA0.3mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+琼脂3.5g·L-1+蔗糖20g·L-1+AC0.2g·L-1的培养基内；培养18-22d后芽点萌发生长，形成丛生芽。对珙桐枝条进行采集及处理的时间为当年的9月至次年的3月。优选的，对珙桐枝条进行采集及处理的时间为3月份。此时为侧芽即将自然萌动时，萌发率，芽长生长快。步骤1)中珙桐枝条是截取当年生从上往下至第5个侧芽的枝条。步骤1)中浸泡时采用100mg/L的GA3溶液，每5天换一次溶液。步骤2)中剪取的侧芽含有1-2mm木质部。步骤2)中消毒时，先流水冲洗1h，采用质量浓度0.4％洗衣粉浸泡4-6min，然后采用体积浓度75％酒精浸泡20s，无菌水冲洗2次，再用质量浓度0.1％Hgcl2浸泡3-5min，最后无菌水冲洗4次即可。培养的环境为温度25±1℃、湿度75±2％、光照12-14h/d、光强1800-2200lx。步骤1)中的浸泡过程在室外进行处理，GA3溶液高度4-6cm；浸泡部位为枝条基部。所述的Wpm为木本植物培养基，其中大量元素10倍为：Ca(NO3)·4H2O5.56g/L、NH4NO33.50g/L、K2SO39.9g/L、MgSO4·7H2O3.20g/L、KH2PO41.70g/L、CaCl20.725g/L；微量元素100倍为：MnSO4·4H2O2.23g/L、ZnSO4·7H200.86g/L、H3BO30.62g/L、CuSO4·5H2O0.025g/L、Na2MoO4·2H2O0.025g/L；铁盐100倍为：FeSO4·7H2O2.78g/L、Na2-EDTA3.72g/L；有机100倍为：盐酸硫胺素VB10.1g/L、盐酸吡哆醇VB60.05g/L、烟酸VB50.05g/L、甘氨酸0.2g/L、肌醇10g/L。由于珙桐侧芽存在长短枝现象，导致室内培养时芽不伸长，不分化，浪费人力物力，也影响研究结果。本专利技术采取室外激素预处理方法，通过GA3进行浸泡预处理，能简单有效甄别长短枝芽问题，还能一定程度上促进短枝芽萌发伸长，对珙桐侧芽萌发有明显促进作用，对芽伸长也有明显的促进作用。现行珙桐侧芽诱导时都是采取剥芽后再诱导萌发伸长，而GA3溶液预处理，可减少实验室剥芽环节，直接进行丛生芽诱导工序，从而减少了实验过程中人力和物力的消耗，提高了工作效率，节约了生产成本。接种培养时采用的培养基能直接让侧芽诱导丛生芽，诱导时间缩短至20天，平均增值倍率为5.2。此培养基中是以KT为主要影响因素，同时降低琼脂、蔗糖含量至3.5g、20g，并添加少量AC，能明显促进珙桐侧芽诱导丛生芽。由于采用GA3预处理，打破休眠，促进生长；经过多次试验表明，KT对珙桐生长分化具有较强的促进作用；降低琼脂、蔗糖浓度能加强培养基内养分流动，促进其生长分化；实现直接诱导。采用本专利技术提供的珙桐丛生芽诱导技术，方法简便，诱导周期短，繁殖系数高，对此国家一级珍稀濒危植物保护具有一定的促进作用。附图说明图1为实施例2中珙桐带侧芽枝条室外激素浸泡处理的照片。图2为实施例2中处理后侧芽接种7d时生长情况。图3为实施例2中处理后侧芽接种15d时生长情况。图4为实施例2中处理后侧芽接种30d时生长情况。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐明本专利技术。实施例1：1)选择生长健壮、无病虫害、性状优良、侧芽形成且未展叶时的珙桐枝条为母株，加入GA3溶液中进行浸泡，至珙桐侧芽生长到3cm以上；2)剪取侧芽，进行消毒，然后接种于Wpm+KT1.2mg·L-1+NAA0.3mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+琼脂3.5g·L-1+蔗糖20g·L-1+AC0.2g·L-1的培养基内；培养18-22d后芽点萌发生长，形成丛生芽。实施例2：1)选择生长健壮、无病虫害、性状优良、侧芽形成且未展叶时的珙桐枝条为母株，加入100mg/L的GA3溶液中进行浸泡，每5天更换浸泡溶液，至珙桐侧芽生长到3cm以上；如图1所示；2)剪取侧芽，剪取时基部带1-2mm木质部，进行消毒，具体是先流水冲洗1h，0.4％洗衣粉浸泡4-6min，后在操作台进行75％酒精浸泡20s，无菌水冲洗2次，0.1％Hgcl2浸泡3-5min，无菌水冲洗4次，完成消毒工序；然后接种于Wpm+KT1.2mg·L-1+NAA0.3mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+琼脂3.5g·L-1+蔗糖20g·L-1+AC0.2g·L-1的培养基内；培养环境为温度25±1℃、湿度75±2％、光照12-14h/d、光强1800-2200lx的恒定温湿度的培养室内；培养5-7d后侧芽基部开始膨胀，侧芽继续伸长，培养10-14d后侧芽基部产生3-7个芽点，18-22d后芽点芽点萌发生长，形成丛生芽，丛生芽诱导率达92％，平均增值倍数为5.2，如图2-4所示。所述的Wpm为木本植物培养基，其中大量元素10倍为：Ca(NO3)·4H2O5.56g/L、NH4NO33.50g/L、K2SO39.9g/L、MgSO4·7H2O3.20g/L、KH2PO41.70g/L、CaCl20.725g/L；微量元素100倍为：MnSO4·4H2O2.23g/L、ZnSO4·7H200.86g/L、H3BO30.62g/L、CuSO4·5H2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种珙桐高效诱导丛生芽的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：1）选择生长健壮、无病虫害、性状优良、侧芽形成且未展叶时的珙桐枝条为母株，加入GA3溶液中进行浸泡，至珙桐侧芽生长到3cm以上；2）剪取侧芽，进行消毒，然后接种于Wpm+KT1.2mg·L‑1+NAA0.3 mg·L‑1+6‑BA0.5 mg·L‑1+琼脂3.5g·L‑1+蔗糖20g·L‑1+AC0.2g·L‑1的培养基内；培养18‑22d后芽点萌发生长，形成丛生芽。

【技术特征摘要】
1.一种珙桐高效诱导丛生芽的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：1）选择生长健壮、无病虫害、性状优良、侧芽形成且未展叶时的珙桐枝条为母株，加入GA3溶液中进行浸泡，至珙桐侧芽生长到3cm以上；2）剪取侧芽，进行消毒，然后接种于Wpm+KT1.2mg·L-1+NAA0.3mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+琼脂3.5g·L-1+蔗糖20g·L-1+AC0.2g·L-1的培养基内；培养18-22d后芽点萌发生长，形成丛生芽。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：对珙桐枝条进行采集及处理的时间为当年的9月至次年的3月。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：对珙桐枝条进行采集及处理的时间为3月份。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中珙桐枝条是截取当年生从上往下至第5个侧芽的枝条。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中浸泡时采用100mg/L的GA3溶液，每5天换一次溶液。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2）中剪取的侧芽含有1-2mm木质部。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2）中消毒时，先流水冲洗1h，采用质量浓度为0.4%洗衣粉浸泡4-6min，然后采用体积浓度为75%酒精浸泡20s，无菌水冲洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴笛，张国禹，黄桂云，张海波，马晓波，邱利文，汪磊，杨兰芳，吴锦华，李翩翩，
申请(专利权)人：中国长江三峡集团公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42