本发明专利技术属于微生物领域，具体涉及一种肠炎沙门菌基因敲除减毒突变株及其制备与应用。本发明专利技术首先提供一种肠炎沙门菌sptP基因敲除减毒株，为sptP基因不表达的肠炎沙门菌。本发明专利技术成功研制了一种肠炎沙门菌sptP基因敲除减毒株，本发明专利技术通过动物试验发现，所述突变株毒力显著降低，对强毒力肠炎沙门菌提供良好的保护作用，可有效清除强毒力菌株感染。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物领域，具体涉及一种肠炎沙门菌基因敲除减毒突变株及其制备与应用。
技术介绍
沙门菌是人兽共患病原菌，能引起食物中毒、肠胃炎、伤寒和败血症等。沙门菌具有多种不同的血清型，可分为宿主适应血清型和非宿主适应血清型。肠炎沙门菌作为沙门菌一种常见血清型，在禽类中有较高的分离率，极易污染禽肉类、鱼类奶制品和蛋制品等，能引起人类肠胃炎等疾病。当前，对沙门菌的防治主要是使用抗生素，但是随着抗生素的大量使用，沙门菌的耐药性也逐渐增强。疫苗接种是目前控制人和动物沙门菌病的有效措施之一，其中减毒活疫苗因能产生较高的免疫保护而成为研究热点。近年来，沙门菌已有多个毒力相关基因被鉴应用于构建毒力基因缺失的减毒菌株，这些减毒株对人和动物的致病力显著降低，但其仍保持较好的免疫原性。现代分子生物学技术的发展使得我们可以通过基因敲除技术构建遗传背景清除的减毒疫苗株。这种方式往往需要对影响细菌生长的某些重要基因或者与细菌致病性有关的毒力基因进行敲除操作。
技术实现思路
鉴于以上现有技术的情况，本专利技术的目的在于提供一种肠炎沙门菌基因敲除减毒突变株及其制备与应用。为了实现上述目的以及其他相关目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供一种肠炎沙门菌sptP基因敲除减毒株，为sptP基因不表达的肠炎沙门菌。优选的，所述肠炎沙门菌sptP基因敲除减毒株，为sptP基因被敲除的肠炎沙门菌。野生型肠炎沙门菌(Salmonellaenteritidis)为现有技术，具体可使用的肠炎沙门菌包括但不限于：野生型肠炎沙门菌C50336。所述野生型肠炎沙门菌C50336来源：中国医学微生物菌种保藏管理中心，保藏编号CMCC(B)50336。sptP基因为现有技术。野生型肠炎沙门菌C50336的sptP基因的阅读框序列如SEQIDNO:1所示。具体为：1atgctaaagtatgaggagagaaaattgaataatttaacgttgtcttcgttttcaaaagtt61ggtgtgtcgaatgatgcccgactttatattgctaaggaaaatactgataaggcatatgtt121gcgcctgaaaaattttcgtcaaaagtattaacctggcttggaaaaatgccgttatttaaa181aacactgaagtggtgcaaaaacatacggaaaatatcagagtacaggaccaaaagatttta241cagacatttctccatgcactaacggaaaaatatggggaaacagcggttaatgacgcactg301ttaatgtcccgtataaatatgaacaaaccccttacccaacgtttagcagtgcagatcacg361gagtgtgtaaaagctgctgacgaagggtttataaaccttattaagagcaaggataatgtt421ggtgtcaggaatgccgctttagtcataaaaggcggcgatacaaaagtggcagaaaaaaat481aacgatgttggagcagaaagtaagcaacctttactcgatatcgcgctaaagggacttaaa541agaacattaccgcaactggaacaaatggatggaaatagcctgcgagaaaacttccaggag601atggcttcaggtaacggcccgctgcgttcattaatgacgaatttacagaatttaaataaa661attccagaggctaaacaacttaatgattatgttacaacgttaacaaatattcaggtcggt721gtagcccggttctcacaatggggaacctgtggaggagaggttgagaggtgggttgataaa781gcctctactcatgaattaacccaggctgtaaaaaaaattcacgttattgctaaagaactg841aaaaatgttacagctgaacttgagaaaatagaagccggcgcgccaatgccacagacgatg901agcggaccgacactgggcctggcacggtttgcggtcagcagcattccaattaatcagcaa961acccaggtgaaactgagcgatggaatgcctgtgccagtgaatacgttaacttttgacggt1021aagcctgtggcattagccggttcgtacccaaaaaatacgccggatgcgctggcagcgcat1081atgaaaatgcttcttgaaaaagaatgctcatgcctggtggtgttaacgtcggaagatcag1141atgcaggcaaaacaattaccaccctatttcagagggagctacacctttggcgaggtgcat1201accaacagccaaaaagtgagctcagccagtcagggagaagcgatagaccaatacaatatg1261caactgtcctgcggggaaaagcggtatacaatcccggtattgcatgtgaaaaattggcca1321gatcaccagccgttaccgtctacggatcagttagaatacctggcggatagggtgaaaaat1381agtaaccaaaatggcgcgccggggcgtagttcatcagataagcatttaccgatgattcat1441tgtctgggcggagtggggagaaccggaacgatggcggcggcccttgtacttaaggataat1501cctcatagtaatctggagcaggtacgtgcagatttccggaattcacggaacaatagaatg1561ctggaagacgcctcacagtttgtacaactaaaagcaatgcaagcccagttgcttatgacg1621acggcacgctga。只要将肠炎沙门菌中的sptP基因进行敲除，使得sptP基因不表达，即可获得肠炎沙门菌sptP基因敲除减毒株。优选地，本专利技术一实施例中，被敲除的sptP基因的序列如SEQIDNO.1所示。进一步地，所述减毒株还可经过其他基因改造。所述的其他基因改造是指除sptP基因敲除以外的基因改造。所述其他基因改造可以是单个目标基因的改造或者为多个感兴趣目标基因的改造。感兴趣目标基因并不特指，可以根据研究需要设定并改造。例如，可以是一个、两个、三个以上目标基因的改造。理论上可以不断对其进行基因改造，对于目标基因的改造数量可以按照需要操作，没有特别限制。基因改造具体是指通过生物或化学或物理的手段使基因相比改造前在结构上发生变化。这种变化主要是指碱基对组成的变化，包括但不限于一个或多个碱基对的替换、增添、缺失引起的改变。所述基因改造包括但不限于目标基因的敲入、目标基因的敲除等。目标基因的敲入、目标基因的敲除可以采用基因打靶、同源重组等技术来完成。优选地，本专利技术一实施例中，如SEQIDNO.1所示的sptP基因被敲除并替换为如SEQIDNO:3所示的序列。如SEQIDNO:3所示的序列具体为：GTGTAGGCTGGAGC本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肠炎沙门菌sptP基因敲除减毒株，为sptP基因不表达的肠炎沙门菌。
【技术特征摘要】
1.一种肠炎沙门菌sptP基因敲除减毒株，为sptP基因不表达的肠炎沙门菌。2.根据权利要求1所述的肠炎沙门菌sptP基因敲除减毒株，为sptP基因被敲除的肠炎沙门菌。3.根据权利要求2所述的肠炎沙门菌sptP基因敲除减毒株，其特征在于，被敲除的sptP基因的序列如SEQIDNO.1所示。4.根据权利要求2所述的肠炎沙门菌sptP基因敲除减毒株，其特征在于，被敲除的sptP基因替换为如SEQIDNO:3所示的序列。5.如权利要求1～4任一权利要求所述肠炎沙门菌sptP基因...
【专利技术属性】
技术研发人员：焦新安，潘志明，蔺志杰，汤佩佩，焦扬，李求春，耿士忠，陈祥，黄金林，殷月兰，孙林，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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