一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法技术

本发明专利技术涉及一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，包括(1)样品制备、(2)准备工作、(3)进样和(4)检测分析四个步骤。通过改变背压阀的压力、改性剂的比例、色谱柱的温度以及流动相的流速可以有效地提高玛咖酰胺的分离效果。超临界色谱分析方法兼有气相色谱和液相色谱的特点，既可分析气相色谱不适应的高沸点、低挥发性样品，又比高效液相色谱有更快的分析速度和条件，解决了现有技术中方法的局限性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术具体涉及一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法。
技术介绍
玛咖(LepidiummeyeniiWalp.)为十字花科(Brassicaceae)独荇菜属(LepidiumL.)一年生草本植物，原产于南美洲秘鲁的安第斯山区。因丰富的营养价值与药用价值，玛咖在安第斯山区具有长期的种植和食用历史。2011年，我国卫生部批准玛咖为新资源食品。近20年来，许多研究证明了玛咖具有提高人畜生育能力、改善性功能、抑制前列腺增大、抗疲劳、抗抑郁、改善骨质疏松、提高记忆力等作用。我国于2002年开始在云南丽江进行育种和种植，并获得成功，此后在西藏、新疆、青海等多地均有种植。由于玛咖营养丰富、功效多样以及人们的健康意识日益增强，近年来玛咖产业规模迅速发展壮大，进而促进了对玛咖化学成分及其活性的深入研究。玛咖中含有多种次生代谢产物，玛咖酰胺为目前仅在玛咖中发现的一类化合物，作为玛咖特有成分而备受关注。自2000年起，已相继有22种玛咖酰胺被分离鉴定，但有关玛咖酰胺类有效成分分析检测方面的研究报道较少。
技术实现思路
本专利技术提出了一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，它兼有气相色谱和液相色谱的特点，既可分析气相色谱不适应的高沸点、低挥发性样品，又比高效液相色谱有更快的分析速度和条件，突破了现有技术中方法的局限性。本专利技术的技术方案是这样实现的，一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，包括以下步骤：(1)样品制备：样品包括N-苄基十六烷酰胺(玛咖酰胺B)标准品和N-(3-甲氧基-苄基)-(9Z，12Z)-十八烷二烯酰胺标准品，采用极性溶剂配制成一定浓度的混标溶液，即为进样液；(2)准备工作：打开CO2气阀，启动超临界色谱系统，等待背压阀的压力和冷却温度达到设定值，设置色谱柱的温度，背压阀的压力，以及流动相的流速；(3)进样：将步骤(1)制备的进样液注入到超临界色谱系统中；(4)检测分析：通过紫外检测器检测收集进样液的信号，并进行采集分析。优选的，所述的一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，所述步骤(1)中的极性溶剂为甲醇溶液。优选的，所述的一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，所述步骤(2)中色谱柱的温度为32℃～45℃。优选的，所述的一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，所述步骤(2)中背压阀的压力为10MPa～18MPa。优选的，所述的一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，所述步骤(2)中的流动相为超临界CO2-改性剂。更优的，所述的一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，所述步骤(2)中改性剂为无水乙醇。更优的，所述的一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，所述步骤(2)中无水乙醇的比例，相对于流动相的流速，为3％～8％。优选的，所述的一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，所述步骤(2)中流动相的流速为2～5mL/min。优选的，所述的一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，所述步骤(3)中进样液的进样量为1～5uL。更优的，所述的一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，所述步骤(3)中进样液的进样量为2uL。本专利技术的有益效果是：本专利技术提出了一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，它兼有气相色谱和液相色谱的特点，既可分析气相色谱不适应的高沸点、低挥发性样品，又比高效液相色谱有更快的分析速度和条件，解决了现有技术中方法的局限性。附图说明图1是本专利技术实施例3中的超临界色谱图；图2是本专利技术实施例4中的超临界色谱图；图3是本专利技术实施例5中的超临界色谱图；图4是本专利技术实施例6中的超临界色谱图。具体实施方式为更好地理解本专利技术，下面通过以下实施例对本专利技术作进一步具体的阐述，但不可理解为对本专利技术的限定，对于本领域的技术人员根据上述
技术实现思路
所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本专利技术的保护范围内。实施例1一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，包括以下步骤：(1)样品制备：样品包括N-苄基十六烷酰胺(玛咖酰胺B)标准品和N-(3-甲氧基-苄基)-(9Z，12Z)-十八烷二烯酰胺标准品，采用甲醇配制成混标溶液；(2)准备工作：打开CO2气阀，启动超临界色谱系统，等待背压阀的压力和冷却温度达到设定值，设置色谱柱的温度为40℃，背压阀压力为10MPa，以及流动相的流速为2～5mL/min，流动相为超临界CO2-改性剂，改性剂为无水乙醇，相对于流动相的流速，无水乙醇的比例为3％～8％；(3)进样：将步骤(1)制备的进样液注入到超临界色谱系统中，进样量为1～5uL；(4)检测分析：通过紫外检测器检测收集进样液的信号，并进行采集分析。所述超临界色谱系统的型号为岛津NexeraUC，包括LC-30ADSF二氧化碳输送泵，LC-20ADXR输液泵，DGU-20A5在线脱气机，SIL-30AC自动进样器，CTO-20AC柱温箱，CBM-20A系统控制器，SFC-30A背压阀，SPD-20A紫外检测器以及LCMSsolutionVer.3.70色谱工作站。实施例2一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，包括以下步骤：(1)样品制备：样品包括N-苄基十六烷酰胺(玛咖酰胺B)标准品和N-(3-甲氧基-苄基)-(9Z，12Z)-十八烷二烯酰胺标准品，采用甲醇配制成混标溶液；(2)准备工作：打开CO2气阀，启动超临界色谱系统，等待背压阀的压力和冷却温度达到设定值，设置色谱柱的温度为40℃，背压阀压力为10MPa，以及流动相的流速为3mL/min，流动相为超临界CO2-改性剂，改性剂为无水乙醇，相对于流动相的流速，无水乙醇的比例为3.4％，即无水乙醇的流速为1.02mL/min；(3)进样：将步骤(1)制备的进样液注入到超临界色谱系统中，进样量为2uL；(4)检测分析：通过紫外检测器检测收集进样液的信号，并进行采集分析。实施例3分离度又称分辨率，为了判断分离物质在色谱柱中的分离情况，常用分离度作为柱的总分离效能指标。分离度越高，物质的分离效果越好。分离度用R表示，R等于相邻色谱峰保留时间之差与两色谱峰峰宽均值之比，其计算公式为：R＝2(tR2-tR1)/(W1+W2)。其中，tR2：相邻两峰中后一峰的保留时间；tR1：相邻两峰中前一峰的保留时间；W1、W2：此相邻两峰的峰宽。理论塔板数简称柱效，取决于固定相的种类、性质(粒度、粒径分布等)、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。理论塔板数越大，柱效越好。理论塔板数用N表示，N＝16×(t/W)2。其中，t是溶质从进样到最大洗脱峰出现的时间，W为该溶质的洗脱峰在基线处的宽度。在实施例2基础上，通过改变背压阀的压力，得到相应进样液的超临界色谱图，如图1所示，并且计算了相应的分离度(R)、以及分离N-苄基十六烷酰胺(玛咖酰胺B)理论塔板数(N1)和分离N-(3-甲氧基-苄基)-(9Z，12Z)-十八烷二烯酰胺的理论塔板数(N2)，结果如表1：表1压力变化对分离效果的影响由表1可知，当压力为10MPa时，混标的R值、N1值、N2值可达到最佳状态，即色谱峰的分离度和理论塔板数有较好值，分离效果较好。实施例4在实施例2基础上，通过改变进样液中改性剂的比例，得到相应进样液的超临界色谱图，如图2所示，并且计算了相应的分离度(R)、以及分离N-苄基十六烷酰胺(玛咖酰胺B)理本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品制备：样品包括N‑苄基十六烷酰胺(玛咖酰胺B)标准品和N‑(3‑甲氧基‑苄基)‑(9Z，12Z)‑十八烷二烯酰胺标准品，采用极性溶剂配制成一定浓度的混标溶液，即为进样液；(2)准备工作：打开CO2气阀，启动超临界色谱系统，等待背压阀的压力和冷却温度达到设定值，设置色谱柱的温度，背压阀的压力，以及流动相的流速；(3)进样：将步骤(1)制备的进样液注入到超临界色谱系统中；(4)检测分析：通过紫外检测器检测收集进样液的信号，并进行采集分析。

【技术特征摘要】
1.一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品制备：样品包括N-苄基十六烷酰胺(玛咖酰胺B)标准品和N-(3-甲氧基-苄基)-(9Z，12Z)-十八烷二烯酰胺标准品，采用极性溶剂配制成一定浓度的混标溶液，即为进样液；(2)准备工作：打开CO2气阀，启动超临界色谱系统，等待背压阀的压力和冷却温度达到设定值，设置色谱柱的温度，背压阀的压力，以及流动相的流速；(3)进样：将步骤(1)制备的进样液注入到超临界色谱系统中；(4)检测分析：通过紫外检测器检测收集进样液的信号，并进行采集分析。2.根据权利要求1所述的一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，其特征在于：所述步骤(1)中的极性溶剂为甲醇溶液。3.根据权利要求1所述的一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析方法，其特征在于：所述步骤(2)中色谱柱的温度为32℃～45℃。4.根据权利要求1所述的一种玛咖酰胺类成分的超临界色谱分析...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘云，马晋芳，葛发欢，叶静，
申请(专利权)人：中山大学，广州中大南沙科技创新产业园有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44