一种单克隆抗体Q314及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种单克隆抗体Q314及应用。本发明专利技术保护的单克隆抗体Q314，为一种IgG抗体，由轻链和重链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-77位氨基酸残基和第116-135位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列5自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-72位氨基酸残基和第109-121位氨基酸残基。本发明专利技术对于埃博拉病毒扎伊尔亚型的防控具有重大的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种单克隆抗体Q314及应用。
技术介绍
埃博拉病毒是迄今为止人类所知的最致命传染性病毒之一，平均病死率高达50％左右。由于埃博拉出血热的高致死率，以及目前尚未有任何预防或治疗方法可在临床上广泛使用。埃博拉病毒被列为生物安全第四级(BiosafetyLevel4)病毒，同时被视为是生物恐怖主义的工具之一。2014春季年开始在西非各国暴发的埃博拉疫情引起了全世界的广泛关注。截止至2015年2月27日，埃博拉病毒确诊和疑似病例已经达到23825人，死亡人数达到9660人，美国和一些欧洲国家已经有输入性的传播，并有死亡病例。因此，防控埃博拉病毒是全球所有国家的头等大事。然而令所有人焦虑的是：到目前为止还没有一个被批准的埃博拉病毒疫苗和药物上市。由美国和加拿大联合开发的应急性治疗药物ZMapp是目前唯一在模式动物和小规模病人临床验证有效的药物。我国目前尚没有类似的应急药物，一旦有中国公民感染埃博拉病毒，后果不堪设想。紧急研制埃博拉病毒抗体对于我国乃至全球埃博拉病毒疫情的防控具有重要的意义，同时对社会的稳定和谐有着深远的影响。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种单克隆抗体Q314及应用。本专利技术保护的单克隆抗体Q314，为一种IgG抗体，由轻链和重链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-77位氨基酸残基和第116-135位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列5自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-72位氨基酸残基和第109-121位氨基酸残基。所述重链可为如下(a)或(b)：(a)序列表的序列3自N末端第20-474位氨基酸残基组成的蛋白质；(b)序列表的序列3所示的蛋白质。所述轻链可为如下(c)或(d)：(c)序列表的序列5自N末端第20-234位氨基酸残基组成的蛋白质；(d)序列表的序列5所示的蛋白质。本专利技术还保护编码所述IgG抗体的基因，其特征在于：编码所述重链的基因为如下(1)或(2)或(3)：(1)序列表的序列4自5’末端第889-2313位核苷酸所示的DNA分子；(2)序列表的序列4自5’末端第946-2313位核苷酸所示的DNA分子；(3)序列表的序列4所示的DNA分子；编码所述轻链的基因为如下(4)或(5)或(6)：(4)序列表的序列6自5’末端第889-1593位核苷酸所示的DNA分子；(5)序列表的序列6自5’末端第946-1593位核苷酸所示的DNA分子；(6)序列表的序列6所示的DNA分子。本专利技术还保护所述IgG抗体在制备用于抑制埃博拉病毒扎伊尔亚型的药物中的应用。本专利技术还保护一种用于抑制埃博拉病毒扎伊尔亚型的药物，其活性成分为所述IgG抗体。本专利技术还保护所述IgG抗体在制备用于中和埃博拉病毒扎伊尔亚型的药物中的应用。本专利技术还保护一种用于中和埃博拉病毒扎伊尔亚型的药物，其活性成分为所述IgG抗体。本专利技术还保护所述IgG抗体在制备用于预防和/或治疗埃博拉病毒扎伊尔亚型引起的埃博拉出血热的药物中的应用。本专利技术还保护一种用于预防和/或治疗埃博拉病毒扎伊尔亚型引起的埃博拉出血热的药物，其活性成分为所述IgG抗体。埃博拉病毒扎伊尔亚型又称扎伊尔埃博拉病毒，英文缩写为EBOV。本专利技术利用EBOV的GP△m蛋白作为钓饵，从免疫猴的外周血单个核细胞中筛选抗体生成的记忆B细胞，得到可同GP△m蛋白特异结合的单克隆抗体。通过EBOV假型病毒侵染模型，筛选得到了具有中和活性同时具有良好的特异性的的单克隆抗体。本专利技术对于扎伊尔埃博拉病毒的防控具有重大的应用价值，将产生深远的社会意义。附图说明图1为抗体对EBOV的中和活性的结果。图2为抗体对VSV的中和活性的结果。图3为抗体对HIV的中和活性的结果。图4为抗体对SUDV的中和活性的结果。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。质粒pcDNA3.1(+)：Invitrogen公司，产品目录号V790-20。293T细胞：盖德，CRL-11268。恒河猴：蓝岛生物。PMD18T载体：Takara，产品目录号D101A。VeroE6细胞：vircell公司，产品目录号VCV6。质粒pNL4-3R-E-luciferase(骨架质粒)：参考文献:HeJ,ChoeS,WalkerR,DiMarzioP,MorganDO,LandauNR.JVirol69:6705–6711,1995.。实施例1、抗体的发现一、GP△m蛋白的制备1、构建重组质粒(1)合成序列表的序列2所示的双链DNA分子。序列表的序列2所示的双链DNA分子编码序列表的序列1所示的蛋白质，其中开放阅读框为序列2自5’末端第18-1451位核苷酸。序列表的序列1中，自N末端第1至19位氨基酸残基组成信号肽，第472至477位氨基酸残基组成His6标签。序列表的序列1所示的蛋白质的预期分子量为200kDa。(2)用限制性内切酶BamHI和NotI双酶切步骤1得到的双链DNA分子，回收酶切产物。(3)用限制性内切酶BamHI和NotI双酶切质粒pcDNA3.1(+)，回收约5400bp的载体骨架。(4)将步骤2回收的酶切产物和步骤3回收的载体骨架连接，得到重组质粒pcDNA3.1-GP△m。根据测序结果，对重组质粒pcDNA3.1-GP△m进行结构描述如下：在质粒pcDNA3.1(+)的BamHI和NotI酶切位点之间插入了序列表的序列2自5’末端第11至1453位核苷酸所示的双链DNA分子。2、构建重组细胞将步骤1得到的重组质粒转染293T细胞，得到重组细胞。3、制备GP△m蛋白(1)取步骤2得到的重组细胞，在含2％胎牛血清的DMEM培养基培养72h，然后4000rpm离心30min，收集上清液。(2)亲和层析亲和层析的层析柱规格：长度3cm，内径1cm；亲和层析的柱填料：镍柱beads(购自Qiagen公司，产品目录号为30230)；操作步骤：①将300mL步骤(1)得到的上清液上样于亲和层析柱，4℃孵育3小...

【技术保护点】
一种IgG抗体，由轻链和重链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第45‑52位氨基酸残基、第70‑77位氨基酸残基和第116‑135位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列5自N末端第45‑52位氨基酸残基、第70‑72位氨基酸残基和第109‑121位氨基酸残基。

【技术特征摘要】
1.一种IgG抗体，由轻链和重链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2
和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-77位氨基酸残
基和第116-135位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依
次为序列表的序列5自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-72位氨基酸残基和第
109-121位氨基酸残基。
2.如权利要求1所述的IgG抗体，其特征在于：
所述重链为如下(a)或(b)：(a)序列表的序列3自N末端第20-474位氨基
酸残基组成的蛋白质；(b)序列表的序列3所示的蛋白质；
所述轻链为如下(c)或(d)：(c)序列表的序列5自N末端第20-234位氨基
酸残基组成的蛋白质；(d)序列表的序列5所示的蛋白质。
3.编码权利要求2所述IgG抗体的基因，其特征在于：
编码所述重链的基因为如下(1)或(2)或(3)：
(1)序列表的序列4自5’末端第889-2313位核苷酸所示的DNA分子；
(2)序列表的序列4自5’末端第946-2313位...

【专利技术属性】
技术研发人员：张林琦，张绮，史宣玲，王若珂，左亚男，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11